Domingos da Silva Leite - Academia.edu (original) (raw)
Papers by Domingos da Silva Leite
AGRADECIMENTOS A Deus, infinitamente justo e bom, O que seria de mim sem a fé que eu tenho nele. ... more AGRADECIMENTOS A Deus, infinitamente justo e bom, O que seria de mim sem a fé que eu tenho nele. Aos meus pais, Pela sólida formação dada até minha juventude que me proporcionou a continuidade nos estudos até a chegada a pós-graduação. Eles me fizeram estudar por acreditarem que a única herança que os pais realmente podem deixar aos seus filhos é a moral e os estudos. Ao meu querido namorado, amigo, companheiro Felipe, Pelo amor, paciência, incentivo e colaboração fundamental para o desenvolvimento e conclusão desta etapa da minha vida. E que sempre esteve comigo nos momentos mais difíceis e também nos mais alegres. À minha avó, Pelas orações e palavras de incentivo. A toda a minha família, Que sempre me apoiou. Aos meus segundos pais Cláudio e Daia e, aos meus irmãos que não tive, Fernando, Márcio e Marcelo pelo carinho e acolhimento. Ao Prof. Domingos da Silva Leite, Pela paciência e competência com que orientou a minha dissertação e o tempo que generosamente me dedicou transmitindo-me os melhores e mais úteis ensinamentos. Ao Prof. Márcio Garcia Ribeiro, Por ter me cedido as amostras deste trabalho e por participar de minha pré-banca e banca com sugestões valiosíssimas. À Profa. Valéria, Pela participação em minha banca e correção minuciosa da minha dissertação. Ao Dr. Márcio José da Silva, Pela paciência e pela incansável disposição em colaborar no sequenciamento das minhas amostras. Ao Leonardo Andrade, da USP de Ribeirão Preto, Pela paciência e colaboração no sequenciamento das minhas amostras. Ao doutorando Gustavo Lacerda, Pelo auxílio na montagem das minhas sequências. À Amanda, Pela "consultoria" no momento da discussão desse trabalho. À bióloga Mirtis e ao técnico Erivaldo, vi 7 Pelo apoio, ensinamento e disponibilidade durante o desenvolvimento deste trabalho. À Monique, Pela sua amizade, paciência e incansável disposição em me ajudar e, também por tudo que me ensinou e colaborou na execução deste trabalho. Aos minhas colegas de laboratório Cláudia, Mônica, Higa, Carla e Vanessa, Pelas "ajudinhas" e também pelos momentos de distração na hora do café. À Ana, Pelos ensinamentos, apoio técnico e companheirismo. Aos meus novos amigos Zzé, Osmar, Luige, Desiree e Vanessa, Pela amizade, apoio e momentos de distração durante a correria do Mestrado. Às minhas amigas Ju e Juju, Pela amizade e companheirismo desde a época da graduação, sempre juntas nessa caminhada. Ao CNPQ, Pela concessão da bolsa de Mestrado. À secretária Lourdes, Pela infinita paciência para ajudar em toda parte burocrática do curso. A todos os professores e funcionários do Departamento de Microbiologia e Imunologia e do curso de pós-graduação em Genética e Biologia Molecular. A todos aqueles que, direta ou indiretamente, colaboraram para que este trabalho consiga atingir aos objetivos propostos. vii
African Journal of Microbiology Research, Feb 28, 2023
Vancomycin-resistant enterococci (VRE) have been reported as a major hazard to human and animal h... more Vancomycin-resistant enterococci (VRE) have been reported as a major hazard to human and animal health, causing problems like clinical mastitis in dairy cattle and nosocomial infections in humans. The aim of this study was to determine the in vitro microbial susceptibility profile of enterococci isolated from dairy farms in São Paulo and Minas Gerais states, Brazil. A total of 310 samples of Enterococcus species from bovine mastitis (52) and bulk tanks (258) were analyzed. The sensibility profile was studied by the disk diffusion method, and the isolates intermediately resistant to vancomycin were submitted to the minimum inhibitory concentration (MIC) test. The enterococci also were classified according to their multiresistance profile. All isolates were sensitive to vancomycin. Most of the isolates from the bulk tanks were resistant to cephalexin (93.8%), novobiocin (98.8%), cefoxitin (91.9%) and oxacillin (91.9%), while those isolated from mastitis presented a high resistance to trimethoprim/sulfamethoxazole (84.7%), novobiocin (100%), cefoxitin (88.5%) and oxacillin (80.8%). All isolates were sensitive to vancomycin (VSE). The high prevalence of isolates resistant to multiple antimicrobials emphasizes the risks existing in the use of ineffective antibiotics.
Journal of Applied Microbiology, Mar 1, 2023
AimsWe aimed to investigate the prevalence of rotavirus and coronavirus in dipterans that commonl... more AimsWe aimed to investigate the prevalence of rotavirus and coronavirus in dipterans that commonly inhabit the environment of dairy farms.Methods and ResultsWe collected 217 insect specimens from nine dairy farms, which were examined through hemi-nested RT-PCR followed by Sanger sequencing in search of VP1 and N genes for rotavirus and bovine coronavirus-BCoV, respectively. With a predominance of Muscidae (152/217 = 70%) 11 families of Diptera were identified. Rotavirus A (RVA) and betacoronavirus (BCoV) were detected in 14.7% (32/217) and 4.6% (10/217) of the dipterans, respectively. Sequencing of the amplicons was possible for 11.5% (25/217) of RVA and 0.5% (1/217) of BCoV, confirming the presence of these pathogens.ConclusionsOur findings highlight the role of dipterans as carriers of RVA and BCoV of great relevance for public and animal health.
Anais do Congresso de Iniciação Científica da Unicamp, Oct 21, 2017
Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) is a group responsible for great part of gastrointe... more Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) is a group responsible for great part of gastrointestinal diseases in humans and for the high calf mortality rate. It is often associated with certain serotypes and other virulence factors. Here we tested STEC strains from feces collected from cohabitants farm animals to determine if they were serving as reservoirs of pathogenicity.
Veterinária e Zootecnia, 2015
Current Microbiology, Feb 1, 2023
Mastitis occurrence in dairy cows is a broad topic that involves several sectors, from antimicrob... more Mastitis occurrence in dairy cows is a broad topic that involves several sectors, from antimicrobial resistance and virulence of strains to economic implications and cattle management practices. Here, we assessed the molecular characterization (antimicrobial resistance determinants, virulence genes, sequences type, serotypes, and plasmid types) of 178 Escherichia coli strains isolated from milk samples from cows with clinical mastitis using a genome-based k-mers approach. Of these, 53 (29.8%) showed multidrug resistance by disc diffusion. We selected eight multidrug-resistant mastitis-associated E. coli for whole-genome sequencing and molecular characterization based on raw data using k-mers. We assessed antimicrobial resistance genes, virulence factors, serotypes, Multilocus Sequence Typing (MLST), and plasmid types. The most antimicrobial resistance gene found were bla TEM-1B (7/8), tetA (6/8), strA (6/8), strB (6/8), and qnrB19 (5/8). A total of 25 virulence factors were detected encoding adhesins, capsule, enzymes/proteins, increased serum survival, hemolysin, colicins, and iron uptake. These virulence factors were associated with Extraintestinal Pathogenic E. coli. Three pandemic clones were found: ST10, ST101, and ST69. Two E. coli were assigned in the O117 serogroup and one in the O8:H25 serotype. The most common plasmid groups were IncFII (7/8) and IncFIB (6/8). Our findings contribute to the knowledge of virulence mechanisms, epidemiological aspects, and antimicrobial resistance determinants of E. coli strains obtained from clinical mammary infections of cows.
Bovine mastitis is the most impacting disease of dairy industry, and it is characterized by a com... more Bovine mastitis is the most impacting disease of dairy industry, and it is characterized by a complexity of causal agents, which have revealed a geographical variation among regions and countries. The mastitis-related pathogens have been traditionally classified as contagious or environmental, based on habits of the microorganisms and transmission routes. In addition, the severity of mammary infections has been associated with the virulence of the pathogens, and immune and nutritional status of the hosts. Considering this scenario, we investigated the etiological nature, clinical severity scores, and days in milk (DIM) data in 4,273 clinical cases of bovine mastitis among ten large-dairy farms located in the Southeast region of Brazil. Streptococcus dysgalactiae (283/4,273=6.6%), Escherichia coli (190/4,273=4.4%), Prototheca spp. (112/4,273=2.6%), and Streptococcus uberis (95/4,273=2.2%) were the predominant pathogens isolated, all from the environmental origin. Among 4,273 clinical cases, clinical gravity score was available in 43.8% (1,871/4,273) animals. From these, 69.8% (1,306/1,871), 27.3% (510/1,871) and 2.9% (55/1,871) were scored as mild, moderate, and severe, respectively. Most of isolation of pathogens were observed in the first 100 days in milk, and their clinical severity scored as mild (3,612/4,273=84.5%). Our results contribute to the etiological identification, clinical severity scoring, and milking aspects of bovine clinical mastitis in dairy farms with a history of clinical mammary infections.
Anais do V Congresso Brasileiro de Qualidade do Leite do Conselho Brasileiro de Qualidade do Leite - CBQL 10 a 12 de Junho de 2013., 2013
Diseases of Aquatic Organisms
Infectious diseases are one of the main threats to biodiversity. The fungus Batrachochytrium dend... more Infectious diseases are one of the main threats to biodiversity. The fungus Batrachochytrium dendrobatidis (Bd) is associated with several amphibian losses around the globe, and environmental conditions may dictate the success of pathogen spread. The Brazilian Amazon has been considered climatically unsuitable for chytrid fungus, but additional information on Bd dynamics in this ecoregion is still lacking. We sampled 462 amphibians (449 anurans, 4 caudatans and 9 caecilians), representing 57 species from the Brazilian Amazon, and quantified Bd infections using qPCR. We tested whether abiotic variables predicted the risk of Bd infections, and tested for relationships between biotic variables and Bd. Finally, we experimentally tested the effects of Bd strains CLFT 156 and CLFT 102 (from the southern and northern Atlantic Forest, respectively) on Atelopus manauensis. We detected higher Bd prevalence than those previously reported for the Brazilian Amazon, and positive individuals in al...
RESUMO O leite adequado ao consumo deve possuir qualidade higienica, valor nutritivo e a manutenc... more RESUMO O leite adequado ao consumo deve possuir qualidade higienica, valor nutritivo e a manutencao das propriedades organolepticas. O isolamento de coliformes totais e/ou fecais de leite bovino e considerado um indicador de sanidade e de boas praticas de manejo, podendo ser usado como indicador de qualidade. Este estudo teve como objetivo isolar, identificar e observar o perfil de resistencia de coliformes presentes em tanques de refrigeracao coletivos e individuais de acondicionamento de leite. Foram colhidas 89 amostras de leite de tanques coletivos e isolados 21 Klebsiella spp., uma Escherichia coli (E. coli) e 29 Enterobacter spp., e 102 amostras de leite de tanques individuais das quais foram isolados uma Klebsiella spp. e sete Enterobacter spp. Dos tanques coletivos, aproximadamente 47% de Klebsiella spp. e Enterobacter spp. foram resistentes para cefalexina e 30% para ampicilina. Destes, no minimo 24% apresentaram multirresistencia. Entre os isolados de tanques individuais, 85% ou mais apresentaram resistencia para ampicilina. O fenotipo ESBL e o gene blaTEM foram detectados em linhagens de Klebsiella spp. isoladas de ambos os tanques. Constatou-se contaminacao do leite com coliformes totais resistentes e, principalmente, que o armazenamento do leite cru de varios pequenos produtores em tanques coletivos potencializa o risco de contaminacao.
Arquivos do Instituto Biológico, 2012
O presente estudo avaliou a composição química, a contagem bacteriana total, o nível de celularid... more O presente estudo avaliou a composição química, a contagem bacteriana total, o nível de celularidade e presença de resíduos de antimicrobianos no leite de duas propriedades em sistema orgânico de produção do interior do Estado São Paulo com base na IN 062-MAPA. O leite da Propriedade I apresentou média de CCS de 7,13 x 10(5) céls/mL e o da Propriedade II 3,27 x 10(5) céls/mL. As médias das CBTs foram de 7,80 x 10(5) céls/mL na Propriedade I e de 6,15 x 10(5) céls/mL na Propriedade II. A propriedade I apresentou como média de gordura de 3,10%, de proteína 3,26% e 4,54% de lactose, enquanto a Propriedade II apresentou 3,44% de gordura, 3,39% de proteína e 4,50% de lactose, nos 12 meses avaliados. A presença de resíduos de antimicrobianos foi detectada em seis amostras (6,97%) da Propriedade I e em 16 (9,24%) da Propriedade II. Os resultados obtidos revelam falha nos preceitos da produção orgânica.
A realização deste trabalho não seria possível sem a existência de algumas pessoas, sem o auxílio... more A realização deste trabalho não seria possível sem a existência de algumas pessoas, sem o auxílio de outras e muito menos sem o apoio psicológico de algumas outras. É o nome destas pessoas que gostaria de deixar aqui registrado. Agradeço, em primeiro lugar, ao Deus infinitamente justo e bom, a causa primeira de todas as coisas, que com seu Amor infinito criou nossos espíritos simples e ignorantes para que pudéssemos crescer intelectual e moralmente de acordo com nossos próprios esforços ao longo dos séculos. Agradeço, em segundo lugar, porém, nem por isso menos importante, a meus pais queridos, José Antonio e Sonia, por terem me aceitado como filha. Eles me fizeram estudar muito por acreditarem que a única herança que os pais realmente podem deixar aos seus filhos é a moral e os estudos e, por isso, aceitaram que eu fosse estudar na Unicamp, apesar do enorme sofrimento que isso causou a eles. Mas mesmo assim, sempre me estimularam. Agradeço ao meu querido Marcinho, meu namorado, meu marido, a pessoa mais linda da minha vida, que é muito paciente e amoroso. Que sempre me ajudou nos momentos mais difíceis e nos muito alegres; que mesmo sem fazer "a mais remota idéia" do assunto da minha pesquisa, me ouvia falar e tentava entender. Agradeço também ao Mário e à Aracélis (os pais do Márcio), duas pessoas lindas de coração e que sempre me ajudaram, em todos os momentos, com muitos incentivos. Devo um agradecimento especial ao meu orientador, o Prof. Dr. Domingos da Silva Leite, que me aceitou como orientada em um momento difícil do meu mestrado, quando tive de trocar de orientador no meio do caminho. Ele me aceitou, me ensinou e me orientou durante estes dois anos e meio. Agradeço ao apoio do pessoal do laboratório: Claudia, Daniela, Erivaldo, Gustavo, Mirtis e Monique pelo auxílio que me deram sempre que podiam. E sempre puderam. Sou grata ao auxílio dos Profs. Drs. Marcelo Brocchi e Gonçalo Pereira por terem permitido que eu usasse o equipamento de PFGE. Da mesma forma agradeço ao Marcelo Lanceloti, ao Dãã (cujo apelido é Gustavo Gregoracci) e à Silvia Kazue vii por terem me ensinado a realizar o milhão de passos necessários ao PFGE e a operar o equipamento todo. Agradeço às Profas. Dras. Gleize Carbonell e Clarice Arns, por terem participado da pré-banca e por terem dado sugestões importantes para o trabalho. Da mesma forma que agradeço ao Prof. Dr. Marcelo Brocchi e à Dra. Cleide Catani, por terem participado da banca de avaliação da minha dissertação e, também, por terem dado sugestões importantes para as correções finais. Agradeço aos meus amigos da turma "bio99diurno", toda a minha turma de faculdade, por ter compartilhado comigo toda a grande aquisição de conhecimento que foi a graduação. Agradeço, em especial, à Adriana, à Lívia e à Roberta, que junto comigo formávamos um quarteto inseparável nos trabalhos de graduação e nas bagunças. Agradeço aos meus amigos coralísticos, o pessoal cantante mais animado que eu já conheci e que sempre estiveram dispostos a dar uma palavra de apoio quando eu não estava tão bem: Volnei, Erick, Marlem, Carolzinha, Samuel, Tiago, Sally, Thammy, Érika "san", Alexandrina e todo o pessoal do "nosso" Coral Ars Musicalis, incluindo o nosso regente, Hermes Coelho, que nos anima com as lindas obras coro-sinfônicas que sempre fazemos. Gostaria ainda de agradecer aos meus amigos, sempre cantantes (de alguma forma ou em algum lugar) e sempre felizes e próximos: Ana Maria (minha irmã neguinha), Sileno, um amigo querido e Danilo, meu amigo de corais, óperas e viagens. Como sempre, falta agradecer a um monte de gente e sempre muitas pessoas não são citadas nominalmente, mas todas elas são importantes porque passaram por nossas vidas.
Molecular ecology, Jan 3, 2016
Chytridiomycosis, caused by the fungus Batrachochytrium dendrobatidis (Bd), is the emerging infec... more Chytridiomycosis, caused by the fungus Batrachochytrium dendrobatidis (Bd), is the emerging infectious disease implicated in recent population declines and extinctions of amphibian species worldwide. Bd strains from regions of disease-associated amphibian decline to date have all belonged to a single, hypervirulent clonal genotype (Bd-GPL). However, earlier studies in the Atlantic Forest of southeastern Brazil detected a novel, putatively enzootic lineage (Bd-Brazil), and indicated hybridization between Bd-GPL and Bd-Brazil. Here we characterize the spatial distribution and population history of these sympatric lineages in the Brazilian Atlantic Forest. To investigate the genetic structure of Bd in this region, we collected and genotyped Bd strains along a 2400 km transect of the Atlantic Forest. Bd-Brazil genotypes were restricted to a narrow geographic range in the southern Atlantic Forest, while Bd-GPL strains were widespread and largely geographically unstructured. Bd population...
Avian Diseases, 1997
Experimental reproduction of avian cellulitis was conducted by subcutaneous inoculation of 25-day... more Experimental reproduction of avian cellulitis was conducted by subcutaneous inoculation of 25-day-old broiler chickens with a field isolate of serogroup O78 Escherichia coli. Development of the cellulitis lesion occurred as early as 24 h post-infection. Reproduction of cellulitis occurred in 98% of inoculated birds, and E. coli was isolated from > 75% of cellulitis lesions. In addition to cellulitis, other lesions, including pericarditis, airsacculitis, osteomyelitis, arthritis, and perihepatitis, occurred in > 80% of birds inoculated with E. coli. Bacteremia occurred as early as 6 h post-infection and dramatically declined by 5 days post-infection. Seventeen of 59 (29%) birds inoculated with E. coli developed a fatal infection between 1 and 6 days post-infection, and bacteria were isolated from lesions in 98% birds. In contrast, E. coli was not isolated from lesions in birds that survived until days 7-14 post-infection. Birds that survived with cellulitis and other lesions until day 14 post-infection had a significantly lower body weight compared with the control group. This avian model of cellulitis and other lesions will be useful for studying the development of vaccination strategies for E. coli in broilers.
PeerJ, 2018
BackgroundUnderstanding of the physiological effects of chytridiomycosis is crucial to worldwide ... more BackgroundUnderstanding of the physiological effects of chytridiomycosis is crucial to worldwide amphibian conservation. Therefore, we analyzed the cardiac function of two anuran species (Xenopus laevisandPhysalaemus albonotatus) with different susceptibilities to infection by the causative agent of chytridiomycosis,Batrachochytrium dendrobatidis(hereafterBd).MethodsWe analyzed thein situheart rate (fH- bpm), relative ventricular mass (RVM -%), and Ca2+handling in heart ofBdinfected animals compared to uninfected controls of both study species.ResultsBdinfection resulted in a 78% decrease in contraction force values inP. albonotatuswhen compared to the less susceptibleX. laevis. This negative effect was even more evident (82%) for the cardiac pumping capacity. The time to reach peak tension was 125% longer inP. albonotatusthan inX. laevis, and cardiac relaxation was 57% longer.DiscussionThese results indicate a delay in the cardiac cycle ofP. albonotatuson a beat-to-beat basis, whic...
Neste trabalho foram pesquisadas as melhores condicoes de cultivo e estocagem da amostra de Esche... more Neste trabalho foram pesquisadas as melhores condicoes de cultivo e estocagem da amostra de Escherichia coli 86-6136 para a producao da Toxina Citoletal Distensora (CLDT), assim como o melhor metodo de extracao e purificacao para a caracterizacao parcial da toxina. Apos o que, foi realizada a producao de anticorpos neutralizantes policlonais em coelhos albinos e a analise dos efeitos citopaticos e citotoxicos da CLDT em cultura de celulas. O melhor meio para cultivo da amostra 86-6136 encontrado foi o "Evans Toxin Medium", pois com este meio foi verificada a producao de CLDT em ensaios de atividade citotoxica em cultura de celulas, com efeito semelhante ao descrito em literatura. Os estudos de obtencao da toxina demonstraram que o metodo mais vantajoso para a extracao era a ultrasonicacao do sedimento bacteriano, pois dispendia menos tempo e havia boa recuperacao da atividade citotoxica, quando comparado com os outros metodos empregados, alem de existir ganho no rendimento de mais de 4 vezes em atividade especifica e 2 vezes em citotoxicidade, quando comparado ao sobrenadante inicial. Apos a extracao, o material foi submetido a diversos processos cromatograficos (Deae-Sepharose Fast-Flow; CM-Sepharose Fast-Flow; Phenil Sepharose; Sepharose CL6B; Sepharose CL4B; Superdex 200). A cromatografia que teve mais relevância para melhorar o grau de pureza da amostra foi em Sepharose CL6B. A amostra, quando submetida a cromatografia nesta resina, mostrou padrao de eluicao com 3 picos, sendo que a atividade biologica estava concentrada no primeiro pico. Em eletroforese com SDS-P AGE, o material contendo atividade biologica apresentou 3 bandas, com os pesos moleculares estimados em 38,8; 37,3 e 22,4 kDa. Nao foram obtidos resultados em ensaios eletroforeticos em P AGE convencional. Os ensaios cromatograficos em Sepharose CL6B resultaram em aumento de 100 vezes na citotoxicidade da amostra, e 237 vezes em atividade relativa. Os ensaios em cromatografia liquida de alta performance (HPLC) em coluna Mono-Q nao permitiram a recuperacao da atividade citotoxica da toxina CLDT, e por isso foram abandonados. A atividade da toxina CLDT pode ser observada em cultura de celulas Vero, HeLa e CHO. Apenas nas celulas CHO tanto o efeito citopatico quanto o citotoxico foram observados. Em ensaios em celulas Vero e HeLa, o efeito de distensao celular nao e evidente, e em celulas Vero, a viabilidade celular, ao final das 120 hrs de ensaio, e bem maior em relacao as outras duas linhagens. A producao de anticorpo policlonal em coelhos albinos pode ser verificada em teste de imunodifusao radial dupla, e sua capacidade neutralizante foi observada em ensaios de soroneutralizacao em cultura de celulas CHO. Os antissoros obtidos apresentaram atividade neutralizante do efeito citotoxico da toxina CLDT no titulo ate 1/1024 Abstract
AGRADECIMENTOS A Deus, infinitamente justo e bom, O que seria de mim sem a fé que eu tenho nele. ... more AGRADECIMENTOS A Deus, infinitamente justo e bom, O que seria de mim sem a fé que eu tenho nele. Aos meus pais, Pela sólida formação dada até minha juventude que me proporcionou a continuidade nos estudos até a chegada a pós-graduação. Eles me fizeram estudar por acreditarem que a única herança que os pais realmente podem deixar aos seus filhos é a moral e os estudos. Ao meu querido namorado, amigo, companheiro Felipe, Pelo amor, paciência, incentivo e colaboração fundamental para o desenvolvimento e conclusão desta etapa da minha vida. E que sempre esteve comigo nos momentos mais difíceis e também nos mais alegres. À minha avó, Pelas orações e palavras de incentivo. A toda a minha família, Que sempre me apoiou. Aos meus segundos pais Cláudio e Daia e, aos meus irmãos que não tive, Fernando, Márcio e Marcelo pelo carinho e acolhimento. Ao Prof. Domingos da Silva Leite, Pela paciência e competência com que orientou a minha dissertação e o tempo que generosamente me dedicou transmitindo-me os melhores e mais úteis ensinamentos. Ao Prof. Márcio Garcia Ribeiro, Por ter me cedido as amostras deste trabalho e por participar de minha pré-banca e banca com sugestões valiosíssimas. À Profa. Valéria, Pela participação em minha banca e correção minuciosa da minha dissertação. Ao Dr. Márcio José da Silva, Pela paciência e pela incansável disposição em colaborar no sequenciamento das minhas amostras. Ao Leonardo Andrade, da USP de Ribeirão Preto, Pela paciência e colaboração no sequenciamento das minhas amostras. Ao doutorando Gustavo Lacerda, Pelo auxílio na montagem das minhas sequências. À Amanda, Pela "consultoria" no momento da discussão desse trabalho. À bióloga Mirtis e ao técnico Erivaldo, vi 7 Pelo apoio, ensinamento e disponibilidade durante o desenvolvimento deste trabalho. À Monique, Pela sua amizade, paciência e incansável disposição em me ajudar e, também por tudo que me ensinou e colaborou na execução deste trabalho. Aos minhas colegas de laboratório Cláudia, Mônica, Higa, Carla e Vanessa, Pelas "ajudinhas" e também pelos momentos de distração na hora do café. À Ana, Pelos ensinamentos, apoio técnico e companheirismo. Aos meus novos amigos Zzé, Osmar, Luige, Desiree e Vanessa, Pela amizade, apoio e momentos de distração durante a correria do Mestrado. Às minhas amigas Ju e Juju, Pela amizade e companheirismo desde a época da graduação, sempre juntas nessa caminhada. Ao CNPQ, Pela concessão da bolsa de Mestrado. À secretária Lourdes, Pela infinita paciência para ajudar em toda parte burocrática do curso. A todos os professores e funcionários do Departamento de Microbiologia e Imunologia e do curso de pós-graduação em Genética e Biologia Molecular. A todos aqueles que, direta ou indiretamente, colaboraram para que este trabalho consiga atingir aos objetivos propostos. vii
African Journal of Microbiology Research, Feb 28, 2023
Vancomycin-resistant enterococci (VRE) have been reported as a major hazard to human and animal h... more Vancomycin-resistant enterococci (VRE) have been reported as a major hazard to human and animal health, causing problems like clinical mastitis in dairy cattle and nosocomial infections in humans. The aim of this study was to determine the in vitro microbial susceptibility profile of enterococci isolated from dairy farms in São Paulo and Minas Gerais states, Brazil. A total of 310 samples of Enterococcus species from bovine mastitis (52) and bulk tanks (258) were analyzed. The sensibility profile was studied by the disk diffusion method, and the isolates intermediately resistant to vancomycin were submitted to the minimum inhibitory concentration (MIC) test. The enterococci also were classified according to their multiresistance profile. All isolates were sensitive to vancomycin. Most of the isolates from the bulk tanks were resistant to cephalexin (93.8%), novobiocin (98.8%), cefoxitin (91.9%) and oxacillin (91.9%), while those isolated from mastitis presented a high resistance to trimethoprim/sulfamethoxazole (84.7%), novobiocin (100%), cefoxitin (88.5%) and oxacillin (80.8%). All isolates were sensitive to vancomycin (VSE). The high prevalence of isolates resistant to multiple antimicrobials emphasizes the risks existing in the use of ineffective antibiotics.
Journal of Applied Microbiology, Mar 1, 2023
AimsWe aimed to investigate the prevalence of rotavirus and coronavirus in dipterans that commonl... more AimsWe aimed to investigate the prevalence of rotavirus and coronavirus in dipterans that commonly inhabit the environment of dairy farms.Methods and ResultsWe collected 217 insect specimens from nine dairy farms, which were examined through hemi-nested RT-PCR followed by Sanger sequencing in search of VP1 and N genes for rotavirus and bovine coronavirus-BCoV, respectively. With a predominance of Muscidae (152/217 = 70%) 11 families of Diptera were identified. Rotavirus A (RVA) and betacoronavirus (BCoV) were detected in 14.7% (32/217) and 4.6% (10/217) of the dipterans, respectively. Sequencing of the amplicons was possible for 11.5% (25/217) of RVA and 0.5% (1/217) of BCoV, confirming the presence of these pathogens.ConclusionsOur findings highlight the role of dipterans as carriers of RVA and BCoV of great relevance for public and animal health.
Anais do Congresso de Iniciação Científica da Unicamp, Oct 21, 2017
Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) is a group responsible for great part of gastrointe... more Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) is a group responsible for great part of gastrointestinal diseases in humans and for the high calf mortality rate. It is often associated with certain serotypes and other virulence factors. Here we tested STEC strains from feces collected from cohabitants farm animals to determine if they were serving as reservoirs of pathogenicity.
Veterinária e Zootecnia, 2015
Current Microbiology, Feb 1, 2023
Mastitis occurrence in dairy cows is a broad topic that involves several sectors, from antimicrob... more Mastitis occurrence in dairy cows is a broad topic that involves several sectors, from antimicrobial resistance and virulence of strains to economic implications and cattle management practices. Here, we assessed the molecular characterization (antimicrobial resistance determinants, virulence genes, sequences type, serotypes, and plasmid types) of 178 Escherichia coli strains isolated from milk samples from cows with clinical mastitis using a genome-based k-mers approach. Of these, 53 (29.8%) showed multidrug resistance by disc diffusion. We selected eight multidrug-resistant mastitis-associated E. coli for whole-genome sequencing and molecular characterization based on raw data using k-mers. We assessed antimicrobial resistance genes, virulence factors, serotypes, Multilocus Sequence Typing (MLST), and plasmid types. The most antimicrobial resistance gene found were bla TEM-1B (7/8), tetA (6/8), strA (6/8), strB (6/8), and qnrB19 (5/8). A total of 25 virulence factors were detected encoding adhesins, capsule, enzymes/proteins, increased serum survival, hemolysin, colicins, and iron uptake. These virulence factors were associated with Extraintestinal Pathogenic E. coli. Three pandemic clones were found: ST10, ST101, and ST69. Two E. coli were assigned in the O117 serogroup and one in the O8:H25 serotype. The most common plasmid groups were IncFII (7/8) and IncFIB (6/8). Our findings contribute to the knowledge of virulence mechanisms, epidemiological aspects, and antimicrobial resistance determinants of E. coli strains obtained from clinical mammary infections of cows.
Bovine mastitis is the most impacting disease of dairy industry, and it is characterized by a com... more Bovine mastitis is the most impacting disease of dairy industry, and it is characterized by a complexity of causal agents, which have revealed a geographical variation among regions and countries. The mastitis-related pathogens have been traditionally classified as contagious or environmental, based on habits of the microorganisms and transmission routes. In addition, the severity of mammary infections has been associated with the virulence of the pathogens, and immune and nutritional status of the hosts. Considering this scenario, we investigated the etiological nature, clinical severity scores, and days in milk (DIM) data in 4,273 clinical cases of bovine mastitis among ten large-dairy farms located in the Southeast region of Brazil. Streptococcus dysgalactiae (283/4,273=6.6%), Escherichia coli (190/4,273=4.4%), Prototheca spp. (112/4,273=2.6%), and Streptococcus uberis (95/4,273=2.2%) were the predominant pathogens isolated, all from the environmental origin. Among 4,273 clinical cases, clinical gravity score was available in 43.8% (1,871/4,273) animals. From these, 69.8% (1,306/1,871), 27.3% (510/1,871) and 2.9% (55/1,871) were scored as mild, moderate, and severe, respectively. Most of isolation of pathogens were observed in the first 100 days in milk, and their clinical severity scored as mild (3,612/4,273=84.5%). Our results contribute to the etiological identification, clinical severity scoring, and milking aspects of bovine clinical mastitis in dairy farms with a history of clinical mammary infections.
Anais do V Congresso Brasileiro de Qualidade do Leite do Conselho Brasileiro de Qualidade do Leite - CBQL 10 a 12 de Junho de 2013., 2013
Diseases of Aquatic Organisms
Infectious diseases are one of the main threats to biodiversity. The fungus Batrachochytrium dend... more Infectious diseases are one of the main threats to biodiversity. The fungus Batrachochytrium dendrobatidis (Bd) is associated with several amphibian losses around the globe, and environmental conditions may dictate the success of pathogen spread. The Brazilian Amazon has been considered climatically unsuitable for chytrid fungus, but additional information on Bd dynamics in this ecoregion is still lacking. We sampled 462 amphibians (449 anurans, 4 caudatans and 9 caecilians), representing 57 species from the Brazilian Amazon, and quantified Bd infections using qPCR. We tested whether abiotic variables predicted the risk of Bd infections, and tested for relationships between biotic variables and Bd. Finally, we experimentally tested the effects of Bd strains CLFT 156 and CLFT 102 (from the southern and northern Atlantic Forest, respectively) on Atelopus manauensis. We detected higher Bd prevalence than those previously reported for the Brazilian Amazon, and positive individuals in al...
RESUMO O leite adequado ao consumo deve possuir qualidade higienica, valor nutritivo e a manutenc... more RESUMO O leite adequado ao consumo deve possuir qualidade higienica, valor nutritivo e a manutencao das propriedades organolepticas. O isolamento de coliformes totais e/ou fecais de leite bovino e considerado um indicador de sanidade e de boas praticas de manejo, podendo ser usado como indicador de qualidade. Este estudo teve como objetivo isolar, identificar e observar o perfil de resistencia de coliformes presentes em tanques de refrigeracao coletivos e individuais de acondicionamento de leite. Foram colhidas 89 amostras de leite de tanques coletivos e isolados 21 Klebsiella spp., uma Escherichia coli (E. coli) e 29 Enterobacter spp., e 102 amostras de leite de tanques individuais das quais foram isolados uma Klebsiella spp. e sete Enterobacter spp. Dos tanques coletivos, aproximadamente 47% de Klebsiella spp. e Enterobacter spp. foram resistentes para cefalexina e 30% para ampicilina. Destes, no minimo 24% apresentaram multirresistencia. Entre os isolados de tanques individuais, 85% ou mais apresentaram resistencia para ampicilina. O fenotipo ESBL e o gene blaTEM foram detectados em linhagens de Klebsiella spp. isoladas de ambos os tanques. Constatou-se contaminacao do leite com coliformes totais resistentes e, principalmente, que o armazenamento do leite cru de varios pequenos produtores em tanques coletivos potencializa o risco de contaminacao.
Arquivos do Instituto Biológico, 2012
O presente estudo avaliou a composição química, a contagem bacteriana total, o nível de celularid... more O presente estudo avaliou a composição química, a contagem bacteriana total, o nível de celularidade e presença de resíduos de antimicrobianos no leite de duas propriedades em sistema orgânico de produção do interior do Estado São Paulo com base na IN 062-MAPA. O leite da Propriedade I apresentou média de CCS de 7,13 x 10(5) céls/mL e o da Propriedade II 3,27 x 10(5) céls/mL. As médias das CBTs foram de 7,80 x 10(5) céls/mL na Propriedade I e de 6,15 x 10(5) céls/mL na Propriedade II. A propriedade I apresentou como média de gordura de 3,10%, de proteína 3,26% e 4,54% de lactose, enquanto a Propriedade II apresentou 3,44% de gordura, 3,39% de proteína e 4,50% de lactose, nos 12 meses avaliados. A presença de resíduos de antimicrobianos foi detectada em seis amostras (6,97%) da Propriedade I e em 16 (9,24%) da Propriedade II. Os resultados obtidos revelam falha nos preceitos da produção orgânica.
A realização deste trabalho não seria possível sem a existência de algumas pessoas, sem o auxílio... more A realização deste trabalho não seria possível sem a existência de algumas pessoas, sem o auxílio de outras e muito menos sem o apoio psicológico de algumas outras. É o nome destas pessoas que gostaria de deixar aqui registrado. Agradeço, em primeiro lugar, ao Deus infinitamente justo e bom, a causa primeira de todas as coisas, que com seu Amor infinito criou nossos espíritos simples e ignorantes para que pudéssemos crescer intelectual e moralmente de acordo com nossos próprios esforços ao longo dos séculos. Agradeço, em segundo lugar, porém, nem por isso menos importante, a meus pais queridos, José Antonio e Sonia, por terem me aceitado como filha. Eles me fizeram estudar muito por acreditarem que a única herança que os pais realmente podem deixar aos seus filhos é a moral e os estudos e, por isso, aceitaram que eu fosse estudar na Unicamp, apesar do enorme sofrimento que isso causou a eles. Mas mesmo assim, sempre me estimularam. Agradeço ao meu querido Marcinho, meu namorado, meu marido, a pessoa mais linda da minha vida, que é muito paciente e amoroso. Que sempre me ajudou nos momentos mais difíceis e nos muito alegres; que mesmo sem fazer "a mais remota idéia" do assunto da minha pesquisa, me ouvia falar e tentava entender. Agradeço também ao Mário e à Aracélis (os pais do Márcio), duas pessoas lindas de coração e que sempre me ajudaram, em todos os momentos, com muitos incentivos. Devo um agradecimento especial ao meu orientador, o Prof. Dr. Domingos da Silva Leite, que me aceitou como orientada em um momento difícil do meu mestrado, quando tive de trocar de orientador no meio do caminho. Ele me aceitou, me ensinou e me orientou durante estes dois anos e meio. Agradeço ao apoio do pessoal do laboratório: Claudia, Daniela, Erivaldo, Gustavo, Mirtis e Monique pelo auxílio que me deram sempre que podiam. E sempre puderam. Sou grata ao auxílio dos Profs. Drs. Marcelo Brocchi e Gonçalo Pereira por terem permitido que eu usasse o equipamento de PFGE. Da mesma forma agradeço ao Marcelo Lanceloti, ao Dãã (cujo apelido é Gustavo Gregoracci) e à Silvia Kazue vii por terem me ensinado a realizar o milhão de passos necessários ao PFGE e a operar o equipamento todo. Agradeço às Profas. Dras. Gleize Carbonell e Clarice Arns, por terem participado da pré-banca e por terem dado sugestões importantes para o trabalho. Da mesma forma que agradeço ao Prof. Dr. Marcelo Brocchi e à Dra. Cleide Catani, por terem participado da banca de avaliação da minha dissertação e, também, por terem dado sugestões importantes para as correções finais. Agradeço aos meus amigos da turma "bio99diurno", toda a minha turma de faculdade, por ter compartilhado comigo toda a grande aquisição de conhecimento que foi a graduação. Agradeço, em especial, à Adriana, à Lívia e à Roberta, que junto comigo formávamos um quarteto inseparável nos trabalhos de graduação e nas bagunças. Agradeço aos meus amigos coralísticos, o pessoal cantante mais animado que eu já conheci e que sempre estiveram dispostos a dar uma palavra de apoio quando eu não estava tão bem: Volnei, Erick, Marlem, Carolzinha, Samuel, Tiago, Sally, Thammy, Érika "san", Alexandrina e todo o pessoal do "nosso" Coral Ars Musicalis, incluindo o nosso regente, Hermes Coelho, que nos anima com as lindas obras coro-sinfônicas que sempre fazemos. Gostaria ainda de agradecer aos meus amigos, sempre cantantes (de alguma forma ou em algum lugar) e sempre felizes e próximos: Ana Maria (minha irmã neguinha), Sileno, um amigo querido e Danilo, meu amigo de corais, óperas e viagens. Como sempre, falta agradecer a um monte de gente e sempre muitas pessoas não são citadas nominalmente, mas todas elas são importantes porque passaram por nossas vidas.
Molecular ecology, Jan 3, 2016
Chytridiomycosis, caused by the fungus Batrachochytrium dendrobatidis (Bd), is the emerging infec... more Chytridiomycosis, caused by the fungus Batrachochytrium dendrobatidis (Bd), is the emerging infectious disease implicated in recent population declines and extinctions of amphibian species worldwide. Bd strains from regions of disease-associated amphibian decline to date have all belonged to a single, hypervirulent clonal genotype (Bd-GPL). However, earlier studies in the Atlantic Forest of southeastern Brazil detected a novel, putatively enzootic lineage (Bd-Brazil), and indicated hybridization between Bd-GPL and Bd-Brazil. Here we characterize the spatial distribution and population history of these sympatric lineages in the Brazilian Atlantic Forest. To investigate the genetic structure of Bd in this region, we collected and genotyped Bd strains along a 2400 km transect of the Atlantic Forest. Bd-Brazil genotypes were restricted to a narrow geographic range in the southern Atlantic Forest, while Bd-GPL strains were widespread and largely geographically unstructured. Bd population...
Avian Diseases, 1997
Experimental reproduction of avian cellulitis was conducted by subcutaneous inoculation of 25-day... more Experimental reproduction of avian cellulitis was conducted by subcutaneous inoculation of 25-day-old broiler chickens with a field isolate of serogroup O78 Escherichia coli. Development of the cellulitis lesion occurred as early as 24 h post-infection. Reproduction of cellulitis occurred in 98% of inoculated birds, and E. coli was isolated from > 75% of cellulitis lesions. In addition to cellulitis, other lesions, including pericarditis, airsacculitis, osteomyelitis, arthritis, and perihepatitis, occurred in > 80% of birds inoculated with E. coli. Bacteremia occurred as early as 6 h post-infection and dramatically declined by 5 days post-infection. Seventeen of 59 (29%) birds inoculated with E. coli developed a fatal infection between 1 and 6 days post-infection, and bacteria were isolated from lesions in 98% birds. In contrast, E. coli was not isolated from lesions in birds that survived until days 7-14 post-infection. Birds that survived with cellulitis and other lesions until day 14 post-infection had a significantly lower body weight compared with the control group. This avian model of cellulitis and other lesions will be useful for studying the development of vaccination strategies for E. coli in broilers.
PeerJ, 2018
BackgroundUnderstanding of the physiological effects of chytridiomycosis is crucial to worldwide ... more BackgroundUnderstanding of the physiological effects of chytridiomycosis is crucial to worldwide amphibian conservation. Therefore, we analyzed the cardiac function of two anuran species (Xenopus laevisandPhysalaemus albonotatus) with different susceptibilities to infection by the causative agent of chytridiomycosis,Batrachochytrium dendrobatidis(hereafterBd).MethodsWe analyzed thein situheart rate (fH- bpm), relative ventricular mass (RVM -%), and Ca2+handling in heart ofBdinfected animals compared to uninfected controls of both study species.ResultsBdinfection resulted in a 78% decrease in contraction force values inP. albonotatuswhen compared to the less susceptibleX. laevis. This negative effect was even more evident (82%) for the cardiac pumping capacity. The time to reach peak tension was 125% longer inP. albonotatusthan inX. laevis, and cardiac relaxation was 57% longer.DiscussionThese results indicate a delay in the cardiac cycle ofP. albonotatuson a beat-to-beat basis, whic...
Neste trabalho foram pesquisadas as melhores condicoes de cultivo e estocagem da amostra de Esche... more Neste trabalho foram pesquisadas as melhores condicoes de cultivo e estocagem da amostra de Escherichia coli 86-6136 para a producao da Toxina Citoletal Distensora (CLDT), assim como o melhor metodo de extracao e purificacao para a caracterizacao parcial da toxina. Apos o que, foi realizada a producao de anticorpos neutralizantes policlonais em coelhos albinos e a analise dos efeitos citopaticos e citotoxicos da CLDT em cultura de celulas. O melhor meio para cultivo da amostra 86-6136 encontrado foi o "Evans Toxin Medium", pois com este meio foi verificada a producao de CLDT em ensaios de atividade citotoxica em cultura de celulas, com efeito semelhante ao descrito em literatura. Os estudos de obtencao da toxina demonstraram que o metodo mais vantajoso para a extracao era a ultrasonicacao do sedimento bacteriano, pois dispendia menos tempo e havia boa recuperacao da atividade citotoxica, quando comparado com os outros metodos empregados, alem de existir ganho no rendimento de mais de 4 vezes em atividade especifica e 2 vezes em citotoxicidade, quando comparado ao sobrenadante inicial. Apos a extracao, o material foi submetido a diversos processos cromatograficos (Deae-Sepharose Fast-Flow; CM-Sepharose Fast-Flow; Phenil Sepharose; Sepharose CL6B; Sepharose CL4B; Superdex 200). A cromatografia que teve mais relevância para melhorar o grau de pureza da amostra foi em Sepharose CL6B. A amostra, quando submetida a cromatografia nesta resina, mostrou padrao de eluicao com 3 picos, sendo que a atividade biologica estava concentrada no primeiro pico. Em eletroforese com SDS-P AGE, o material contendo atividade biologica apresentou 3 bandas, com os pesos moleculares estimados em 38,8; 37,3 e 22,4 kDa. Nao foram obtidos resultados em ensaios eletroforeticos em P AGE convencional. Os ensaios cromatograficos em Sepharose CL6B resultaram em aumento de 100 vezes na citotoxicidade da amostra, e 237 vezes em atividade relativa. Os ensaios em cromatografia liquida de alta performance (HPLC) em coluna Mono-Q nao permitiram a recuperacao da atividade citotoxica da toxina CLDT, e por isso foram abandonados. A atividade da toxina CLDT pode ser observada em cultura de celulas Vero, HeLa e CHO. Apenas nas celulas CHO tanto o efeito citopatico quanto o citotoxico foram observados. Em ensaios em celulas Vero e HeLa, o efeito de distensao celular nao e evidente, e em celulas Vero, a viabilidade celular, ao final das 120 hrs de ensaio, e bem maior em relacao as outras duas linhagens. A producao de anticorpo policlonal em coelhos albinos pode ser verificada em teste de imunodifusao radial dupla, e sua capacidade neutralizante foi observada em ensaios de soroneutralizacao em cultura de celulas CHO. Os antissoros obtidos apresentaram atividade neutralizante do efeito citotoxico da toxina CLDT no titulo ate 1/1024 Abstract