Способ получения альбумина — SU 1510149 (original) (raw)
Формула
Способ получения альбумина путем центрифугирования донорской крови, осаждения фибриногена этиловым спиртом при температуре ниже 0oС, отделения надосадочной жидкости и последующего осаждения глобулинов этиловым спиртом при охлаждении, повторного центрифугирования, осаждения из полученной надосадочной жидкости альбумина раствором этилового спирта, содержащего уксусную кислоту, растворения осадка альбумина в дистиллированной воде, фильтрации, лиофильного высушивания, растворения, обработки сорбентом, отделения от сорбента и стерилизующей фильтрации, отличающийся тем, что, с целью повышения качества целевого продукта за счет удаления примесей, приводящих к появлению нерастворимых компонентов целевого продукта, и сохранения нативности, в качестве сорбента используют "Оносорб", при этом обработку проводят при 14 - 23oС с постоянным перемешиванием в течение 30 40 мин при соотношении сорбент белок 1 18 20.
Описание
Изобретение относится к медицине и касается способа получения лечебного препарата крови альбумина.
Целью изобретения является повышение качества целевого продукта за счет удаления примесей и сохранения нативности.
Поставленная цель достигается тем, что получаемый из донорской крови раствор альбумина перед стерилизацией и розливом смешивается с сорбентом "Овосорб", при этом соотношение объемов сорбента и альбумина составляет 1: 18-1: 20, а обработку путем инкубации и перемешивания ведут 30-40 мин при 14-23oC.
Пример 1. Для получения альбумина берут 15 л плазмы крови, полученной в день взятия крови у донора, после центрифугирования плазму охлаждают до 0oC, непрерывно перемешивая, медленно добавляют предварительно охлажденный до (-15)-(-20)oC этиловый спирт (95%-ный) из расчета 90 мл на 1000 мл плазмы. Конечная концентрация спирта в смеси составляет 8% После окончания добавления спирта смесь оставляют на 3-18 ч при (-3)-(+1)oC. В данных условиях выпадает в осадок фракция, содержащая фибриноген, осадок центрифугируют и фильтруют.
Надосадочную жидкость замеряют, доводят pH до 5,8-5,9 и медленно добавляют 95%-ный этиловый спирт, охлажденный до (-15)-(-20)oC, из расчета 150 мл на 1000 мл центрифугата для осаждения глобулинов. Конечная концентрация спирта в белковом растворе 19% время перемешивания не менее 2 ч, но не более 18 ч, температура в реакторе (-5) ( 
1)oC. Выпавший осадок отделяют центрифугированием.
К надосадочной жидкости, находящейся в реакторе, добавляют предварительно охлажденный 95%-ный этиловый спирт (на 1000 мл 450 мл спирта), конечная концентрация которого в смеси становится 40% При этих условиях альбумин остается в надосадочной жидкости. Эту надосадочную жидкость, доведенную до pH 4,7-4,8 1 л уксусной кислоты, приготовленной на 40%-ном этиловом спирте, оставляют для созревания при (-7) (+1)oC не менее 2 ч, но не более 18 ч. В этих условиях альбумин выпадает в осадок, осадок отделяют центрифугированием и собирают.
Осадок альбумина растворяют в апирогенной воде при (+5)-( 1)oC и размешивают не менее 2 ч, центрифугируют и фильтруют. Отфильтрованный раствор лиофильно высушивают. Из сухого порошка в условиях асептики готовят раствор нужной концентрации.
Раствор альбумина смешивают с сорбентом "Овосорб" в соотношении 1:18-1: 20 и инкубируют при 14-23oC и постоянном перемешивании в течение 30-40 мин, затем альбумин отделяют от сорбента, стерилизуют путем пропускания через фильтры "Миллипор", разливают по флаконам и помещают на хранение при комнатной температуре. Указанная обработка способствует полному удалению компонентов, приводящих к появлению осадка, отсутствию продуктов деградации и не изменяет физико-химические характеристики препарата. При хранении в течение 18 мес. не отмечалось появления осадка и замутнения раствора.
Пример 2. Способ осуществлен, как в примере 1, за исключением того, что раствор альбумина в объеме 3,6 л смешивали с 200 мл сорбента "Овосорб" при соотношении сорбент:раствор 1:18 и инкубировали при 16oC и постоянном перемешивании в течение 35 мин, затем альбумин отделяли от сорбента, стерилизировали путем пропускания через фильтры "Миллипор", разливали по флаконам и помещали на хранение при комнатной температуре. При хранении в течение 18 мес. не отмечалось появления осадка и замутнения раствора.
В качестве сорбента используют полимерный гидрогелевый материал "Овосорб", основу которого составляет полиакриламид с ковалентно иммобилизованным овомукоидом. Химический состав сорбента: овомукоид из белка утиных яиц 7,8 мг/г набухшего сорбента; акриламид 10,0 мас. сшивающий агент (N, N'-метиленбисакриламид) 1,0 мас. акриловая кислота 0,3 мас. Сорбент представляет собой сшитый нерастворимый, но набухающий в воде полимерный гидрогель.
При указанных режимах обработки сорбентом "Овосорб", соотношении сорбент раствор 1: 18-1: 20, температуре 14-23oC и времени перемешивания 30-40 мин достигается наиболее полная сорбция компонентов, ухудшающих стабильность препарата при хранении.
Изобретение относится к медицине, к получению лечебных препаратов крови, и касается способа получения альбумина. Целью изобретения является повышение качества целевого продукта за счет удаления нерастворимых примесей и сохранения нативности. Способ осуществляется посредством центрифугирования крови, фракционирования белков спиртовым осаждением при пониженных температурах, осаждения альбумина и обработки сорбентом "Овосорб" при соотношении сорбента и альбумина 1:18-1:20, при постоянном перемешивании в течение 30-40 мин при 14-23oC. Указанная обработка приводит к полному удалению компонентов, приводящих к появлению осадка, отсутствию продуктов деградации и не изменяет физико-химические характеристики препарата. При хранении в течение 18 мес. не отмечалось появления осадка и замутнения раствора.
Заявка
4288221/14, 21.07.1987
Белорусский научно-исследовательский институт переливания крови, Институт биоорганической химии АН БССР, Институт нефтехимического синтеза им. А. В. Топчиева
Николайчик В. В, Платэ Н. А, Ахрем А. А, Русанов В. М, Царенков В. М, Бычко Г. Н, Николайчик Л. В, Голубович В. П, Мазур Л. И, Валуев Л. И, Мосолов В. В, Валуева Т. А
МПК / Метки
МПК: A61K 38/38
Метки: альбумина
Опубликовано: 10.01.1998