Способ получения рубомицина — SU 324770 (original) (raw)
Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬгг,:ТВ ависимое от авт. свидетельства,;" 1,Ч 1,1967 ( 1166639/311. Кл, А 611 с 21/О аяв присоединением заявки-Чосударстаенный комитет Совета Иинистраа СССР пе делам изобретений и открытийиоритет -Опубликовано 23.Ч.1973, Бюллетень Ъ Дата опубликования описания 9.Х 1.197 УДК 615,779,9явител СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РУБОМИЦИН Изобретение относится к способам получения антибиотиков, в частностями рубомицнна.Известен способ, получения рубомицпна путем ферментации Ас 1 гпогпусез соегц 1 ео цЫ- йцз. Указанный способ не обеспечивает полу чение препарата достаточно высокого качества с удовлетворительным выходом.С целью повышения;выхода и качества рубомицина мицелий экстрапируют органическим расгворителем, например ацетоном, при 1 О рН около 4,0. Для очистки антибиотика производят экстрагирование, например, хлороформом при рН 8,8 - 8,9 с последующим подкислением экстракта до рН 3,5 - 3,9. Разделение рубомицина,на фракции А, В и С произ водят хроматографированием на колонке с водной кремниевой кислотой с последующим элюированием органическим растворителем,Компонент А выделяют смесью хлорофор ма, бензола и метанола в соотношении 100: 10: 5. Компонент В выделяют смесью тех же растворителей, но взятых в соотношении 100: 10: 15. Компонент С выделяют метанолом.П р и м е р. 20 кг мицелия, полученного фильтрованием 250 л культуральной жидкости, экстрагируют двойным количесгвом ацетона, подкисленетого соляной кислотой до рН 4,0. Экстракцию ведут в течение 1. чггс при перемешввании, после чего экстракт отделяют н повторяют экстракцию одним объемом ацегона, содержащего 10% воды. Объединенный экстракт нейтрализуют до рН упаривают в вакууме и фильтруют, промывая осадок два ,раза по 0,5 г воды, подкисленной до рН 4,0 соляной кислотой. Фильтрат и промывные воды подщелачивают 10%-ным едким натром до рН 8,9,и трижды экстрагируют хлороформом порциями по 4,4, 2,2 и 2,2 л. Экстракт промывают водой, сушат над сернокислы м натрием и упаривают в вакууме до 100 лг. К остатку добавляют 50 лг безводного ацетона, а затем по капляи при перемешиванип 0,5 н. раствор хлористого водорода в ацетоне до рН 3,9. Затем добавляют еще 50 1 г ацетона, образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают его небольшим количест,вом безводного ацетона и сушат в вакуу.;- эксикаторе.Получают 15,6 г рубомицина, содержащего 30% компонента А, 28,5 се компонента В и 41,5% компонента С. Из маточного раствора после отделения осадка упариванием в вакууме до небольшого объема с последующим вливанием в десятикратный объем смеси серного и петролейного эфира выделяют еще 2,2 г препарата.Для разделения рубомицина на фракции 25, г суммарного препарата антибиотика растворяют в 250 мл смеси хлороформа, бензо324770 Предм ет изобретения Составитель В. 1 аратутаТехред Г. Дворина Корректор Н. Прокуратова 1 едакгор Е. Хорина наказ 434/1278 Изд.591 Тираж 467 Подписное Ц 11 ИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раупгская наб., д, 415Тип, Харьк. фил, пред, 11 атеит ла и метанола (100: 10: 5) и наносят на колонку с водной кремниевой кислотой 1250 г кремниевой кислоты с размером частиц 0,1 0,25 мм суспендируют в хлороформе н вносят в колонку диаметром 4 см). Элюцию сначала проводят той же системой растворителей в количестве 1750 мл со скоростью 40 - 48 млlчас,слг 2, собирая фракции по 500 .и.г. Затем продолжают элюцию 1700 мл смеси хлороформа, бензола и метанола при соотношении компонентов 100: 10: 15, сооирая фракции по 100 мл. Остававшийся на колонке компонент С элюируют 1100 мл этанола.Полученные фракции анализируют методом бумажной хроматографии в системе анетон, бензол, вода при соотношении 12; 3: 2 и однородные фракции объединяют, Смесь фракций, содержащих коипонегнт А, упаривают в вакуууге до 60 мл и осаждают препарат десятикратным объемом иетролейного эфира, Выход 5,38 г. Фракции, содержащие компоненты В и С, упаривают в вакууме досуха, растворяют остатки соответственно в 60,и 75 мл метанола и проводят осаждение иятнадцатикратныпм объемом этилового эфи,ра. Выход 5,355 г компонента В и 7,283 г компонента С. 1. Спосоо получения рубомицина путе. гфермеггтации Лс 11 погпусез соегц 1 еогнЬ 1 дцз, от личающийся тем, что, с целью повышения выхода и качества целевого продукта, мицелий экстратируют органическим растворителем, например ацетоном, при рН около 4,0 антибиотик очищают экстрагировапием, например, 10 хлороформом при рН 8,8 - 9,0, экстракт подкисляют до рН 3,5 - 3,9, далее рубомицин разделяют хрсматографированием на колонке с водной кремниевой кислотой и элюируют комлоненты А, В и С органическим раствори телем.2, Способ по п. 1, отличающийся тем, чтокомпонент А выделяют смесью растворителей хлороформа, бензола и метанола, взятых в соотношении 100: 10: 5.20 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что компонент В выделяют смесью растворителей хлороформа, бензола и метанола, взятых в соотношении 100: 10: 15.4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что компонент С выделяют метанолом,