ChIP | molbiol.ru (original) (raw)
����������, �����������, �������
Lyubov /19.08.2004 19:28/
��������� �������!
������ XChIP (��������-������������������) � ����, ��� ���������� ���������� ���������� ������������� � ������ � ���� �� ���������� �������� ������ ���������� ���� �� ����� (� 2-4 ����). ��� ���������? � ��� �������� �����������������?
������� ������ ������, ��� ���� ������ ��������-�����������������. ������ � ��� ���������� � ��������� ������� ����� 30%.
���������� ��� ����������� real-time PCR � ��������� �� Input.
�������.
Sergey S /20.08.2004 00:29/
�� ������� ChIP �������? � ��������������� ���������?
����� ������ ��� ������ - � ��� �� ���������������? � ���� � ���� ����� ��������, ������� �����������, ����������� ���������� �������/���������� ���������. � ��� ��, ���� �� ������, ��������: ������������� ���������� ������ ����� �� ������ ��� ������ ����������� - �� �����������? � ��� ���������� ���������� ��� ����� ���� � ������������ ��� � ������?
Sergey S /20.08.2004 00:32/
��, ��� ���� ������: ��� �� ��������� ��������? ������ ��������, �����, ����������� � ����� ���? ��� �� � ��� ��� �����-�� �������������� ���� ����?
Lyubov /20.08.2004 12:10/
��, � ����� ChIP � ��������������� ���������.
����� ��������, ������� ����������� � ����������� ���. �������/���. ��������� ��������� �� ���� �������������.
���� ������������ - ���������� ���������� ������� �����, ������������ � ������ �������� ��� ����� ����������� ���������� ���, ������� ���� ����� ���������� � IP-������������. �.�. � ������ ������ �����������-�� �����������. ���������� ��� ����� IP � � Input ��������� ��� ������ real-time PCR, Input (��� �� ������ �� ������ "�����������" ���������, ��� ������� � �� IP) ��� ���� ���������� � 10 ��� � � PCR ������� ��� �� �����, ��� � ��� �� IP.
�������� ������� �� ����������� �����: ��������, �����, �����������, �������, � ����� IP.
Sergey S /20.08.2004 14:24/
��, ����� ������ ������: ��� �� �������� ����������? ������� ����������� IP/input ��� ������ �������. ��� �������������� ��� �����-�� ����������� (������ ���) �������? � ���������� �� �� �������� ��� ������� (���������� ���������)?
Lyubov /20.08.2004 15:18/
��, � �������� �������� ������������ IP ��� �������.
������������ ����� �������� ��� ��� � ������������ ����������. � ��������� ��� IP/Input ������������ ��� ����, ����� ����� ���� ���������� ������, ����������, ��������, ��� ������ �� � ����� ��������� ���� ��� ������ � ���� �� �����. � ����� ����� ������������ �������� � ���������� ������, ������������ ��� IP �� ������������ � ������������.
Sergey S /20.08.2004 16:03/
���������� ���������� ������������ -Ab - �� �����, �� ������ �������. ��� ���������� ��������, ������� "������", ������� �� ��������� � ���� �������� ����� ����������� � ������ �������������. �� ��� �� � �����, ��� �� �� ����� �����. ��������, � �������� ��������: � ����� �� ��������� 40 ��������� ������� ���, � � -Ab �� 2� �� 4�. ��: 40/2=20, � 40/4=10. ��� ��� � ��� ���� �������
��� �� � �����:
1. ��������� ������, ��� ��� �������, ����� "�����������" ������������������. � ���� � ���� �����-���� ������� ���, ��� ��� ����� ����� �� �����������. � ����� ������ �� �������� ���������� ��� IP������/IP��������, �.�. ��������� ���������� "���������" ������������������ (������� �� ����������) � ���������� "�����������" � ����� IP.
2. �� �� ����� �� ������� ��� Input. ��� ����� ��� ����, ����� ������, ������ ������ ���� ������ ����������� � ����� (��� ����������� � �������� ����������� � ������������� ��� ��� ������ ���� ���������).
3. �������������� ��� ��������� � -Ab ��������. �������� ���, ��� �� ����������� ������� �� ����� (��� ������ ���� ����� �� ��� � � Input), �� ����� �������� ����������� ��� ������ ���� �� ����������� ��������� ������������������ � ���� ��������� � �� ������������ � -Ab. �� �� ����� ��� "�����������" ������������������.
�����, ��� ��� �������� ������ ��� ��������
� ��������� ����� ��. ������ ��� �������.
Sergey S /20.08.2004 16:17/
����, ����� ����-����� �� ���������:
������ ��������
Input 100 80
Ip 40 13
-Ab 5 3
�������������, ��� ������: 100/80=1.25
��� IP: (40 - 5)/(13-3)=3.5
����������: 3.5/1.25=2.8
����������, ��� ����-����� ��� ����� ���-�� ������������ ��� ������ ��, �� ��� �� ������� ��� ����� �������
���� �������, ��� ��������� ����������� ���� ���������� Input ����� �� ����������� ��� � IP (��������� ���, �����������). �� ��� ����� �����: ����� �������������� ��������� - ���� �� SYBR Green, � Pico Green (��� �� Molecular Probes); PlateReader (���� ����� � �� ������� ���-��, ��������).
� ��� ���� ��������, ��� ���� � ��� ������� � ���������� ������ ����� ������� ���������� ������, �� ��� ��� �� ��������, ��� ������� ���������������
�����. ���� ��� ���� - �����������.
Lyubov /23.08.2004 11:39/
Sergey S /23.08.2004 15:50/
����������. �����������
a11 /23.08.2004 20:33/
>�� ��� ����� �����: ����� �������������� ��������� - ���� �� >SYBR Green, � Pico Green (��� �� Molecular Probes).
��� ������ ��������, ��� ��� ���� � �� ��
�� ��, � �� ����.
� �� ����� ���������� ��������� �������������: ���� ��������� �����������, ����� ��������������� �� ������ �� input, �� � �����-������ ����������� ������������������.
� ���� ������������ ������ �� input, �� ����� ����� ������ ������������.
������, � �������� ������������ �� ��������� real-time PCR? � �� ����������� �� ����� ���� �� ��� �� ������.
[����� �������� � ���������]
Sergey S /24.08.2004 00:57/
2 �11:
��� ������-�� ������ � ������, ��� ����� ����� ����� ����������� ���� �����-�� ������� � ����������������. �� ������ ��������, ��� ��� ��� ���� ���� � �����-�� ��� ���������
Nameless /06.06.2008 00:25/
���� ��� ����� ����������� �������, ������� ����� �������� �� ������� � �����������������.
1. � ��������� ������� ����� ��������� ���������������� ������, ��������, ������ � ��� ���������� �������� ����������� � ������������� � ������ ������ ���������� ��������� ����� ����������. ��� ����� ��������� ��� �������������, ��� ��� ������ ������ ��������� ��������� ������� ��-������� (���, � �����-��, ����� ����� �� ������). � ������ ����� OD600 � ������� ������ �����-������� �� �������� ����� ��������� ����� ��������������. ��� ����� ������� �������� �������� � input.
2. ����� ����� ��������� ������������ ��������� � IP ������ � ������ ������. � ���������� �� OD280, ����� ��� ������ ���� PAAG � �������� ������� �����, �� ������� ���� ������.
3. �� ���������� � ������ ������ �������� �� ������ �������, ��� ����� �������������, ��������� � �������������� ������� ������ ���������� ��-�������, ���� ���� ����� � ����� ������� � ��������� ���������! ���� ����� - �������� ��������� ������� ��������, �� ������ ���� ����������� ��������� ��� ������ �����. �� �� ����������� � ��� ������ ������� ��������, ������� � ���� ��������� ���������.
4. ����� ������ ��� ������� BSA � salmon DNA �����, ��������, ������� ���� ������������� ������������������. ��� ������� ��������, ��� ������ ��� �������� �� �����.
5. ����������� � �����-������ ���������� ����� �������� ����������� ������ ��� ����� ���������� ������ ���� �� �������� �� ����, ����� ������� ���� �� �� ������������ ����� ������ ���������, �� ������� ������ �� ���������� � �����. ���������� ����� ������ ����������� ����������� �������� � ������������� ������� ���� ���. �� �������� �������� ������� ������� � ������� ����� ����� ������������� ����� �������� ������ � ������ ��������.
6. ������ ���������� ����������� ��� ��������� �������, �������� ��� ������ ��� ����� - ���������� ����� �������. � ��������� ���� � ��� �� ����� ��������� ���, ����� ������� ������������ �������� ��������� ��� ����� � �������.
7. ��� ������ ������������ (������ ��������) ����� ����� ��������� ����� ������, � ��� ����� ����������� ����� ������ � ������ ������, ��� �������� � ��������� ������. � ������ �� ��������� ����������� �� �����, �������� ����� 40-50 ��� ����� ������ �������� ��� �������, �� ������� ���� ������ ������, ��������� ������� ������ ����� ��������� ��������.
8. E�� ��������� ����. ������, � ��� 20 ����, �� �� ���������, ������ �� �����, ����������� ����������� � ���������� ��������� ����������� �����. ���� �� ������� �� 20 �����, ����� ��� ������� ������������, ��� ��� ������ ���������, � �� �������� ������ � ������������� ������� ������, ��� �� ������ �����. �������������� ���� ����� ����� ���������� � ������ - IP � ��������� �, ����� �� �������������� ������, � ��� ��������� ���� ������ ���������� ���������, ��� � ����� 20 - IP � ��� �� ���������, ����� �� ������������ ������. ������� � ��������� ����� �� ��������� ����� ������ � ���������� ����� � ����� ������� ��������� ���������� ������ ����� ��� ���������.
9. �������, ��� input, ������� �� ������������� ����������� � ���������� �������, �������� � ����� ��� ������ ������� DNA � �� ����� ����� ��������������� IP-���� �����. ������������� ����� ������� � �������� �������� �������� �� ����� ���������� ���������� � ���������� �������. ������������� ��� ����� �������� �� IP-����, ������� �� ����� ���� ����������� ��������, ����� - ������ � ������ �������, ������� ��� ���������� ��������. ��� �� ������ ��������� � ����� �����, ���� ����������� ���������� ���� ��� ������� PCR, ��� ��� ������� � ��������� �� ��� ��� ������.
10. � �� �� �� ��������� ������������ �� ��������� �������, � ���������� ���� ��� ������� PCR. ������ ����� ��� ��� ������� ����� ������������� ������� � ��������� ����������� �� (��� H2O, � ��� ��� � ��� ����� ���������� DNA �� ��������� �����) ��� ������������ ����������.
11. ������� ���� �� ��������� ����� ���� � ���� ����� ��� ������� ultrapure � nuclease-free, ����� ��������, ��������� ������ ��� CHIP, ���� ��������� ������ nuclease-free ������ � ���������. ���� � ��� �������.
�����������, �� ������������� - ������������� IMHO, ��� ���������� � �������������, �� ������������, ������� � ����������� ���� ����������� �������� �� � ���� ���� �� ���������. ����� ����� ������������ ��� �������� � ���������, �� ����� � �����, ��� ������� � ����� ��������� � ��������������, � ������� - ����� �������������� � ��������� �������, ����� ���� �� ���� �� ���� ���, � ������. ��-����� ������ �� ���� ������� ����� ���� �������������� �����������, �� � ����� - ������������ ������ ������������� ������.
�������, ����-������ ��� ������ �����������.
�����, ������� � "������", � �� � �����, �� �� �����.
mrotzek /06.06.2008 08:52/
mrotzek /06.06.2008 09:40/
Guest1 /11.06.2008 09:16/
(Lyubov @ 19.08.2004 19:28)
��������� �������!
������ ���� (��������-������������������) � ����, ��� ���������� ���������� ���������� ������������� � ������ � ���� �� ���������� �������� ������ ���������� ���� �� ����� (� 2-4 ����). ��� ���������? � ��� �������� �����������������?
������� ������ ������, ��� ���� ������ ��������-�����������������. ������ � ��� ���������� � ��������� ������� ����� 30%.
���������� ��� ����������� ����-���� ��� � ��������� �� �����.
�������.
�������� � ����� ������� �������� �� 15-30 ����� !!!!!!!!
������� , ��� ������� , ������ ��������� � ������� ���
Nameless /14.06.2008 10:48/
���� ��� ���� �������������� ����.
��� ���� ���������� ���� 1 � 2 ������ ���� �����:
F1=F2
F1=signal1=E_probe1/E(1/100)_probe1
F2=signal2=E_probe2/E(1/100)_probe2
E - ������ �� ���������� ���
E(1/100) - ������ �� ����������� �������
�����:
E(������ �� ���������� ���)=w*D(���-�� ��������� ���)
D(���-�� ��������� ���)=x*P(���-�� ���������� �������� �����)
P(���-�� ���������� �������� �����)=y*A(���-�� ���������� ��������)
A(���-�� ���������� ��������)=z*S(���-�� ������ � �����)
w,x,y,z-experimental constants.
E=w*x*y*z*S
��� ������ ������ �������� w,x,y,z-const
� ��� ���� ���������� ���� E1/E2=S1/S2
�� ���� �������� ������� � ���� ���������� ������ ����� ���� ������ CHIP ������� �� ���-�� ���������� � ������ ����� ������. �� ����� ����, �������, ���� ��� ����� ������ ��������, �� ��-����� ���� ����� ��������� ��� ������������ ����������������� ������, ������� ��� ����� ����� ������ �� �����������. ������ ������, ������, �������� ����������� ����������, �������� ��� ������ ������������ ����� ��������� ��������. ���� �� �������� ������� �� ����� ����� ����������� ���, ��� ��� ��������� �� 10% ������ ������, �� �������� ��������������� ������. �������, ��� �������� ������������ �������� ����������, �� ����� ���������� �������� � ��������, ������ �������� ��� ��������, ���� ���� ��� ����� ����� ��� ����� �������� �� ���������? ����� ��� �� ������������� �����, �� ��� ����� ������� ������������, �������� ���� ������������ ����� ������� � �������.
� ��������� ������ �������� �� ���������� ����� ���� �������� ���-�� ������ � ������, ������ �� ����, ��� ���������� ��������� ��� ����� ���������������. ��� �����, ��� ����� crosslink resolving � ����� ����������� �������� ����� ����� �� 10-20 ��� ������ �����, ������ �� ���� � ���������� ���������� � ��������������� ��������. �����, ��� �������� � ���������, � ����� � ������. ������� ����� ���������������� � ������������ ��� ������������ �������� ������� ��� ������ ����, ��������� ��������� ������� ������������.
��� �������?
��������� �� ���� �����������, ���� ��������� - ������ ��������.
Guest /16.06.2008 14:45/
(Nameless @ 14.06.2008 09:48)
���� ��� ���� �������������� ����.
��� ���� ���������� ���� 1 � 2 ������ ���� �����:
�1=�2
�1=������1=�_�����1�(1/100)_�����1
�2=������2=�_�����2�(1/100)_�����2
� - ������ �� ���������� ���
�(1/100) - ������ �� ����������� �������
�����:
�(������ �� ���������� ���)=�*�(���-�� ��������� ���)
�(���-�� ��������� ���)=�*�(���-�� ���������� �������� �����)
�(���-�� ���������� �������� �����)=�*�(���-�� ���������� ��������)
�(���-�� ���������� ��������)=�*�(���-�� ������ � �����)
�,�,�,�-������������ ���������.
�=�*�*�*�*�
��� ������ ������ �������� �,�,�,�-�����
� ��� ���� ���������� ���� �1�2=�1/�2
�� ���� �������� ������� � ���� ���������� ������ ����� ���� ������ ��� ������� �� ���-�� ���������� � ������ ����� ������. �� ����� ����, �������, ���� ��� ����� ������ ��������, �� ��-����� ���� ����� ��������� ��� ������������ ����������������� ������, ������� ��� ����� ����� ������ �� �����������. ������ ������, ������, �������� ����������� ����������, �������� ��� ������ ������������ ����� ��������� ��������. ���� �� �������� ������� �� ����� ����� ����������� ���, ��� ��� ��������� �� 10% ������ ������, �� �������� ��������������� ������. �������, ��� �������� ������������ �������� ����������, �� ����� ���������� �������� � ��������, ������ �������� ��� ��������, ���� ���� ��� ����� ����� ��� ����� �������� �� ���������? ����� ��� �� ������������� �����, �� ��� ����� ������� ������������, �������� ���� ������������ ����� ������� � �������.
� ��������� ������ �������� �� ���������� ����� ���� �������� ���-�� ������ � ������, ������ �� ����, ��� ���������� ��������� ��� ����� ���������������. ��� �����, ��� ����� ��������� ��������� � ����� ����������� �������� ����� ����� �� 10-20 ��� ������ �����, ������ �� ���� � ���������� ���������� � ��������������� ��������. �����, ��� �������� � ���������, � ����� � ������. ������� ����� ���������������� � ������������ ��� ������������ �������� ������� ��� ������ ����, ��������� ��������� ������� ������������.
��� �������?
��������� �� ���� �����������, ���� ��������� - ������ ��������.
����� ������� ������ � ������� ���-��������-��� �����
1: Science. 2007 Jun 8;316(5830):1497-502.
Genome-wide mapping of in vivo protein-DNA interactions.
Johnson DS, Mortazavi A, Myers RM, Wold B.
Department of Genetics, Stanford University School of Medicine, Stanford, CA, 94305-5120, USA.
In vivo protein-DNA interactions connect each transcription factor with its direct targets to form a gene network scaffold. To map these protein-DNA interactions comprehensively across entire mammalian genomes, we developed a large-scale chromatin immunoprecipitation assay (ChIPSeq) based on direct ultrahigh-throughput DNA sequencing. This sequence census method was then used to map in vivo binding of the neuron-restrictive silencer factor (NRSF; also known as REST, for repressor element-1 silencing transcription factor) to 1946 locations in the human genome. The data display sharp resolution of binding position [+/-50 base pairs (bp)], which facilitated our finding motifs and allowed us to identify noncanonical NRSF-binding motifs. These ChIPSeq data also have high sensitivity and specificity [ROC (receiver operator characteristic) area >/= 0.96] and statistical confidence (P <10(-4)), properties that were important for inferring new candidate interactions. These include key transcription factors in the gene network that regulates pancreatic islet cell development.
Nameless /16.06.2008 21:01/
�� ��� ���� ����� ��� ������� chip-chip a �� chip, � ��� ������� �������� ������ ������.
Guest /17.06.2008 08:03/
(Nameless @ 16.06.2008 20:01)
�� ��� ���� ����� ��� ������� ���-��� � �� ���, � ��� ������� �������� ������ ������.
��� ����� �� ��� ������� ���-��� , ������� ����� ������ �� ����� ,
� ��� ���-���������� �� 20 ��������� "������" � ������� ���� ����������
���������-��������
http://seq.molbiol.ru/ ( http://seq.molbiol.ru/ )
Guest /17.06.2008 08:08/
(Nameless @ 16.06.2008 20:01)
�� ��� ���� ����� ��� ������� ���-��� � �� ���, � ��� ������� �������� ������ ������.
���-����� �������� ������, ������������� � ������������� ������
Nameless /18.06.2008 08:21/
��, � ����� ���� ���-������ �� ��������. ��-�����, ������ ���� ����� ����� �������� � ������� �������.
�� � �� �����, ��� ���� �� �������������� �����. ����, ������, ����� ����������, ��� ���������� ���������� ����������������� ������� � ��� ��� ������ ��������, ������� ��� �����-����� ������������� ����� ������ � ������� ������������ ���. ��� ��� �� ���-��������-��� �� ������
Guest /18.06.2008 08:43/
(Nameless @ 18.06.2008 07:21)
��, � ����� ���� ���-������ �� ��������. ��-�����, ������ ���� ����� ����� �������� � ������� �������.
�� � �� �����, ��� ���� �� �������������� �����. ����, ������, ����� ����������, ��� ���������� ���������� ����������������� ������� � ��� ��� ������ ��������, ������� ��� �����-����� ������������� ����� ������ � ������� ������������ ���. ��� ��� �� ���-��������-��� �� ������
"���-������" (ChIP-on-chip) - ��� ��� ��� � ����������� ������� ����� �� ��������� (����) ���
����. ������� ���� ��������� - ���� - "������� �������������� ��������" �
������� �� ����-���� ��� . ��������� "�����������" ����-���� ��� - "����� ������
�������"
Guest /18.06.2008 09:03/
(Nameless @ 18.06.2008 07:21)
��, � ����� ���� ���-������ �� ��������. ��-�����, ������ ���� ����� ����� �������� � ������� �������.
�� � �� �����, ��� ���� �� �������������� �����. ����, ������, ����� ����������, ��� ���������� ���������� ����������������� ������� � ��� ��� ������ ��������, ������� ��� �����-����� ������������� ����� ������ � ������� ������������ ���. ��� ��� �� ���-��������-��� �� ������
: Methods Mol Biol. 2007;406:365-86.Links
Reaping the Benefits of SAGE.
Robinson SJ, Guenther JD, Lewis CT, Links MG, Parkin IA.
Serial analysis of gene expression (SAGE) is a powerful technique which yields a digital measure of gene expression through the sequencing of libraries of specific mRNA-derived fragments, namely SAGE tags. This chapter introduces the methods and software tools that are available for researchers to analyze gene expression through SAGE analysis. A detailed examination of SAGE analysis in Arabidopsis thaliana using the publicly available analysis tool, SaskSAGE, is provided. The use of this software allows the user to maximize the information gained from SAGE experiments in a model system with a fully sequenced genome.
Guest /18.06.2008 09:12/
(Nameless @ 18.06.2008 07:21)
��, � ����� ���� ���-������ �� ��������. ��-�����, ������ ���� ����� ����� �������� � ������� �������.
�� � �� �����, ��� ���� �� �������������� �����. ����, ������, ����� ����������, ��� ���������� ���������� ����������������� ������� � ��� ��� ������ ��������, ������� ��� �����-����� ������������� ����� ������ � ������� ������������ ���. ��� ��� �� ���-��������-��� �� ������
�� ������� - ����� � �������� "�����������" �������� �������� ������� ��� ��������
����� � ����� ��������� ������
���� 10-20 "����������" ���������
����� /15.07.2008 13:52/
������� ��������� ��� ����� � ������ �������� ��������� �� ����� ��������?
Guest /15.07.2008 14:21/
(����� @ 15.07.2008 12:52)
������� ��������� ��� ����� � ������ �������� ��������� �� ����� ��������?
IP-�����: frDQwa9k7riYg
�����
����������� ��������� 18.07.2005 13:56 ��������� ��� ���������� ��������� ��� �������� ����
���������� ��������� ��������� � ������� �������� URL #1 ������������� �����������
��������: biotech_27970.gif�������� ������� �������� �������������� � �������������� ������������, �������� � ��������� ���������� ��� ������������ �������� � �����������
�����������. ������� ������������ � ������ ��������� ����� ��������,
���
Eppendorf, Bio-Rad, Labconco, BioSan
Fermentas, Amresco, Invitrogen
SSI, Bioplastics, Omnitip, Unitip
/ �����, #27970 /
119992 ������, ��������� ����, ���, ��� 1, �������� 40
���.: +7 495 933 2736
����: +7 495 930 00 84
E-mail: mail@helicon.ru
���-�����:
http://www.helicon.ru ( http://www.helicon.ru )
�������������: ����, ���������, pH-�����, �������������, ����. ��� �������������, ��������� ����, ��� � ����-���� ��� ������, ������ �����������, �����, ��������������� �������, ����. ��� �������� ������������� � �������������, ����������������, ������������, ������ ������������� ������������, �������������� �������, ����������, ����������, ������������, ������������, ������������ ��� ��������, ����. ��� ������� ����, ����, ��������, ������ ���������, �������� ����, ���������� ��� �������� � ������, �������, ��������. ������, ����������, �������, �����������������, ������������, ��������� ��, ���������������, �����������, ��������� ������������, ������, ������ ��������������� ������������, ���. ��������, �������� � ���� ��� ���. ��������, �������� ��� ����� � ���������� ������, ����� (���������, ������������� � ��.), ������� (���, ���, �����), �������, ��������, �������, ������ ��������� ���������
��������� ������������: ������
��������� ���� ��������������� Helicon - 30.07.2007 15:52
����� /27.10.2008 16:45/
>>>�������� "�������������" ��� �������-�-��������
���������� ���������� ��� ������ ��� ����������?
���� ������ �� ��������
chatter /27.10.2008 18:54/
(����� @ 27.10.2008 16:45)
��>>>�������� "�������������" ��� �������-�-��������
���������� ���������� ��� ������ ��� ����������?
���� ������ �� ��������
��������� ���� ����������� ������� ������ � �� ������� �������� +4� � 5% ���, ����� ������ ��� �� ������� 3-5 ��� (� ����������� �� ����)
Sergey S /27.10.2008 20:15/
�, ��������, ����� �������� �� �� �����, �� � ������� ����
chatter /27.10.2008 20:21/
(Sergey S @ 27.10.2008 20:15)
���, ��������, ����� �������� �� �� �����, �� � ������� ����
� ����������� �� ���� ���������� �� ����� ���������
watchesbiz /03.01.2022 09:54/