Способ окраски эритроцитов для люминесцентной микроскопии — SU 1305558 (original) (raw)
Текст
) (11) и 4601 И РЕТЕН ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИИ ПИСАНИЕ ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(7) Семипалатинский государственныймедицинский институт(54) СПОСОБ ОКРАСКИ ЭРИТРОЦИТОВ ДЗИЛЮМИНЕСЦЕНТНОЙ МИКРОСКОПИИ(57) Для повышения контрастностиклеток иудлинения времени свечениякрасителя эритроциты свежевзятойцельной крови отмывают физиологическим раствором, фиксируют во взвешенном состоянии в растворе параформглютарового альдегида на 0,1 М фосфатном буфере рН 7,2-7,3 в течение 2 ч при 4 С в соотношении эритроциоты:Фиксирующая смесь 1:1. Эритроциты отмывают цитратно-фосфатным буфером с рН 6,8-7,2 и центрифугируют при 2000 об/мин 15 мин. Затем готовят мазки и окрашивают раствором акридинового оранжевого на цитратно-фосфат. ном буфере рН 6,8-7,2 в разведении 1:10000 в течение 10-15 мин при 18- 24 С.микроскопируют при длине волны436 нм,Составитель Л.Соловьев,Редактор А.Козориз Техред Н,Глущенко Корректор А.Зимокосов Заказ 1421/40 Тираж 777 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ы, Раушская наб., д, 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4 1 3Изобретение относится к медицине,а именно к методам морфофункциональ-,ного анализа клеток крови, и можетбыть использовано в гематологии дляизучения структуры и функциональногосостояния эритроцитов.Цель изобретения - повышениеконтрастности клеток и удлинениевремени свечения красителя путем оптимального сочетания фиксатора икрасителя,П р и м е р. Для Флуорохромирования эритроциты свежевзятой цельнойкрови белых беспородных крыс триждыотмывают физиологическим раствороми фиксируют во взвешенном состояниив растворе параформглютаровый альдегид на 0,1 М Фосфатном буфере прирН 7,2-7,3 в течение 2 ч при 4 С всоотношении эритроциты:фиксирующаясмесь 1:1 (объем-объем). Затем эритроциты трижды отмывают от фиксаторацитратпо-Фосфатным буфером с рН 6,87,2 центрифугируя взвесь . при2000 об/мин в течение 15 мин. Из отмытых эритроцитов готовят мазки иокрашивают их раствором акридинового оранжевого, приготовленным на цит.ратно-фосфатном буфере рН 6,8-7,2в разведении 1:10000 в течение 1015 мин при 18-24 С,Окрашенный мазок двукратно промывают в течение 1 мин в том же буфере, покрывают покровным стеклом и Преимуществом предложенного способа является возможность выявлениябезъядерных эритроцитов методом люминесцентной микроскопии, получениеконтрастных длительно и стабильнофлуоресцирующих безъядерных эритро- Ю цитов, а также возможность проведения одновременных исследований окрашенных данным способом эритроцитовметодами люминесцентной, фазово-контрастной и электронной микроскопии.15 формула изобретения Способ окраски эритроцитов длялюминесцентной микроскопии путем 20 приготовления мазков, фиксации иокраски в красителе, о т л и ч а ю -щ и й с я тем, что, с целью повьшения контрастности клеток и удлинениявремени свечения красителя, Фиксацию проводят цельной кровью до приготовления мазков, при этом для Фиксации используют растворы параформглютарового альдегида на 0,1 М фосфатном буфере при рН 7,2-7,3, а в 30 качестве красителя используют 1:10000растворы акридинового оранжевого нацитратно-фосфатном буфере при рН 6,87,2, при этом окраску проводят в течение 10-15 мин.
Заявка
3863670, 09.01.1985
СЕМИПАЛАТИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ
КЕРХЕР МЕТА ЭМИЛЬЕВНА, ГЕНИНГ ТАТЬЯНА ПЕТРОВНА, ИВАНОВ ВЛАДИМИР ВАСИЛЬЕВИЧ
МПК / Метки
МПК: G01N 1/28
Метки: люминесцентной, микроскопии, окраски, эритроцитов
Опубликовано: 23.04.1987