TaqMan (original) (raw)
Les sondes TaqMan són sondes d'hidròlisi dissenyades per augmentar l'especificitat de la PCR quantitativa. El mètode va ser informat per primera vegada el 1991 per l'investigador Kary Mullis de Cetus Corporation, i la tecnologia va ser posteriorment desenvolupada per Hoffmann-La Roche per a assaigs diagnòstics i per Applied Biosystems (que ara forma part de Thermo Fisher Scientific) per a aplicacions de recerca.
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| dbo:abstract | Les sondes TaqMan són sondes d'hidròlisi dissenyades per augmentar l'especificitat de la PCR quantitativa. El mètode va ser informat per primera vegada el 1991 per l'investigador Kary Mullis de Cetus Corporation, i la tecnologia va ser posteriorment desenvolupada per Hoffmann-La Roche per a assaigs diagnòstics i per Applied Biosystems (que ara forma part de Thermo Fisher Scientific) per a aplicacions de recerca. El principi de la sonda TaqMan es basa en l'activitat exonucleasa 5´-3´ de la polimerasa Taq per tallar una sonda de doble marca durant la hibridació a la seqüència objectiu complementària i la detecció basada en el fluoròfor. Com en altres mètodes quantitatius de PCR, el senyal de fluorescència resultant permet mesures quantitatives de l'acumulació del producte durant les etapes exponencials de la PCR; no obstant això, la sonda TaqMan augmenta significativament l'especificitat de la detecció. Les sondes TaqMan van rebre el nom del videojoc Pac-Man (Taq Polymerasa + PacMan = TaqMan), ja que el seu mecanisme es basa en el principi Pac-Man. (ca) Las sondas TaqMan son diseñadas para incrementar la especificidad de la PCR cuantitativa. El método fue descrito por primera vez en 1991 por investigadores de Cetus Corporation, y la tecnología fue desarrollada posteriormente por Roche Molecular Diagnostics para pruebas diagnósticas y por Applied Biosystems para aplicaciones en el ámbito de la investigación. La sonda TaqMan se basa en la actividad exonucleasa 5'-3 'de la Taq polimerasa para escindir una sonda marcada ya hibridada a la secuencia diana. Esta escisión de la sonda permite la emisión de fluorescencia, que, al igual que en otros métodos de PCR cuantitativa, permite obtener una medida cuantitativa de la acumulación del producto durante los ciclos de Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). La gran ventaja de la sonda TaqMan es que aumenta significativamente la especificidad de la detección. Por lo tanto, la fluorescencia detectada en el termociclador de la PCR cuantitativa es directamente proporcional a la del fluoróforo liberado y la cantidad de ADN molde presente en la PCR. Se trata de un método específico cuyo objetivo es la cuantificación de la expresión de genes. (es) TaqMan zundak ren (qPCR) espezifikotasuna emendatzeko diseinatutako dira. Metodo hau Cetus Corporation-ko ikertzaileek 1991ean deskribatu zuten lehen aldiz eta geroago Roche Molecular Diagnostics eta Applied Biosystems empresek garatu zuten, proba diagnostikoetarako eta ikerketarako hurrenez hurren. TaqMan zundak Taq polimerasaren 5´-3´ aktibitatean oinarritzen dira. Zundak itu-sekuentziara hibridatuko dira eta eszisioak fluoreszentzia igorriko du . Modu honetan, beste qPCR metodoetan antzera, polimerasaren kate-erreakzioaren (PCR) zikloetan metatutako produktuaren neurri kuantitatiboa eskuratuko da.Taqman zunden abantailarik nagusia detekzioaren espezifikotasuna nabarmen emendatzen dela da. Hortaz, qPCRaren an detektatutako fluoreszentzia askatutako fluoroforoarekiko eta DNA moldearen kantitatearekiko zuzenki proportzionala da. Metodo espezifiko honen helburua geneak kuantifikatzea da. (eu) Les sondes TaqMan sont des sondes d'hydrolyse conçues pour accroître la spécificité des techniques de PCR quantitative. La méthode a été pour la première fois décrite en 1991 par des chercheurs de l'entreprise Cetus Corporation, avant que le développement de cette technologie ne soit poursuivi par Roche Molecular Diagnostics pour des applications de diagnostics cliniques et Applied Bioscience pour des applications en recherche. Le principe de la sonde TaqMan repose sur l'activité exonucléase 5´–3´ de la Taq polymérase qui clive une sonde marquée lors de son hybridation à la séquence complémentaire permettant l'émission d'une fluorescence. Comme pour d'autres méthodes de PCR quantitative, le signal fluorescent résultant permet une mesure quantitative de l'accumulation exponentielle du produit au cours des différents cycles de PCR. Cependant la méthode TaqMan permet une augmentation significative de la spécificité de la détection. Les sondes TaqMan ont été nommées d'après le jeu vidéo PacMan, le principe de fonctionnement de la méthode se rapprochant du principe du jeu. (fr) TaqMan probes are hydrolysis probes that are designed to increase the specificity of quantitative PCR. The method was first reported in 1991 by researcher Kary Mullis at Cetus Corporation, and the technology was subsequently developed by Hoffmann-La Roche for diagnostic assays and by Applied Biosystems (now part of Thermo Fisher Scientific) for research applications. The TaqMan probe principle relies on the 5´–3´ exonuclease activity of Taq polymerase to cleave a dual-labeled probe during hybridization to the complementary target sequence and fluorophore-based detection. As in other quantitative PCR methods, the resulting fluorescence signal permits quantitative measurements of the accumulation of the product during the exponential stages of the PCR; however, the TaqMan probe significantly increases the specificity of the detection. TaqMan probes were named after the videogame Pac-Man (Taq Polymerase + PacMan = TaqMan) as its mechanism is based on the Pac-Man principle. (en) Sonda TaqMan – sonda zaprojektowana w celu zwiększenia specyficzności ilościowej reakcji łańcuchowej polimerazy. Jej stosowanie zaproponował po raz pierwszy, w 1991, Kary Mullis, a technika została następnie opracowana przez Roche Molecular Diagnostics do testów diagnostycznych oraz przez Applied Biosystems (obecnie część ) do zastosowań badawczych. Zasada sondy TaqMan opiera się na aktywności egzonukleazy 5'-3´polimerazy Taq w celu rozszczepienia podwójnie znakowanej sondy podczas hybrydyzacji do komplementarnej sekwencji poszukiwanej. Detekcja opiera się na użyciu fluoroforu. Podobnie jak w innych ilościowych metodach PCR, uzyskany sygnał fluorescencji pozwala na ilościowe pomiary akumulacji produktu podczas wykładniczych etapów PCR; jednak sonda TaqMan znacznie zwiększa specyficzność wykrywania. Sondy TaqMan zostały nazwane na cześć gry wideo Pac-Man (Taq Polymerase + PacMan = TaqMan), ponieważ jej mechanizm opiera się na zasadzie Pac-Man. (pl) TaqMan è il nome di una serie di sonde utilizzate per aumentare la specificità della real time PCR. Il metodo, descritto per la prima volta nel 1991, si basa sull'utilizzo di un oligonucleotide marcato con un fluoroforo a una estremità mentre nell'altra estremità è presente un quencher. Sfruttando l'attività 5'→3' esonucleasica della Taq polimerasi, dopo la normale fase di annealing della PCR, l'enzima esplica la propria attività esonucleasica scindendo il fluoroforo dal resto della molecola durante l'ibridazione. Pertanto, ad ogni ciclo, dopo irradiazione del campione viene emessa una fluorescenza in quantità proporzionale al DNA target che diviene così facilmente quantificabile. Quando invece il fluoroforo si trova vicino al quencher quest'ultimo ne smorza l'emissione di fluorescenza tramite trasferimento di energia per risonanza. Il nome TaqMan deriva dal videogioco Pac-Man (Taq polimerasi + PacMan = TaqMan) richiamandone il principio di funzionamento. La tecnica trova comunemente utilizzo in biologia molecolare e nella diagnostica di laboratorio di diverse malattie infettive. (it) |
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