Alejandro García | Instituto universitario CEMIC (original) (raw)

Papers by Alejandro García

Amplificación del oncogén Her-2/neu en el carcinoma mamario La determinación del estado de amplif... more Amplificación del oncogén Her-2/neu en el carcinoma mamario La determinación del estado de amplificación génica del Her-2/neu es crucial en el cáncer de mama porque permite seleccionar pacientes que se beneficiarían del tratamiento con trastuzumab. El trastuzumab es un anticuerpo monoclonal diseñado específicamente para reconocer y unirse a la proteína HER2. Según trabajos clínicos publicados, reduce un 50% el riesgo de recurrencia del cáncer en estadio temprano (utilizado en adyuvancia durante el lapso de un año) 1 y reduce un 20% el riesgo relativo de muerte en pacientes con cáncer de mama metastásico (asociado a quimiotera-pia vs. quimioterapia solamente) 2. La amplificación del oncogen Her-2/neu determina que cada copia del gen puede ser transcripta y traducida llevando a una sobre-producción de ARNm y de la proteína correspondiente. La célula normal que expresa HER2 posee amplifica-ción del gen Her-2/neu y alrededor de 50 000 copias de la proteína en la membrana celular 3. Las células tumorales pueden tener un incremento en el número de receptores a nivel de la membrana citoplasmática de hasta 20 veces sobre el valor normal, conduciendo a la célula a un crecimiento descontrolado. La amplifi-cación/sobreexpresión de oncogén en el tejido tumoral mamario es positiva en el 25-30% de los casos 4. Existen diferentes maneras de detectar la amplificación del gen Her-2/neu o el incremento en la expresión de la proteína HER2 en el tumor. Si se quiere detectar la amplificación génica se puede utilizar Southern Blot, hibridación in situ fluorescente (FISH) o PCR; para el aumento del trancripto Northern Blot, y para el aumento de la pro-teína HER2 Western Blot o inmunohistoquímica (IHQ). La técnica elegida por los laboratorios de Anatomía Patológica por ser costo/beneficio sustentable es la IHQ. Las limitaciones de este método se ven reflejadas en un grupo de tumores con resultado indefinido 2+ (resultados intermedios entre positivos 3+ y negativos 0/1+). En estos casos se recurre al FISH considerado método gold standard. Diseñamos un ensayo en CEMIC con el objetivo de analizar las dificultades y accesibilidad de la hibridación in situ cromogénica (CISH) en relación al FISH. EL CISH es una técnica de hibridación que permite ver señales de amplificación del gen conjuntamente con la morfología del tejido. Fueron seleccionadas 30 muestras, de un total de 210, con cáncer primario de mama con resultado equívoco de IHQ (2+) e informe confirmatorio de FISH. A esta población se le realizó CISH para Her2/neu por duplicado (sonda SP•T-Light ® HER2 Zymed, Hannover, GE). A partir de los resultados de este estudio trans-versal, se realizó el análisis estadístico para evaluar la exactitud diagnóstica del test. Dos casos no amplificados por FISH resultaron amplificados en forma baja con CISH (11% de falsos positivos) (Tabla 1). La sensibilidad del CISH con respecto al FISH fue de 100% al no hallarse resultados falsos negativos. La especificidad fue del 80%. La concordancia entre FISH y CISH fue de 24/26, es decir que la exactitud global del CISH con respecto al gold standard fue de 92%, teniendo en cuenta los casos que resultaron evaluables por CISH y descartando los no reactivos. En conclusión, y como ya fue demostrado en otros estudios, la exactitud global del CISH resultó comparable al FISH 5, 6. Nuestra experiencia al iniciarnos en la técnica de CISH puede ser de utilidad para otros laboratorios cuando se trata de optar por uno u otro método. El CISH no requirió equipamiento costoso, solo se utilizó un microscopio óptico que se puede encontrar presen-te en cualquier laboratorio de Anatomía Patológica, y además facilita la lectura de los resultados al poder apreciar simultáneamente la morfología del tejido. Por el contrario, la técnica FISH implica utilizar un microscopio de fluorescencia no accesible para la mayoría de los centros en nuestro medio. Observar la morfología del tejido con la técnica CISH nos permitió asegurar que las señales provenían del componente infiltrante del cáncer y encontrar las células neoplásicas cuando se disponían aisladamente. Por otro lado, permitió utilizar células normales del tejido mamario o linfocitos acompañantes como controles negativos intrínsecos. Si bien el CISH TABLA 1.-Resultados de la amplificación del gen Her-2/ neu en 30 muestras de cáncer de mama primario mediante FISH y CISH.

We studied 53 samples of cerebrospinal fluid (CSF) by cytologic examination and immunophenotyping... more We studied 53 samples of cerebrospinal fluid (CSF) by cytologic examination and immunophenotyping by flow cytometry. The samples were taken from 43 patients; 25 had a previous diagnosis of malignant lymphoma/leukemia and the remaining 18 a variety of other diseases involving the central nervous system (CNS). Lymphoma/leukemia was detected in 21 samples: 12 by morphologic examination and immunophenotyping and nine by immunophenotyping alone. There were two cases with a suspicious morphologic examination and negative immunophenotyping in which the final diagnosis were cryptococcal and viral meningitis. In the group of 18 patients, one was diagnosed as a primary malignant lymphoma of the CNS and was positive with cytology and immunophenotyping. The other 17 were negative with both methods and follow-up showed no evidence of lymphoma/leukemia. This study shows that morphologic examination combined with flow cytometry enhances the detection rate by 75% over morphologic examination alone in CSF samples.

Natural killer (NK) cells are capable of lysing certain tumor cells in vitro. We investigated whe... more Natural killer (NK) cells are capable of lysing certain tumor cells in vitro. We investigated whether the percentage of NK cells (NK%) in serous effusions has any relation with the presence of malignant cells. Fresh effusions were routinely processed, and a portion of them was submitted for lymphocyte immunophenotyping, using a flow cytometer. Fifty-one fluids (15 peritoneal, 36 pleural), from 47 patients were analyzed. Thirty-two cases were negative and 19 were positive for neoplastic cells: there were 13 adenocarcinomas, 2 malignant mesotheliomas (MM), 3 malignant lymphomas (ML), and 1 rhabdomyosarcoma (R). Negative cases showed an average NK% of 5.09% (1-16%). Effusions positive for adenocarcinoma had an average NK% of 22.08% (12-33%) (P < 0.001). MM, ML, and R had a low NK%, with an average of 3.01% (0-5%). Investigation of the NK% could be useful in cytologically doubtful cases and in the differential diagnosis between MM and adenocarcinoma.

Background: The purpose of this study was to analyze by molecular biology techniques (MBT) the pr... more Background: The purpose of this study was to analyze by molecular biology techniques (MBT) the presence of RNAm of mammaglobin (MAG) A and B in breast sentinel lymph nodes (SLN) by RT-PCR, and to correlate these findings with breast tumor characteristics. Methods: SLN from 51 patients with breast tumors smaller than or equal to 3 cm, with no palpable axillary lymphadenopathies were included. Hematoxylin-eosin (HE), immunohistochemistry study (IHC) and MBT were performed. Patients' staging was assessed according to Saint Gallen's Consensus. Twenty-five patients had clinical follow-up. Results: HE showed metastasis in 4/51 cases, 5/51 were detected with IHC, and one of them negative for HE. MBT allowed the detection of 18/51 positive SN, which included the 5 above-mentioned cases. The other lymph nodes herein studied (33/51) showed no metastases with MBT. Patients' mean age was 58 years, tumor's mean size was 0.96 cm. The average follow-up was 15 months (range: 1-29 months). The patient with a recurrence at 23 months of clinical follow-up was found to be the only one with HE (+), IHC (+), MAG-A (+) and MAG-B (+). Conclusions: SN study with HE fails to identify all SN with metastases. Immunohistochemistry and MBT increase metastasis detection. Multiplex RT-PCR technique for A and B MAG proves to be specific and sensitive. No direct relationship was found between the risk factors analyzed and the expression of MAG. Therefore, MAG could be used independently as a prognostic factor. The presence of hidden metastasis plays a significant role mainly in the overall survival rate of pre-and postmenopausal patients. This study will be useful to formulate hypotheses. Further research, including a larger population and a longer follow-up period, will be required to confirm these hypotheses. Should our findings be confirmed in the future, molecular biology determinations could modify patients staging and treatment.

Background: After skin cancer, breast cancer is the most common malignancy in women. Tumors of un... more Background: After skin cancer, breast cancer is the most common malignancy in women. Tumors of unknown origin account for 5-15% of malignant neoplasms, with 1.5% being breast cancer. An immunohistochemical panel with conventional and newer markers, such as mammaglobin, was selected for the detection of neoplastic cells of breast origin. The specific objectives are: 1) to determine the sensitivity and specificity of the panel, with a special emphasis on the inclusion of the mammaglobin marker, and 2) to compare immunohistochemistry performed on whole tissue sections and on Tissue Micro-Array. Methods: Twenty-nine metastatic breast tumors were included and assumed as tumors of unknown origin. Other 48 biopsies of diverse tissues were selected and assumed as negative controls. Tissue Micro-Array was performed. Immunohistochemistry for mammaglobin, gross cystic disease fluid protein-15, estrogen receptor, progesterone receptor and cytokeratin 7 was done.

Para el tratamiento de la Enfermedad de Chagas existen las drogas Nifurtimox y Benznidazol (Bz) a... more Para el tratamiento de la Enfermedad de Chagas existen las drogas Nifurtimox y Benznidazol (Bz) ambas con efectos adversos. Es necesario orientar la búsqueda de drogas tripanocidas identifi-cando un blanco molecular esencial en el Trypanosoma cruzi (T. cruzi) y ausente en el huésped. La tripanotiona reductasa es una enzima vital en el parásito, que participa en el sistema de reduc-ción de peróxidos. El antidepresivo tricíclico Clomipramina (Clo) inhibe a la tripanotiona, produciendo la muerte del parásito. Este trabajo plantea como hipótesis que la utilización simultánea de dos drogas con diferente mecanismo de acción optimiza el tratamiento. Como objetivo principal, se propone evaluar el efecto simultáneo de la administración de Bz (100, 50 mg/kg/día) y Clo (5mg/kg/día) en la etapa aguda, en ratones albino suizos(n=105), infectados con el aislamiento SGO Z12 de T. cruzi. Los grupos fueron: no infectados (NI), infectados no tratados (INT), tratados con Bz, Bz/2, Clo, Bz+Clo y Bz/2+Clo. Las drogas se administraron du-rante 30 días post infección.Todos los tratamientos produjeron una disminución significativa de la carga parasitaria, no observándose parásitos en los tratados con Bz, Bz/2, Bz+Clo y Bz/2+Clo. Por PCR se obtuvieron resultados positivos para Clo, Bz/2 y Bz/2+Clo indicando que aunque en pequeñas cantidades, el parásito aún se encontraba presente. En vellosidades de intestino de tratados con Bz se observaron leves alteraciones e infiltrados inflamatorios, también se encontraron hepatocitos necróticos y células inflama-torias dispersas. En tratados con Bz/2, Clo, Bz+Clo, Bz/2+Clo no se encontraron alteraciones histológicas. A los 30 días se obtuvo una sobrevida del 100% con los tratamientos Bz, Bz/2, Bz+Clo y Bz/2+Clo, del 70% con Clo y un 20% en INT. Por lo tanto las combinaciones de Bz y Clo en sus distintas dosis han mejorado el tratamiento ya que a pesar de no eliminar completamente al parásito, no se observaron daños en los tejidos analizados. 002. (210) LAS CÉLULAS PERIVASCULARES DE CORDÓN UMBILICAL HUMANO (HUCPVC) DEMUESTRAN UNA MEJOR REPROGRAMACIÓN HACIA CARDIOMIOCITO Y FUNCIÓN CARDIACA EN UN MODELO DE INFARTO AGUDO DE MIOCARDIO Las células perivasculares de cordón umbilical humano (HU-CPVC) son una fuente alternativa de células mesenquimales estromales (MSC) para terapia celular. Se evaluó la habilidad de las HUCPVC para reprogramarse a cardiomiocitos respecto de MSC de medula ósea (BM-MSC) en un sistema de co-cultivo con cardiomiocitos de rata. La sobre-expresión de genes especí-ficos de cardiomiocitos fue significativamente mayor en HUCPVC (p<0,001), asociada a un incremento de los factores de trascrip-ción GATA4 y Mef2c. Si bien las HUCPVC presentaron mayor actividad del promotor de la cadena pesada alfa de miosina (52% vs 29%, p<0,001) y aumento de su expresión proteica (12% vs 5%, p<0,001) ambos estirpes celulares retuvieron los marcadores estromales. Ensayos utilizando transwells demostraron que la reprogramación estaría mediada por factores solubles y que el aporte del contacto celula-celula es limitado. También se evaluó la regeneración cardiaca por administración intramiocardica en un modelo de infarto agudo de miocardio en ratones. La función cardiaca fue superior en los grupos que recibieron terapia celular respecto del control, pero las HUCPVC mostraron mayor beneficio que las BM-MSC (40% vs 18%, p<0,05) dado por un incremento significativo de la angiogénesis (p<0,05). El mejor rendimiento de las HUCPVC estaría mediado por una mayor frecuencia de progenitores multipotentes CD146+ (54% vs 25%, p<0,001) y aumento del largo de telomeros (2,2 veces, p<0,001), actividad telomerasa (2,4 veces, p<0,001) y expresión de los factores de pluripotencialidad OCT4 y NANOG respecto de las BM-MSC. Si bien no se encontraron diferencias en la metilación del promotor OCT4 (51% vs 48%, p=0,59), este mecanismo de regulación epigenetico podría explicar la menor capacidad de diferenciación de las MSC respecto de las células madre embrionarias (<5%). En conclusión, las HUCPVC constituyen una mejor fuente de progenitores estromales con mayor potencial para terapia rege-nerativa del miocardio. 003. (55) TRANSDIFERENCIACIÓN DE FIBROBLASTOS DE PACIENTES CON DIABETES TIPO I HASTA ISLOTES TIPO-PANCREÁTICOS USANDO SOLO AGENTES QUÍMICOS La transdiferenciación celular implica la conversión de una célula desde un linaje a otro sin pasar por estadíos de pluripo-tencialidad. Hoy la transdiferenciación celular se logra median-te estrategias de transgénesis. El objetivo de este trabajo fue transdiferenciar fibroblastos de pacientes con diabetes Tipo I hasta células tipo-pancreáticas usando solo agentes químicos. Para ello se tomaron biopsias de piel de dos pacientes, se ex-pandieron in vitro y se cultivaron durante 30d con IGF1, FGFb, Nicotinamida, Exendin-4, ITS, B27 y glucosa. Las células adop-taron una morfología tipo-islote pancreático y expresaron PDX1, NGN3, GLUC, STT e INS por RT-PCR. Mediante microarrays detectamos sobreexpresión global de genes pancreáticos y genes remodeladores de la cromatina (ej: INSIG1, NKX2.2, LOC651872, TGM2, TGF-b, Nestin, BMPs y SMADs) y sub-expresión de ge-nes relacionados con fibroblastos (ej: CD34, Elastin, FilaminB, COL12A1 y COL8A1). Por qPCR observamos que en las células transdiferenciadas GLUC e INS estan sobreexpresados y ASPN y MEOX2 (genes típicos de fibroblastos) estan sub-expresados más de 10-veces. Hallamos hipometilación en los promotores de INS y PDX1 por secuenciación de ADN bisulfito (ver resumen 539) y la inmunocitoquímica para GLUC e INS fue positiva en las células transdiferenciadas. No hubo expresión del plásmido OCT4-GFP en las células transdiferenciadas y los promotores de OCT-4 y NANOG estan isometilado respecto al control, demostrando no-totipotencialidad. Por medio de bandeo-G obtuvimos cariotipos normales descartando daños debido al tratamiento y hubo 100% de coincidencia en los microsatélites con los fibroblastos paren-tales descartando contaminación. En este trabajo demostramos por primera vez que es posible transdiferenciar fibroblastos de

[ Research paper thumbnail of Lymphoid and myeloid neoplasms involving cerebrospinal fluid: comparison of morphologic examination and immunophenotyping by flow cytometry. [Indexed for MEDLINE](https://attachments.academia-assets.com/60594352/thumbnails/1.jpg)

Resumen El cáncer colorrectal es el tercer cáncer más frecuente en hombres y el segundo más frecu... more Resumen El cáncer colorrectal es el tercer cáncer más frecuente en hombres y el segundo más frecuente en mujeres, con una incidencia mundial aproximada de 1.2 millones de casos nuevos por año. Nues-tro objetivo primario fue estudiar la relación existente entre las características clínico-histológicas en individuos con cáncer colorrectal y el estado mutacional de los codones 12 y 13 del gen KRAS (7 mutaciones validadas), con el fin de hallar un marcador histopatológico para los tumores mutados. El objetivo secundario fue determinar cuántos pacientes tenían mutaciones adicionales en los codones 15 y 61 del gen KRAS y 600 del gen BRAF que podrían modificar el fenotipo tumoral. Fueron seleccionados 60 individuos con cáncer colorrectal (30 wild-type y 30 con mutaciones validadas en los codones 12 y 13 del gen KRAS). Se amplificaron y secuenciaron del gen KRAS los exones 2 y 3, y del gen BRAF el exón 15. La información recolectada se examinó mediante un análisis descriptivo, análisis univariado y/o análisis multivariado, según correspondiese. En conclusión, no se encontró relación entre las características clínico-histológicas de los tumores de individuos con diagnóstico de cáncer colorrectal y el estado mutacional de los codones 12 y 13 del gen KRAS. No hallamos un marcador histopatológico para los tumores mutados. En pacientes con adenocarcinomas colorrectales avanzados y KRAS wild-type resulta de interés considerar el estudio del codón 600 del gen BRAF. Abstract Clinical-pathological features and gene profile in colorectal cancer. Colorectal cancer is the third most frequent cancer in men and the second most frequent in women, with a worldwide incidence of approximately 1.2 million new cases per year. Our primary objective was to study the relationship between clinical and histological features of individuals with colorectal cancer and the mutational status of codons 12 and 13 of the KRAS gene (7 validated mutations), in order to find a histopathological marker to mutated tumors. The secondary objective was to determine how many patients had additional mutations in codons 15 and 61 of the KRAS gene, and codon 600 of the BRAF gene, which could modify the tumor phenotype. Sixty individuals with colorectal cancer (30 wild-type subjects and 30 with validated mutations in codons 12 and 13 of the KRAS gene) were selected. Exons 2 and 3 of the KRAS gene, and exon 15 of the BRAF gene were amplified and sequenced. The data collected were reviewed by a descriptive, univariate and/or multivariate analysis, as appropriate. In conclusion, no relation was found between clinical and histological features of individuals with colorectal cancer and their mutational status for codons 12 and 13 of the KRAS gene. This suggests that those easily available data do not allow predicting the response to anti-EGFR therapy. In patients with advanced colorectal adenocarcinomas and KRAS wild-type status, further study of codon 600 of the BRAF gene could be required. El cáncer colorrectal es el tercer cáncer más frecuente en hombres y el segundo más frecuente en mujeres, con una incidencia mundial aproximada de 1.2 millones de casos nuevos por año. Según la Organización Mun-dial de la Salud, aproximadamente 608 000 personas mueren anualmente en el mundo por esta causa, lo cual representa el 8% de las muertes por cáncer, siendo esta la cuarta causa más común 1. En la enfermedad metastásica se recomienda utilizar como tratamiento complementario a la cirugía agentes quimioterápicos que han logrado en las últimas décadas aumentar la supervivencia global y el tiempo libre de enfermedad. El receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGFR) representa un blanco importante en el tratamiento del cáncer, ya que su activación por parte de su ligando, el factor de crecimiento epidérmico (EGF), desencadena una cascada de reacciones intracelulares involucradas en el crecimiento y proliferación tumoral así como en los procesos de angioinvasión y metástasis 2. En la última década se agregaron anticuerpos monoclonales, como por ejemplo el cetuximab o panitumumab (anti-EGFR)

Resumen Estudios recientes sugieren que la sobreexpresión de p16, determinada por inmunohistoquím... more Resumen Estudios recientes sugieren que la sobreexpresión de p16, determinada por inmunohistoquímica, sería un marcador específico de células escamosas displásicas y neoplásicas con alta asociación con HPV de alto riesgo. Nuestro objetivo fue correlacionar los hallazgos cito/histológicos con la expresión de p16 y el subtipo de HPV por PCR. Seleccionamos 95 biopsias de cuello uterino y 4 legrados endocervicales de 99 individuos, y 30 extendidos cervicovaginales de otros 30 individuos, que se dividieron según el diagnóstico morfológico. Inmunomarcamos cortes del material incluido en parafina y los extendidos con el kit CINtec™ p16INK4a (DAKO). Evaluamos HPV por PCR utilizando 25/99 biopsias con lesión intraepitelial escamosa de bajo grado. Ob-servamos marcación positiva para p16 en 1/35 biopsias (2.9%) y 1/11 extendidos (9%) en los grupos sin HPV ni displasia; 16/25 biopsias (64%) y 6/10 extendidos (60%) en aquellos con lesión de bajo grado y 38/39 biopsias (97.4%) y 8/9 extendidos (89%) en los grupos con lesión de alto grado y carcinoma escamoso. Todas las mues-tras con HPV-6/11 fueron negativas o positivas focales para p16, en tanto que aquellas con HPV-18 u otros subtipos fueron mayoritariamente positivas de tipo difuso. Concluimos que la expresión de p16 presenta alta correlación con el diagnóstico cito/histológico y alta asociación entre la marcación difusa y la presencia de HPV de alto ries-go, aportando mayor objetividad en casos dudosos y ayudando a seleccionar grupos de individuos con riesgo de progresión de enfermedad, con un costo aceptable para estudiar grandes grupos. Palabras clave: p16, cuello uterino, HPV, PCR Abstract Immunohistochemistry of p16INK4a in biopsies and cervicovaginal smears, and its correlation with HPV detected by PCR. Recent studies suggest that p16 overexpression determined by im-munohistochemistry would be a specific marker for neoplastic and dysplastic squamous cells associated with high-risk HPV. The purpose of this study was to assess the correlation between cyto-histological findings, p16 expression and HPV subtype. A total of 99 biopsies were selected, 4 endocervical curettages and 95 uterine cervix biopsies, as well as 30 cervicovaginal smears from other 30 patients. The samples were divided according to the morphological diagnosis. Paraffin-embedded sections and cervicovaginal smears were immunostained using the CINtec™ p16INK4a Cytology Kit (DAKO). HPV was analyzed by PCR in 25 of the 99 biopsies with low-grade squamous intraepithelial lesion. Among those patients with neither HPV nor dysplasia, 1 of 35 (2.9%) biopsies and 1 of 11 (9%) smears were positive for p16. Sixteen of 25 (64%) biopsies and 6 of 10 (60%) smears of the low-grade lesion cases, and 38 of 39 (97.4%) biopsies and 8 of 9 (89%) smears of the high-grade lesion and squamous carcinoma were positive for p16. All cases of HPV-6/11 were negative or focally positive for p16. Most cases of HPV-18 or other subtypes were diffusely positive. Our results indicate that p16 expression is highly correlated with cyto-histological diagnosis, and is associated with diffuse staining and high-risk HPV. This technique provides greater objectivity in doubtful cases, and helps select patients at risk of disease progression at an acceptable cost when used in large populations.

Resumen Algunos procesos linfoproliferativos B CD5+ son de difícil diagnóstico diferencial como e... more Resumen Algunos procesos linfoproliferativos B CD5+ son de difícil diagnóstico diferencial como es el caso del linfoma del manto (LM) y la leucemia linfocítica crónica atípica (LLCA). El motivo del presente estudio fue correlacionar los hallazgos morfológicos, la detección de ciclina D1 (cD1) por inmunohistoquímica (IHQ) y el inmunofenotipo por citometría de flujo (CF) con los resultados obtenidos por biología molecular en este tipo de neoplasias. Se estudiaron 20 muestras clasificadas como procesos linfoproliferativos B CD5+ por CF. Se realizó la determinación de t(11;14) bcl-1/IgH por PCR. El estudio histopatológico e IHQ para cD1 se efectuó en 14 casos. Doce casos fueron diagnosticados como LM, con cD1 positiva en 5 (5/9); cinco como LLCA y tres como proceso linfoproliferativo B. Con PCR se observó t(11;14) en 6/12 LM y negatividad en los restantes grupos (0/8). Se pudo demostrar la presencia de traslocación en 7/12 LM mediante IHQ Y PCR: 4 con ambas técnicas, 2 con PCR exclusivamente y 1 con IHQ, evidenciando una alta asociación entre cD1 por IHQ y la detección del gen bcl-1/IgH por PCR, ambas técnicas complementarias en la tipificación de LM. Palabras clave: linfoma del manto, leucemia linfática crónica atípica, ciclina D1, t(11;14)(q13;q32), bcl-1 Abstract Mantle cell lymphoma vs. atypical chronic lymphocytic leukemia. Use of immunohistochemistry, flow cytometry and molecular biology for their adequate typing. The differential diagnosis of certain B CD5+ lymphoproliferative processes, such as mantle cell lymphoma (MCL) and atypical chronic lymphocytic leukemia (ACLL), is difficult. The aim of this study was to correlate morphological findings, cyclin D1 (cD1) detection by immunohistochemistry (IHC) and immunophenotype by flow cytometry (FC) with the results obtained by molecular biology in this type of neoplasias. We analyzed 20 samples classified as B CD5+ lymphoproliferative processes by FC. PCR was used for t(11;14) bcl-1/IgH determination. Histopathological and IHC studies for cD1 were done in 14 cases. Twelve cases were diagnosed as MCL, with positive cD1 in 5 (5/9), five as ACLL and three as B lymphoproliferative process. PCR revealed t(11;14) in 6/12 MCL and negative results in the other groups (0/8). Molecular biology evidenced translocation in 4/5 MCL positive for cD1 with IHC. The presence of translocation could be demonstrated by IHC and PCR in 7/12 MCL: 4 with both techniques, 2 with PCR alone, and 1 with IHC alone. These findings show a significant association between cD1 by IHC and bcl-1/ IgH gene detection by PCR, which implies that both techniques are complementary for MCL typing.

Objectives: The prognosis of breast cancer patients depends on primary tumor resection and axilla... more Objectives: The prognosis of breast cancer patients depends on primary tumor resection and axillary lymph nodes examination. The purpose of this study was to analyze by molecular biology techniques the presence of mammaglobin A and B messenger RNA in breast sentinel lymph node (SLN) by reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). Methods: Sentinel lymph nodes from 50 patients with a diagnosis of breast cancer were prospectively studied between June 2004 and August 2006. Lymph nodes were all examined every 2 mm by intraoperative cytology. Hematoxylin-eosin (HE), immunohisto-chemistry (IHC) with cytokeratin (clone AE1-AE3, DAKO, dilution 1:100), and molecular biology techniques were used in all cases. Results: Deferred study with routine techniques showed subcapsular metastasis in 3/50 cases. Out of 50 cases, 5 were detected with IHC, and 2 of them were negative for HE. Multiplex RT-PCR allowed the detection of 18/50 positive SLN, which included the 5 above-mentioned cases. The other SLN studied (32/50) showed no metastases with the methods herein implemented. Conclusions: The epidemiologic impact of incomplete SLN study has been observed, as the HE technique fails to identify all SLN with micrometastases. In our opinion, SLN should be studied with IHC and molecular biology techniques. The multiplex RT-PCR technique for A and B mammaglobin proves to be specific and sensitive. This study will serve to formulate hypotheses. Further research, including a larger population and a longer-term follow-up period, will be required to confirm these hypotheses. Should our findings be confirmed in the future, molecular biology determinations could modify patients' staging and treatment.

Este pequeño ensayo se basa en un artículo publicado por Gerlinger y Swanton en 2010 1 , en una m... more Este pequeño ensayo se basa en un artículo publicado por Gerlinger y Swanton en 2010 1 , en una minirevisión del tema que resume los conocimientos adquiridos hasta ese año. En la actualidad, el concepto de heterogeneidad tumoral como una de las causas de la adquisición de resistencia tumoral va tomando cada vez más importancia en la era del tratamiento personalizado en base a diversas alteraciones genético/moleculares, al punto según mi opinión de tener que reevaluar desde el punto de vista de los protocolos de Anatomía Patológica la necesidad de un muestreo más eficiente para minimizar el problema de esta variabilidad intratumoral, en que neoplasias (algunas presentan más heterogeneidad que otras), el costo que implicarían esas nuevas estrategias (que en última instancia determinarían su viabilidad), etc. Desde que se publicó este trabajo se ha avanzado mucho sobre el tema, pero me pareció interesante analizar esta pequeña revisión que puede ser de utilidad para los alumnos de pre y posgrado, así como aquellos profesionales que no trabajan específicamente en este tópico. El concepto de heterogeneidad intra e intertumoral (HT) no es un concepto nuevo. Ya en 1976 Nowell planteó la hipótesis de que el cáncer es un proceso evolutivo semejante al planteado por Charles Darwin en "El origen de las especies" en 1859. Allí podemos leer: "Se puede decir que la selección natural se produce cada hora, todos los días, en todo el mundo; cada variación, incluso la más ligera, rechazando lo que es malo y conservando y sumando todo lo que es bueno; trabajando silenciosa e insensiblemente, donde sea y siempre que la oportunidad se ofrezca, para el mejoramiento de cada ser orgánico en relación a sus condiciones de vida". Charles Darwin propuso que la selección natural es el mecanismo. Eso lleva al cambio evolutivo de las especies a lo largo del tiempo. En forma de selección clonal conducente a constantes cambios evolutivos y por analogía explicaría la aparición de resistencia a los medicamentos (en este caso nos referimos a las neoplasias, pero lo mismo ocurre en los microorganismos). Desde entonces se han estudiado los procesos evolutivos en el desarrollo y la progresión del cáncer, lo que ha permitido notables conocimientos sobre su biología. En contraste, nuestra comprensión de la contribución de los procesos evolutivos que llevan al desarrollo de resistencia, a pesar de haber avanzado mucho, todavía existen áreas oscuras. Para mejorar el resultado de la terapia del cáncer, esta reseña resume la evidencia del papel de la evolución darwiniana de tumores durante el tratamiento farmacológico y así poder diseñar estrategias clínicas que ayuden a comprender este proceso en detalle y, en última instancia, a prevenir la farmacorresistencia tumoral.

PLOS ONE, 2016

Mechanisms leading to decreased platelet count in immune thrombocytopenia (ITP) are heterogeneous... more Mechanisms leading to decreased platelet count in immune thrombocytopenia (ITP) are heterogeneous. This study describes increased platelet apoptosis involving loss of mitochondrial membrane potential (ΔΨm), caspase 3 activation (aCasp3) and phosphatidylserine (PS) externalization in a cohort of adult ITP patients. Apoptosis was not related to platelet activation, as PAC-1 binding, P-selectin exposure and GPIb-IX internalization were not increased. Besides, ITP platelets were more sensitive to apoptotic stimulus in terms of aCasp3. Incubation of normal platelets with ITP plasma induced loss of ΔΨm, while PS exposure and aCasp3 remained unaltered. The increase in PS exposure observed in ITP platelets could be reproduced in normal platelets incubated with ITP plasma by adding normal CD3+ lymphocytes to the system as effector cells. Addition of leupeptin -a cathepsin B inhibitor- to this system protected platelets from apoptosis. Increased PS exposure was also observed when normal platelets and CD3+ lymphocytes were incubated with purified IgG from ITP patients and was absent when ITP plasma was depleted of auto-antibodies, pointing to the latter as responsible for platelet damage. Apoptosis was present in platelets from all patients carrying anti-GPIIb-IIIa and anti-GPIb auto-antibodies but was absent in the patient with anti-GPIa-IIa auto-antibodies. Platelet damage inversely correlated with platelet count and decreased during treatment with a thrombopoietin receptor agonist. These results point to a key role for auto-antibodies in platelet apoptosis and suggest that antibody-dependent cell cytotoxicity is the mechanism underlying this phenomenon.

Awards by Alejandro García

Drafts by Alejandro García

De nuestra mayor consideración: Tenemos el agrado de dirigirnos a ustedes para comunicarles que l... more De nuestra mayor consideración: Tenemos el agrado de dirigirnos a ustedes para comunicarles que la H. Academia Nacional de Medicina en su Sesión Privada del 22 de agosto de 2019 ha decidido otorgarles el Premio "ACADEMIA NACIONAL DE MEDICINA" en mérito al trabajo "ESTUDIO PROSPECTIVO EN CÁNCER DE PULMÓN CON SECUENCIACIÓN DE NUEVA GENERACIÓN CENTRO DE EDUCACIÓN MÉDICA E INVESTIGACIONES CLÍNICAS "NORBERTO QUIRNO" (CEMIC)". Este Premio, que se otorga al mejor trabajo original e inédito realizado en la República Argentina sobre temas: "Médico Científicos". Tema año 2019: "Cáncer de Pulmón", es un testimonio a sus condiciones de investigadores. Al felicitarlos cordialmente, les comunicamos que el jueves 14 de noviembre próximo a las 19 horas se realizará el acto correspondiente a la "Entrega de Premios año 2019" en el Aula Magna de nuestra Academia. Oportunamente, les enviaremos la invitación al acto en formato electrónico, la cual podrán reenviar a sus contactos. Saludamos a ustedes con nuestra más distinguida consideración.

Conference Presentations by Alejandro García

PLOS ONE, 2016

El estrógeno (E2) regula la liberación hormonal así como tam-bién la proliferación y la muerte ce... more El estrógeno (E2) regula la liberación hormonal así como tam-bién la proliferación y la muerte celular adenohipofisaria. La guanilil ciclasa soluble (sGC) cataliza la formación de GMPc y está compuesta por 2 subunidades, α y β, siendo α1/β1 el hetero-dímero más activo y ubicuo. Previamente mostramos que la ad-ministración de E2 causa un efecto opuesto sobre las subunidades de la sGC, aumentando los niveles de ARNm y proteína de la subunidad α1 y disminuyendo los de β1 y la actividad enzimática global. Objetivo: investigar los mecanismos por los cuales el E2 regula diferencialmente la expresión de las subunidades de la sGC en adenohipófisis. Materiales y Métodos: Los cultivos primarios de células adenohipofisarias se incubaron durante 6 u 8 h con E2 10-9 M en presencia o ausencia de diferentes drogas. Se eva-luaron los niveles de ARNm por PCR semicuantitativa o proteína por western blot de α1 y β1. El tratamiento con E2-BSA (10-9 M, incapaz de atravesar la membrana celular) no modificó los nive-les de ARNm de α1 ni β1. El tratamiento con actinomicina D (2 µM, inhibidor de la transcripción) revirtió parcialmente el aumen-to del ARNm de la subunidad α1 y la disminución de la β1 cau-sado por E2. La cicloheximida (10 µg/ml, inhibidor de la traduc-ción) revirtió completamente el desbalance en la expresión de los ARNm de α1 y β1 inducido por E2. El tratamiento con E2 dismi-nuyó la expresión del ARNm del factor HuR y aumentó la del AUF1 (factores de estabilización de ARNm).Conclusión: el E2 ejerce sus efectos sobre la expresión de las subunidades de la sGC a tra-vés del receptor intracelular. Este efecto depende parcialmente de la transcripción y de la traducción de novo de las subunidades y de ciertos factores reguladores. El E2 promueve un ambiente de desestabilización de ARNm que se corresponde con la dismi-nución de los niveles de β1. Estos Resultados muestran que la sGC sufre una compleja regulación por parte del E2 y sugieren un papel clave en la fisiología adenohipofisaria. La Fiebre Hemorrágica Argentina (FHA) es una enfermedad endemo-epidémica causada por el virus Junin (JUNV). Si bien la trombocitopenia es una de las manifestaciones clínicas de esta enfermedad, sus causas son desconocidas. Dado que una disfunción en la megacariocito/trombopoyesis podría explicar este fenómeno, estudiamos el impacto del JUNV sobre el desarrollo de megacariocitos (MCs) y la producción de plaquetas utilizando células CD34+ estimuladas con trombopoyetina. Tanto la prolife-ración y sobrevida de MCs, la capacidad clonogénica de proge-nitores, el comisionamiento al linaje megacariocítico y la diferen-ciación fueron normales en cultivos infectados con JUNV. Sin embargo, la formación de proplaquetas y la liberación de plaquetas fueron inhibidas significativamente. Los cultivos fueron infectados de manera restrictiva (4.1±0.2 y 4.9±0.5% de infección por FACS e inmunofluorescencia respectivamente, n=3). Si bien algunos MCs fueron JUNV+, la mayoría de las células infectadas no fueron MCs ni monocitos/macrófagos, sugiriendo que la dis-minución en la liberación de plaquetas no sería por efecto direc-to del virus sobre MCs. La infección fue dependiente del receptor de transferrina (TfR1) y la expresión del mismo fue regulada po-sitivamente por la infección revelando una nueva estrategia de diseminación de JUNV en células de médula ósea. La reducción en la liberación de plaquetas también fue dependiente del TfR1 y mimetizada por poly(I:C), siendo los interferones tipo I (IFN I) mediadores de este efecto. Entre las moléculas estudiadas, sólo el factor nuclear-eritroide 2 mostró un menor nivel de expresión en los MCs de cultivos infectados o tratados con IFN I. Más aún, estos MCs presentaron una maduración citoplasmática defectuo-sa. Estos Resultados presentan un mecanismo potencial que ex-plicaría la trombocitopenia en FHA y otras enfermedades asocia-das con niveles aumentados de IFN I en el microambiente medular.