Способ получения протеолитического фермента — SU 703568 (original) (raw)
Е(. ,-":,явте ".,- .-:ЯАЯ библиотека,ф 4 О П оц 703568 Союз Соаетскик Социалистических Республик(51)М. Кл.2 С 12 0 13/10 Государственный комитет СССР по делам иэоСретеиий и открытий(54) .СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОГО ФЕРМЕЙТА Хцв используют штаммы Вас 111 цв о 11- . допИгорМ 1 цз 21 р или Вас 111 цв ч 1 гда 1 цв 44 б. Выращивание продуцентовведут в среде следующего состава, вес,Ф: глицерин 1,5-2,5; цитрат Ба 0,4-0,61 КНРО+ 0,09-0,11 т БаНРО06-0 81 БН 4 БОэ 006-008 у Мд 8040,015-0,025 р БаСС 2,5-3,5 р остальноеводопроводная вода.Штаммы хранятся в музее живых культур кафедры микробиологии Биологического факультета МГУ и имеют следующие характеристики.Вас 111 цв о 11 допЫгорМ 1 цз 21 р представляет собой грамположительные палочки размером 1,6-3,6 х к 0,7-0,8,0, иногда образующие короткие цепочки, перитрих. Споры продолговатые, расположены не строго локалиэо" вано, клетку не деформируют. Желати" . .ну разжижает, молоко пептониэируют, 1 восстанавливает нитраты, усваивает ;минеральный азот, хорошо гидролизует крахмал, при росте на сахарах образуется плотная пленка, На РПЛ рост обнльнЬ. поверхность колоний бугрис" тая, кожйстая, на безаэотистой среде Эшби хорошо растет, образуя плоские колонии, на МПЛ образует сероИзобретение относится к микробиологической промышленности, а именнок способам получения ферментов иэмикроорганизмов, 5Известен способ получения протеолитического фермента, предусматривающий культивирование микроорганизмоврода Вас 111 цэ на питательной среде,содержащей источники углерода, азо Ота и минеральные соли, отделениеклеток и выделение целевого продуктаиз культуральной жидкости (13В качестве продуцента используютштаммы Вас 111 цв яцЬ 1111 в и Вас 111 цвтаевепСег 1 сцз.Недостатком известного способаявляется низкая фибринолитическаяи тромболитическая активность привысокой казеинолитической активности, что ограничивает применейие фермента для медицинских целей. Крометого, способ требует длительноговремени культивирования,Целью изобретения является увеличение фибринолитической и тромболи"тической активности фермента и сокращение времени культивирования,Цель достигается тем, что попредлагаемому способу из рода Вас 11(71) Заявитель московский ордена ленина и ордена трудового красного знамени государственный университет им. М. В. Ломоносова703568. формула изобретения ЦНИИПИ Заказ 7762/28 Тйраж 526 ПодписноеФилиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4" - водброд) "на картофеле оОст обильный,сухой, кружевной,Вас 111 цз ч 1 гдацз 44 б представляетсобой грамположительные палочки размером 1)5,О х 0)6-0)7,О) одиночные исоединенные в цепочки; перитрих.Споры продолговатые, экстерминальнорасположены, клетку не деформируют)Разжижают желатину, пептониэируетмолоко, усваивает минеральный и неусваивает молекулярный азбт, вбсста-.навливает нитраты, гидролиэует крахмал, образует кислоты на глюкозе,манните, сахарозе. На беэазотистой,среде Эшби рост крайне скудный, наРПА штрих белый, слегка выпуклый,поверхность неровная, с влажным блес 15ком, на картофеле рост обильный;бугристый, белый.Продуценты образуют "внесдеточиуюпротеазу на малокомпонентной средеследующего состава, вес.%: глицерин)20цитрат Иа - 0,5, КЙРО - О,"1;БахНРО 4, - 0,7, ИН БОэ - 0,07,МдБО, - 0,02, ИаС 1 - 3, в течение,24 ч, затем отделяют клетки й фермент осаждают из культуральной жидкос ти сернохислым аммбнием при насыщегнии 0 7-0 9) )П р и м е р 1. В синтетическуюсреду, содержащую (в ес. Ъ)/глицерин)цитрат Ма - 0,5, КНРО, - 0,1, 30На НРО 4 - 0,7, БН 4 БОЭ,07)МдЯО 4 - 0,02, БаС 1 - 3, йосле стери"лизации вносят 5 об.Ъ одноуточногожидкогопосевного ЫатериалаВас. 011 доп 11 горйх 1 цв 21 р, выращенного на посевной среде, состоящейиэ сухого рыбного агара - 0,5)дрожжевого экстракта - 0)3) йептона 0,5%. Культивированиеосуществляютглубинным Способом в колбах на 750 мд 40со 100 мл среды на качалках при 30 фСв тЪчение 2:4 ч. Получеййаякульту ральная жидкость содержит 2684 уел.ед/млфйбринолитическ 4 иакивйостй,4 04 каз, ед/мл каэеинолитйческойактивности и растворяет тромбй за,30 мин. Выделение фермейта из культуральной жидкости после отделенйяклеток центрифугированиеьТ гФовьдятс помощью сернокислого аммония 0,8насыщения. Полученный препарат обладает удельной активностью по фибринолизу 5000-6000 усл. ед/мг белка,по казеинолизу - 6-10 каз.ед/мг бел-ка.П р и м е р 2. В синтетическую 55среду указанного выше состава после,стерилизациивносят 5 об.Ъ, односуто 4 ного жидкого йосевного"материала Вас. тт 1 гда 1 цз 44 б, выращенйого на посевной среде, состоящей из сухого рыбного агара - 0)53) дрожжевого экстраКта - 0,3%) пептона 0)5.Культивирование продуцента осу"ществляют в течение 24 ч глубинным способом на качалках в колбах на 750 мл со 100 мл среды, Полученная культуральная жидкость содержит 3217 усл. ед/мл фибринолитической активности, 6,2 каз. ед/мл казеинолитической активности и растворяет тромбы крови эа 40 мин. Выделение Фермента из культуральной жидкости после отделения клеток центрифугированием проводят с помощьюсернокислого аммония 0,75 насыщения, Полученный препарат обладает удельной активностью по фибринолиэу 5400 усл. ед/мг белка, по казеинолизу каэ. ед/мг белка.Данный способ позволяет получить фермент с высокой Фибринолитической, тромболитической и низкой казеино" литической активностью эа короткое время культивирования. 1. Способ получения протеолитического фермента, предусматривающийкультивирование микроорганизмов рода Вас 111 цз на питательной среде,содеражщей источники углерода, азотаи минеральные соли, отделениеклеток и выделение целевого продуктаиз культуральной жидкости, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения Фибринолитической и тромболитической активности фермента исокращения времени культивирования,из рода ВасШцв используют штаммыВас 111 цв о 11 допЫгорп 11 цз 21 р илиВас 111 цв чХгда 1 цв 44 б.2, Сйособпо п. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем,что выращивание продуцентов ведут в среде следующего -состава, вес.Ъ: глицерин 1,5-2,5;цитрат На 0,4-0,6; КНдРОО)09-0,11;ЮаНРО 4. О, 6-О, 8 р .ИН 4 ИО э О, О 6-О, 08 )Мд 304 О) 015-0,025) БаС 1 2,5-3,5)остальное - водопроводная вода.Источники информации,прйнятые во внимание при экспертизе1. ЕгоровН.С. Ушакова В,И;О фибринолитической и тромболитической активности некоторых бакте-.рийф) Научный доклад высшей школы,Бйологические науки, 1968, Р 6,93-98.