Адъювант — SU 1615918 (original) (raw)
Формула
АДЪЮВАНТ, содержащий масляную основу и эмульгатор, отличающийся тем, что, с целью снижения вязкости реактогенности препарата, а также повышения его адъювантных свойств, в качестве масляной основы, используют полиальфа-олефиновое масло при следующем соотношении компонентов, мас.
Полиальфа-олефиновое масло 85 95
Эмульгатор 5 15
Описание
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к масляным адъювантам, и может быть использовано в научно-исследовательской работе и биологической промышленности при разработке и производстве преимущественно средств специфической профилактики ящура для всех видов сельскохозяйственных животных.
Целью изобретения является снижение вязкости и реактогенности препарата, а также повышение его адъювантных свойств.
П р и м е р 1. Готовят пять смесей ингредиентов. Сведения об этом приведены в табл.1.
При исследовании образцов противоящурных эмульсионных вакцин установлено, что при соотношении компонентов адъюванта 80:20 препараты обладают повышенной вязкостью (более 2000 мм2/с), а также повышенной реактогенностью. Эмульсионные препараты на основе адъюванта, приготовленного из компонентов, взятых в соотношении 97:3, являются нестабильными.
Аналогичные результаты получают при использовании других эмульгаторов: пентаэритритоолеата, арлацела, безводного ланолина и других, стабилизирующих обратные эмульсии.
Адъювант готовят следующие образом.
Эмульгатор СПАН-80 растворяют в ПАОМ в оптимальных соотношениях и стерилизуют общепринятыми методами: либо методом стерилизующей фильтрации с помощью пластин марок СФ, ЕК, УАМ-150 и т.п. при комнатной температуре, либо нагреванием в сушильном шкафу до 120-130оС в течение 1-1,5 ч. Готовый адъювант представляет собой маслянистую жидкость цвета от светло-желтого до коричневого в зависимости от качества эмульгатора СПАН-80. Допускается слабая опалесценция. Вязкость такого адъюванта при 20оС колеблется в пределах 12-15 мм2/с в зависимости от вязкости масляной основы. Готовый адъювант проверяют на реактогенность на белых мышах и хранят при комнатной температуре до момента использования.
Реактогенность предлагаемого адъюванта и его компонентов в сравнении с прототипом и его ингредиентом контролируют на белых мышах. Для этого группе мышей в количестве 10 голов массой 20 
1 г каждая в одну из задних лопаток подкожно в область стопы вводят образцы по 0,05 мл. Через 10 дней после введения задние лапки обрезают по скакательный сустав и взвешивают. Реактогенность (Р) определяют как процент образовавшейся массы опухоли лапок от введения образца по сравнению с контрольными лапками и выражают формулой:
P 
1 
100% где 
Мо сумма масс лапок, в которые были введены образцы;Мк сумма масс контрольных лапок.
Результаты сравнительной оценки реактогенности различных масел и адъювантов представлены в табл.2.
Из представленных в табл.2 данных следует, что предлагаемый адъювант и ПАОМ обладают наименьшей реактогенностью для мышей в сравнении как с отечественным минеральным маслом, так и зарубежным Маркол-52 и неполным адъювантом Фрейнда, используемыми для производства противоящурных биопрепаратов.
Кроме количественной характеристики реактогенность предлагаемого адъюванта и ПАОМ изучают при подкожном введении в качественной пробе на крупном рогатом скоте, овцах, кроликах и при внутримышечном на свиньях и морских свинцах.
Результаты исследования приведены в табл.3.
Изготовление эмульсионной формы вакцины с новым адъювантом сводится к приготовлению эмульсии типа воды в масле. Эмульсионную вакцину получают путем эмульгирования равных частей полученного антигена и предлагаемого адъюванта с помощью коллоидных мельниц или других гомогенизаторов до образования эмульсии белого цвета.
В результате получают противоящурную эмульгированную вакцину, не растворимую в воде, жидкой консистенции (до 700 мм2/с), которая легко рассасывается с места введения, не вызывает образования абсцессов, обладает выраженной иммуногенностью для КРС в дозе 2 мл и для свиней в дозе 1 мл через 21 день после вакцинации. Вакцину вводят свиньям внутримышечно, а КРС и белым мышам подкожно. Сорбированно-масляную форму вакцины готовят путем механического смешивания сорбированного антигена и предлагаемого адъюванта.
Из представленных в табл.3 данных следует, что при подкожном и внутримышечном введении образцов предлагаемого масла и адъюванта местные реакции у животных отсутствуют или отмечаются небольшие соединительно-тканевые гранулемы, в то время как компоненты известного адъюванта обладают повышенной реактогенностью с образованием абсцессов.
П р и м е р 2. Эффективность предлагаемого адъюванта проварена в экспериментах на лабораторных и сельскохозяйст- венных животных и двух формах противоящурной вакцины: эмульсионной и сорбированно-масляной из лапинизированного вируса А22.
Сорбированно-масляную вакцину вводят белым мышам подкожно.
В лабораторных опытах контроль авирулентности инактивированных антигенов контролируют на новорожденных мышатах. При введении 20 мышатам-сосунам в дозе по 0,1 мл подкожно все антигены были авирулентны.
Проводят испытания на стабильность эмульсии образцов противоящурной вакцины на основе предлагаемого адъюванта. Результаты представлены в табл.4.
При диспергировании водного антигена с соответствующим количеством адъюванта получают во всех случаях стабильные эмульсии типа воды в масле, за исключением 5 образца, в котором 1,5 мас. эмульгатора было недостаточно для получения стабильной эмульсии, а ведение в состав эмульсии 10 мас. эмульгатора приводит к образованию высоковязких препаратов. Стабильность эмульсии контролируют путем центрифугирования при 3000 об/мин в течение 30 мин и хранения в термостате при 37оС в течение 1 месяца. При такой проверке не отмечают отделения водной фазы и эмульсия сохраняет свои физические свойства. Эмульсии на основе предлагаемого адъюванта относятся к типу воды в масле и отличаются выраженной стабильностью и относительно невысокой вязкостью в широком интервале температур от 4 до 25оС, что выгодно отличает ее от вакцины на основе известного адъюванта.
Таким образом, предлагаемый адъювант позволяет получать эмульсионные формы вакцин типа воды в масле с невысокой вязкостью, умеренной реактогенностью и незастывающими при хранении при температуре 2-6оС.
П р и м е р 3. Для испытания на лабораторных животных изготавливают две серии эмульсионной и две серии сорбированно-масляной противоящурной вакцины из лапинизированного вируса А22 соответственно на основе предлагаемого и известного адъювантов. Кроме того, из этого антигена изготовлена противоящурная сорбированная вакцина. Количество 146S компонента во всех образцах вакцин было равноценным. Результаты иммуногенности на взрослых белых мышах представлены в табл.5.
Из табл.5 видно, что наиболее выраженной иммуногенностью обладают вакцины, изготовленные на основе полиальфа-олефинового масла. При этом установлено, что эмульсионная вакцина с предлагаемым адъювантом почти в три раза активнее препарата на основе известного адъюванта (ИМД50 0,087 мл против 0,250 мл). Сорбированно-масляная вакцина на основе предлагаемого адъюванта активнее вакцины этой же формы с известным адъювантом и в 6 раз активнее сорбированной (ИМД50 0,054 мл против 0,066 и 0,320 мл соответственно). Одновременно отмечено, что у мышей на месте введения эмульсионной вакцины, приготовленной на основе предлагаемого адъюванта, местных реакций не установлено, а у остальных животных в особенности при введении сорбированно-масляной вакцины с известным адъювантом, отмечены абсцессы.
П р и м е р 4. Для испытания на свиньях используют по одной серии эмульсионной противоящурной вакцины из лапинизированного вируса А22, приготовленных на предлагаемом (серия 173) и предлагаемом (серия 168) адъювантах.
Испытание иммунитета проводят на подсвинках массой 30-35 кг, привитых эмульсионной вакциной внутримышечно в объеме по 1 мл и зараженных путем введения в слизистую оболочку языка гомологического афтозного вируса в дозе 10000 ЛД50/0,2 мл.
При этом испытание проводят на 21-й день после введения вакцины. Результаты контроля иммуногенности образцов эмульсионной противоящурной вакцины из вируса типа А22 приведены в табл.6.
Из представленных в табл. 6 результатов следует, что противоящурная эмульсионная вакцина, изготовленная на основе предлагаемого адъюванта, обладает более выраженной иммуногенной активностью по сравнению с вакциной на основе предлагаемого адъюванта, где один подсвинок заболел ящуром с генерализацией процесса.
Противоящурные вакцины с предлагаемым адъювантом обладают умеренной реактогенностью, т. к. при патолого-анатомическом исследовании на 30-й день после прививки у одного подсвинка изменений на месте введения не обнаружено, а у трех отмечены вакцинальные гранулемы со средним размером 3х2х1 см с хорошей организацией соединительной ткани, в то же время у всех подсвинков, привитых вакциной с известным адъювантом, обнаружены абсцессы.
П р и м е р 5. В опытах на крупном рогатом скоте используют по одной серии противоящурной эмульсионной вакцины из лапинированного вируса ящура А22, изготовленных на основе предлагаемого (серия 173) и известного (серия 168) адъювантов.
Результаты контроля их иммуногенной активности представлены в табл.7.
Из приведенных в табл.7 данных следует, что противоящурная эмульсионная вакцина из лапинизированного вируса ящура А22, изготовленная на предлагаемом адъюванте, обладает выраженной иммуногенной активностью, так как при контрольном заражении через 21 день после вакцинации оба животных противостояли заболеванию, по сравнению с вакциной с известным адъювантом, где одно животное заболело ящуром с генерализацией процесса.
При забое через 30 дней после прививки у животных, привитых вакциной на основе предлагаемого адъюванта, на месте подкожного введения препарата отмечают соединительно-тканевые гранулемы со средним размером 10х7,5х3 см, хорошо организованные, в то время как у животных, привитых с известным адъювантом, обнаружены абсцессы.
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к масляным адьювантам. Целью изобретения является снижение вязкости и реактогенности препарата, а также повышение его адъювантных свойств. Для этого адъювант содержит полиальфаолефиновое масло (ПАОМ) и эмульгатор, при следующем соотношении компонентов, мас. полиальфа-олефиновое масло 85-95; эмульгатор 5-15. При этом в качестве эмульгатора можно использовать сорбитаноолеат, пента эритритоолеат, безводный ланолин и др. 7 табл.
Рисунки
Заявка
4693790/13, 22.05.1989
Мамков Н. С, Савельев В. Ю, Дудников А. И, Михалишин В. В, Шипилов В. И, Цветков О. Н, Топорищева Р. И, Колесова Г. Е, Шепотановская Г. А, Зеленцов Ю. Н, Потанина В. А, Поварова Н. И, Крылов В. В
МПК / Метки
МПК: A61K 35/06, A61K 39/135
Метки: адъювант
Опубликовано: 09.07.1995