217687 — SU 217687 (original) (raw)
Взамен ранее изданного212682 ОПИСАНИЕ ИЗОБВЕТЕН Ия К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУСова Соеетскит Социзлистичзскиз РеспублиюВСЕСОВЗ.; - ).ависимое от авт. свидетельства42/, 5/О Заявлено 05,.1967 ( 1124465/28-13)с присоединением заявкиПриоритетОпубликовано 07,Ч.1968, Бюллетень16Дата опубликования описания 15.Х 11.19 б по аелаий и открыте Мииистро ми МПК 60 изобретепри Со УДК 37.127.6 088.8)явитель Б ОПРЕДЕЛЕНИЯ СВОБОДНЫХ АМИНОК В МОЛОКЕ И МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТАХ Т У б С, заания 4 льт 45 - лучаепигмом. 1Известны способы определения свободных аминокислот в молоке и молочных продуктах путем осаждения из пробы исследуемого продукта белков молока абсолютным спиртом, удаления осажденных белков одним из известных способов, например центрифугированием, извлечения из пробы балластных веществ и хроматографирования, предусматривающего многократную разгонку свободных аминокислот на хроматографической бумаге системой растворителя, состоящей из и-бутанола, ледяной уксусной кислоты и дистиллированной воды, а также сушку хроматограммы после каждого раза разгонки и проявление пятен аминокислот раствором нингидрина в ацетоне, Очистку пробы от балластных веществ ведут с помощью ионообменной смолы, а разгонку пятен берут каждый раз до конца листа хроматографической бумаги,Для более точного определения свободных аминокислот, а также упрощения его предложено пробу исследуемого продукта брать в количестве 200 мл, извлечение балластных веществ из пробы осуществлять подкисленным концентрированной соляной кислотой абсолютным спиртом, соотношение компонентов в системе растворителей (и-бутанол - ледяная уксусная кислота - дистиллированная лода) подбирать соответственно 4: 1: 1, разгонку аминокислот вести вначале до /з листа хроматографической бумаги, затем до /2, з/4и два раза до конца листа, сушить хроматограмму при комнатной температуре18 - 20 С) .5 Для предотвращения потерь аминокислот впроцессе подготовки пробы исследуемого продукта к хроматографированию следует фильтрат, полученный после удаления белков изпробы исследуемого продукта, и элюат, полуО ченный после удаления балластных веществ,упаривать в вакуумном сушильном шкафупри температуре 45 - 55 С и давлении О,б ати,а концентрат аминокислот, полученный послеупаривания элюата, растворять в 3 мл5 10%-ного изопропилового спирта.Чтобы более четко выявлять проявленныепятна аминокислот, целесообразно хроматограмму после сушки выдерживать 20 минпри б 5 С,20 Способ заключается в следующем, Б пробу молока в количестве 200 мм, к п добавляют 400 мл этанола, выдерживают менее 2 час при температуре - 3, - 4 2 Б тем удаляют белки путем отфильтров или центрифугирования. Прозрачный ф рат упаривают при О,б атм и температуре 55" С в вакуумсушильном шкафу. В с наличия большого количества липидов и ЗО ментов фильтрат обрабатывают хлорофор217687 Предмет изобретения Составитель М. И. Адреева Редактор В. ф. Чулкова Техред Л. Я, Левина Корректор Г, С, МухинаЗаказ 3250/5 Тираж 480 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва Ж, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр, Сапунова, 2 3Сгущенный остаток, полученный после сушки, содержит кроме аминокислот балластные вещества, которые осаждают подкисленным с помощью концентрированной соляной кислоты этиловым спиртом (на 100 мл абсолютного этанола 0,5 мл концентрированной НС 1). Отфильтровывают балластные вещества и упаривают (при том же режиме сушки) элюат аминокислот.Аминокислоты (сухой остаток) растворяют в 3 мл 10%-ного изопропилового спирта, Образцы наносят на хроматографическую бумагу, подсушивают, после чего помещают в хроматографическую камеру с системой растворителей и-бутанол - ледяная уксусная кислота - дистиллированная вода в соотношении 4:1:1,Для разгонки пятен систему растворителей пропускают через лист хроматографической бумаги, причем делают это ступенчато по следующей схеме: на /з, /2, /4 листа и два раза до конца хроматограммы. После каждой разгонки хроматограмму сушат при темпера. туре помещения,Окончив пятикратный прогон растворителей, хроматограмму проявляют 0,5 а/о-ным нингидрином в ацетоне с добавкой ледяной уксусной кислоты и дистиллированной воды в соотношении 95: 1: 4. После сушки проявленной хроматограммы ее выдерживают 20 мин при 65 С.Этим способом четко разделяются до 15 следующих аминокислот: цистеин + цистин, лизин, гистидин, аргинин, серии, глицин, аспарагиновая кислота, глютаминовая кислота, треонин, алании, тирозин, валин, метионин, фенилаланин, лейцин+ изолейцин. Интенсивность окраски пятен зависит от количественного содержания той или иной аминокислоты,1. Способ определения свободных аминокислот в молоке и молочных продуктах, заключающийся в осаждении из пробы исследуемого продукта белков молока абсолютным спир 5 10 15 го 25 30 35 40 45 4том, удалении осажденных белков одним из известных способов, например центрифугированием, упариванием фильтрата, извлечении из пробы балластных веществ и хроматографировании, предусматривающем многократную разгонку свободных аминокислот на хроматографической бумаге системой растворителя, состоящей из н-бутанола, ледяной уксусной кислоты и дистиллированной воды, а также сушку хроматограммы после каждого раза разгонки и проявление пятен аминокислот на хроматограмме раствором нингидрина в ацетоне с добавлением ледяной уксусной кислоты, отличающийся тем, что, с целью более точного определения свободных аминокислот, а также упрощения способа, пробу исследуемого продукта берут;в количестве 200 мл, извлечение балластных веществ из пробы осуществляют подкисленным концентрированной соляной кислотой абсолютным спиртом, соотношение компонентов в системе растворителей (к-бутанол - ледяная уксус. ная кислота - дистиллированная вода) под бирают соответственно 4:1: 1, причем разгон ку аминокислот ведут вначале до Чз листа хроматографической бумаги, затем до /2, после чего до а/4 листа и два раза до конца листа, при этом сушку ведут при температуре от 18 до 20 С,2, Способ,по п. 1, отличающийся тем, что, с целью предотвращения потерь аминокислот в процессе, подготовки пробы исследуемого продукта к хроматографированию, фильтрат, полученный после удаления белков из пробы исследуемого продуктаи элюат, полученный после удаления балластных веществ из пробы продукта, упаривают при температуре, равной 45 - 55 С, и давлении, равном 0,6 ати, а концентрат аминокислот, полученный после упаривания элюатарастворяют в 3 мл 10%- ного изопропилового спирта.3, Способ по п. 1, отличающийся тем, что, с целью более четкого выявления проявленных пятен свободных аминокислот, хроматограмму после сушки выдерживают 20 мин при 65 С.