Способ определения трипсина в крови — SU 1814075 (original) (raw)
СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 91 01 й 3354 СУДАР СТВЕ ННОДОМСТВО ССОСПАТЕНТ ССС ТЕНТ ТЕНИ ЛЬСТВУ(56) Инструкция к нКИ фирмы Адеп ВАвстралия.(54) СПОСОБ ОПРЕДВ КРОВИ вание: в медицине и биологии, в иммунохимии для количестеделения трипсина. Сущностьк твердой фазе, сенсибилизипсином, добавляют исследуеили стандарт, поликлональные ипсину, затем выявляют колившихся с твердой фазой антищью белка "А" стафилококка, роксидазой хрена, и по калибивой определяют содержание сследуемом образце, Способ ростить анализ, 1 табл,17ател ьский институт охдетства МЗ ТаджССР А,пилосовбору Тгурзпоцеп ЕЗА певса 1 Насед, 1988,1 о ЕЛЕНИЯ ТРИПСИНА неи ивую итрипсин ра, Строят стандартнуюопределяют концентрацледуемом образце,с леОпределение трипсина в крови1. В лунки планшета вносят по 0,05 млстандартной концентрации трипсина илиисследуемой сыворотки и по 0,1 мл антисыворотки к трипсину. Инкубируют в течениеночи при 20-25 С,11, Промывают 3-4 раза буферным раствором.11. В лунки вносят по 0,1 мл растворабелка "А", меченного пероксидазой хрена,И н куб ируют 2 ч и ри 20 - 25 С.И. Промывают 3 - 4 раза буферным раствором.Ч. В лунки вносят по 0,1 мл раствора,содержащего ортофенилендиамин и перекись водорода, инкубируют 30 мин в темноте.Затем останавливают реакцию добавлением0,2 мл 1 М раствора серной кислоты,%, Определяют оптическую плотностьсодержимого лунок,Обозначение проб в опыте. ИСАНИЕ И К АВТОРСКОМУ СВИзобретение относится к медицине ибиологии, а именно к иммунохимии,Цель изобретения - упрощение способаопределения трипсина в крови,Способ осуществляют следующим образом.В качестве твердой фазы используютлунки 96-гнездного планшета, сенсибилизированного трипсином, в качестве антител -кроличью антисыворотку без предварительного выделения очищенных антител противтрипсина, в качестве метки - белок "А" стафилококка, конъюгированный с пероксидазой хрена. К твердой фазе добавляютисследуемый образец или стандарт (содер ф жит известное количество трипсина, ингибированного контрикалом) и антисывороткупротив трипсина, инкубируют в течение ночи. Комплекс - иммобилизованный трипсинантитело-промывают, добавляют белок "А",меченный пероксидазой хрена, инкубируют2 ч, промывают, вносят субстрат для фермента, через 30 мин останавливают .реак-.цию добавлением серной кислоты иопределяют оптическую плотность раство(57) Использв частностивенного опризобретениярованной трмыи образецантитела к тчество связател с помомеченного провочной кртрипсина впозволяет уп 1814075 А 13 1814075 4 Результаты опрделения трипсина в крови Составитель В. ГавриловРедактор Н. Рожкова Техред М.Моргентал Корректор А Мотыль Заказ 1827 ВНИИПИ Тираж Подписноедарственного комитета по изобретениям и открытиям при Г 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Т СС здэтельский комби т "Патент", г. Ужго, ул.Гагарина 10 изводствен Ао - Ав. пробы калибровочной кривой, 1, 2, 3 - пробы исследуемых образцов.И. Затем, как видно из таблицы, определяют отношение оптической плотности проб калибровочной кривой и исследуемых образцов по отношению к Ао(в которой концентрация трипсина равна "0") в процентах, по этимзначениям строят калибровочную кривую, Экстраполируя на кривую результаты исследуемых сывороток, находят количество трипсина в пробе,Таким образом, упрощение способа определения трипсина в крови достигается использованием препаратов антител, не требующих дополнительной очистки,ФФормула изобретенияСпособ определения трипсина в крови,включающий проведение твердофазногоанализа с последующей регистрацией опти 5 ческой плотности образца и расчетом концентрации трипсина по калибровочнойкривой,отлича ющийсятем,что,сцельюупрощения способа, при проведении имму. ноферментного анализа осуществляют сен"О сибилизацию твердой фазы трипсином, вкачестве антисыворотки используют поликлональные антитела к трипсину, а в качестве выявляющего антитела оеагентаиспользуют белок "Астафилококка, мече 15 ный пероксидазой хрена,