Способ получения нуклеозидов или их фармацевтически приемлемых сложных эфиров — SU 1779256 (original) (raw)

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 779256 6,С 12 Р 19/4 51)5 С 07 Н РЕТ мещен- фармаиру сивно- олевалиц к ым исогрес-бенно сущей ВИЧ) СПИД ст ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(71) Дзе Велкам Фаундейшн, Лимитед (6 В) (72) Джордж Уолтер Кошалка, Томас Энтони Кренитский, Дженет Литстер Райдаит и Чарлин Луис Бернс (ОЯ)(56),).Воог 9.Сешеа, 9/1/, 1983, с.50 - 59, (54)Ч:ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НУКЛЕОЗИДОВ ИЛИ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫХ СЛОЖНЫХ ЭФИРОВ%ею Изобретение относится к 6-за ным 2, З-дидеоксинуклеозидам, их цевтическим производным, пригодны лечения и профилактики некоторых ных инфекций,СПИД относится к иммуносупрес му или иммунодеструктивному заб нию, которое предрасполагает инфекциям с возможным смертельн ходом. В сущности, СПИД связан с пр сирующим истощением Т-клеток, осо субсистемы помощник-индуктор, не поверхностныи маркер -ОКТ .Вирус иммунодефицита человека репродуцивно выделен от больных или больных с симптомами, которые2где В 1-Н или амина; Й 2-С 2-С 6-алкокси - или метокси замещенный Сз-Сб-циклоалкилом Сз-Св-циклоалкокси, пирролидинил, или аминогруппа, замещенная С 2-Сб-алкилом, Сз-Сб-циклоалкилом, или диэамещенная и Сз-Сб-циклоалкил - Сг-Сб-алкилом или диС 1-сб-алкилом, или их фармацевтически приемлемых сложных эфиров. Цель - разработка способа получения более активных соединений. Получение ведут рекцией пуринового основания ф-лы ВН, где В - соответствующий остаток пурина с 3-деокситимидином в апротонном полярном растворителе в фосфатном буфере в присутствии смеси ферментов переноса пентозила с последующим в случае необходимости переводом полученного соедине- . Б ния в его фармацевтически приемлемый сложный эфир, обработкой соответсгвуюгалоидангидридом, 1 табл. предшествуют СПИД. ВИЧ цитопатичен по-видимому, преимущественно инфици ет и разрушает Т-клетки, несущие ОК маркер, причем теперь общепризнано, что ВИЧ является зтилогическим фактором СПИДа.С момента открытия того, что иммунодефицитный вирус является этиологическим агентом СПИД, сделана множество предложений по созданию химиотерапевтических средств против вируса иммунодефицига человека, которые могут быть эффективны при лечении больных СПИД. Так, например, в описании на Европатент М 196185, раскры вается 3 аэидо-деокситимидин/апробированный над названием6-Циклопропилметоксипурин получаютнуклеофильным замещением хлорной группы у 6-хлорпурина (Ядва СЬев 1 са 1 з Со, Ят1 ойз МО) алкоксильным анионом, образованным при взаимодействии гидридэ и циклопропилметилового спирта.б-Циклопропилметоксипурин (0,505 г,26,5 ммоль) и 2,3-дидеокситимидин (0,908 г,40,1 ммоль) подвергают взаимодействию иразделению на смоле АО 1-Х 2 (ОН-форма) и 10ХАО, как описано в примере 18. Фракции,содержащие продукт, разделяют флэш-хро-матографией в колонке с силикагелем, 3 х 50см, используя смесь ацетонитрил: вода ,(98: 2, по объему), После лиофилизации по лучают 0,496 г б-циклопропилметоксипурин-3-0-2, 3-дидеоксирибофуранозида,Вычислено, %: С 57,92; Н 6,25; й 19,30,С 14 Н 18 йа 03Найдено, %: С 57,99; Н 6,28; М 19,27, 20П р и м е р 21, б-Циклопентилоксипурин 9-/3-0-2, 3 -дидеоксирибофуранозид,6-Циклопентилоксипурин получаютнуклеофильным замещением хлорной группы у б-хлорпурина (Ядва С 1 ев 1 са 1 з Со, Ят 251 оц 1 з МО)злкоксильным анионом, полученном при взаимодействии гидридэ натрия ициклопентанола,6-Циклопентилоксипурин (0,506 г 2,48ммоль) и 3-деокситимидин (О;856 г, 3,78 30ммоль) подвергают взаимодействию и разделяют на смоле АС-Х 2 (ОН-форма) и ХО по методике примера 18. Растворитель удаляют в вакууме из фракций, содержащихпродукт, и остаток разделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем, 3 х 50см, используя смесь хлороформ: метанол(95: 5, по объему), После лиофилизации выходит 0,385 г 6-циклопентилоксипурин-Р 0-2, 3 -дидеоксирибофуранозида, который 40анализируют в виде 0,15 гидрата,.Вычислено, %: С 58,68; Н 6,66; й 18,25;С 15 Н 20 К 40 З 0,15 Н 20Найдено, %: С 5 8,61; Н 6,53; М 18,25.П р и м е р 22, 6-Циклогексилоксипурин-. 459-Р-О, 3 -дидеоксирибофуранозид.6-Циклогексилоксипурина получаютнуклеофильным замещением хлорной группы в 6-хлорпурине (Ядва СЬев 1 са 1 з; Яс1 ойз МО) алкоксильным анионом, обраэуемым при взаимодействии между гидридомнатрия и циклогексанолом,6-Циклогексилоксипурин (0,50 г,.2,29ммоль) и 3-деокситимидин (0,776 г, 3.42ммоль) хроматографируют на колонке со 55смолой Аб-Х 2 (ОН-форма) и ХАОпо методике, описанной в примере 18, за исключением того. что дополнителььно к 5 млдиметилсульфоксида и 5 мл М, й-диметилформамида прибавляют 10 мл глима и используют 70 мл 10 мМ калийфосфатного буфера. рН 6,8, содержащего 0,04%калийазида, После лиофилизации выходит0,102 г б-циклогексилоксипурин-фО, 3-дидеоксирибофуранозида (т.пл, 105 С), который анализируют в виде 0,2 гидрата,Вычислено, %; С 59,59; Н 7,01; М 17,40,С 16 Н 22 Й 4030,2 Н 20.Найдено, %: С 59,69; Н 6,93; й 17,27.П р и м е р 23. 6-Циклобутиламинопурин 9 Р-О, 3 -дидеоксирибофуранозид.б-Циклобутиламинопурин (0,510, 2,62ммоль) и 3-деокситимидин (0,896 г, 3,96 ммоль)подвергают взаимодействию и хроматогрэфируют на колонке со смолой АС-Х 2 (ОНформа) и смолой ХАОпо методике,описанной в примере 18, Растворитель удаляют из фракций, содержащих продукт, иостаток разделяют флэш-хроматографиейна колонке со силикагелем, 3 х 50 см, используя смесь хлороформ; метанол (9 . 1).После лиофилизации выходит 0,524 г б-цик.лобутиламинопурин-ф-О, 3 -дидеоксирибофуранозидэ(т.пл. 96 - 98 С).Вычислено, %: С 58,12; Н 6,62; Н 24.20,С 4 Н 19 М 502Найдено, %: С 58,19; Н 6,65;М 24,16.П р и м е р 24. 6-ДиэтиламинопуринР-2, 3 -дидеоксирибофуранозид.б-Диэтиламинопурин получают нуклеофильным замещением хлорной группы в бхлорпурине (Ядва СЬев 1 са 1 з, Ят 1 оаз МО)аминогруппой диэтиламина.6-Диэтиламинопурин (0,24 г,1,28 ммоль)и 3-деокситимидин (0,463 г, 2,04 ммол ь) подвергают взаимодействию и хроматографируют на колонке с АО-Х 2 (ОН-форма) иХАОпо методике, описанной в примере18. Растворитель удаляют в вакууме изфракций, содержащих продукт, а остатокразделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем, 5 х 20 см, используя хло-роформ, метанол (9: 1 по объему).Рэстворитель удаляют в вакууме из фракций, содержащих продукт, и остаток разделяют флэш-хроматографией на второйколонке с силикагелем 2,5 х 50 см, используяэтилацетат. Полученную смолу помещаютво флакон с ацетоном и после лиофилизацииполучают 0,98 г 6-диэтиламинопурин-3-02, 3 -дидеоксирибофуранозида, которыйанализируют в виде 0,25 воды и 0,20 ацетона,Вычислено, %; С 57,03; Н 7;44; М 22,78,С 14 Н 21 Й 5020,2 СЗН 600,25 Н 20Найдено, %: С 57,20; Н 7,39; й 22.72.Пи м е р 25. 6-Пирролидинпурин-ф 0-2, 3 -дидеоксирибофуранозид.6-Пирролидинпурин получают нуклео фильным замещением хлорной группы в бхлорпурине аминогруппой пирролидина,6-Пирролидинпурин (0,500 г, 2,64ммоль) и 3 -диокситимидин (0,901 г, 3,98ммоль) растворяют в смеси из 5 мл диметилсульфоксида и 5 мл М, М-диметилформамида. В реакционную смесь прибавляют 30 мл10 мМ калийфосфатного буфера, рН 6,8, содержащего 0,04% азидэ калия, и очищенные пуриннуклеоэидфосфорилаэу (20,000м,ед.) и тимидинфосфорилазу (10,000 м,ед,),асборбируемые в 10 мл 0 ЕАЕ-целлюлознойсмолы,и затем перемешивают в течение 7дней при 35 С. Смолу удаляют центрифугированием и надосадочную жидкость наносят на колонку со смолой А 61-Х 2(ОН-форма), 2,5 х 10 см, которая соединенас колонкой, заполненной ХА 0-2, 2,5 х 20 см,Колонки промывают 500 мл воды и полученный продукт элюируют метанолом, Послелиофилизации выходит 0,385 г б-пирролидинпурин-Р-2, 3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде 0,05гидрата (т, пл, 158 - 159 С),Вычислено, %: С 57,93; Н 6,63; И 24,13.С 14 Н 19 Й 502 0,05 Н 20Найдено, %: С 57,92; Н 6,67; М 24,11П р и м е р 26. б-Морфолинопурин-/30-2, 3 -дидеоксирибофураноэид6-Морфолинопурин получают нуклеофильным замещением хлорного радикала в6-хлорпурине (3 дгпа СЬеглса 1 з, ЯтойзМО) аминогруппой морфолина.б-Морфолинопурин (0,501 г, 2,44 ммоль)3 -деокситимидин (0,842 г, 3,72 ммоль) подвергают взаимодействию и хроматографируют на колонке с А 01-Х 2 (ОН-форма иХА 0-2 по методике, описанной в.примере18. После лиофилиэации выходит 0,292 г бморфолинопурин-Д-2, 3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде0,2 гидрата (т.пл, 97 С)Вычислено, %; 54,43; Н 6,33; й 22,67.С 14 Н 1 дй 50 з 0,20 Н 20Найдено, %: С 54,48; Н 6,28; й 22,52.П р и м е р 27, б-у, у-Диметилаллиламинопурин-ф-2, 3 -дидеоксирибофуранозид.б-у, у-Диметилаллиламинопурин (0,500г. 2,46 ммоль 9 дп 1 а СЬеп 1 саз, Ят 1 оцз МО)3-диокситимидин (0,752 г, 3,32 ммоль) подвергают взаимодействию и хроматографируют нэ колонке со смолой А 61-Х 2(ОН-форма) по методике, описанной в примере 18. Растворитель удаляют в вакууме изфракций, содержащих продукт, а остатокразделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем. 3 х 50 см, используя смесь хлороформ: метанол (95; 5, по обьему)Фракции, содержащие продукт, затем наносят на колонку с ХА 0-2, 2,5 х 20 см, и злюируют из метанола, Полученную смолу5 помещают во флакон с ацетоном и послелиофилизации получают 0,455 г б-у. у-диметилаллиламинопурин-Р-О, 3 -дидеоксирибофураноэида, который анализируют ввиде 0,45 воды и 0,20 ацетона.10 Вычислено, %: С 57,99; Н 7,21; И 21,68,С 15 Н 21 Й 502 0,45 Н 20 0,2 СЗН 60Найдено, %: С 57,77; Н 6,91; М 21,41.П р и м е р 28. б-Фурфуриламинопурин 9-3-0-2, 3 -дидеоксирибофуранозид.15 6-Фурфуриламинопурин (0,50%, 2,33ммоль) (Ядпа СЬеглса 1 з, Ятоцз МО) и3-деокситимидин (0,754 г,0 3,33 ммоль),подвергают взаимодействию и хроматографируют нэ колонке с А 61-Х 2 (ОН-форма) и20 колонке с ХА 0-2 по методике, описанной впримере 18. Растворитель удаляют в вакууме из фракций, содержащих продукт, и остаток разделяют флэш-хроматографией вколонке с силикагелем, 5 х 50 см, используя25 смесь хлороформ: метанол (9: 1, по объему),После лиофилизации выходит 0,303 г б-фурфуроламинопуринф 0-2, 3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде0,2 гидрата,30 Вычислено, %: С 56,49; Н 5,50: й 21,96С 15 Н 17 Й 503 0,2 Н 20Найдено, %: С 56,50; Н 5,53; Л 21,97,П ри м е р 29. 6-Бензилмеркаптопурин 9-Р-2, 3 -дидеоксирибофуранозид35 6-Бензилмеркаптопурин (0,501 г 2,7ммоль, Ядп 1 а СЬетса 1 з, 31оиз МО) и 3 деокситимидин (0,704 г, 3,11 ммоль) подвергают взаимодействию по методике,описанной в примере 18, за исключением40 того, что для растворения пуринового основания используют 10 мл глима. Растворитель удаляют в вакууме из фракций,содержащих продукт, и остаток разделяютфлэш-хроматографией на колонке с силика 45 гелем, 3 х 50 см, используя смесь хлороформ: метанол (95: 5, по обьему).Полученный продукт помещают во флаконс этанолом и после лиофилизации получают 0,304 г б-бензилмеркаптопуринф 0-2,50 З-дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде 0,05 воды и 0,05 этанолаб-Анилинопурин (0,500 г, 2,37 ммоль,519 аа СЬев 1 са 1 з, Ят 1 оо 1 з МО) и 3-деокситимидин (0.752 г 3,32 ммоль) подвергают взаимодействию и хроматографируют наколонке с А 61-Х 2 (ОН-форма) по методике, 5описанной в примере 18. Растворитель удаляют в вакууме из фракций, содержащихпродукт и остаток разделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем 2,5 х 50см, используя смесь растворителей хлоформ: метанол (95: 5, по объему). Послелиофилизации получают 0,470 г б-анилинопурин-ф-2, 3 -дидеоксирибофуранози-да, который анализируют в виде 0,05гидрата (т,пл, 170 - 172" С), 15Вычислено. %: С 61,55; Н 5,52; М 22,43,С 16 НПК 6020,05 Н 20Найдено, %; С 61,57; Н 5,55; й 22,43,П р и м е р 31, 2-Амино-б-этоксипурин 9-ф-2, 3 -дидеоксирибофуранозид, 202-Амино-этоксипурин (0,5 г, 2,8 ммоль,полученный нуклеофильным замещениемхлорной группы в 2-аминохлорпурина,(АОг 1 сЬ СЬегп 1 са 1 Со, М 11 юайее Ю) алкоксильным анионом в результате взаимодействия гидрида натрия и этанола) и3 -деокситимидин (0,950, 4,19 ммоль), подвергают взаимодействию и хроматографируют на колонках с АИ-Х 2 (ОН-форма) иХАОпо методике, описанной в примере ЗО18, Растворитель удаляют в вакууме изфракций, содержащих продукт, а остатокразделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем, 5 х 20 см, используя смесьхлороформ: метанол (9; 1, по объему). После 35лиофилизации получают 0,443 г 2 -аминоэтоксипурин-ф-2, 3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде О,Згидрата (т.пл, 150 С, частичное плавлениепри 65 С). 40Вычислено, %: С 50,63; Н 6,23; М 24,60.СОН пМ 50 з О,ЗН 20Найдено,%; С 50,77; Н 6,21; й 24,63.П р и м е р 32, 2,6,8-Триаминопурин-0-2, 3 -дидеоксирибофуранозид,452,6,8-Тиаминопурин (0,5.00 г, 3,0 ммоль)и 3-доекситимидин (1,02 г, 4,50 ммоль) подвергают взаимодействию и хроматографируют на колонках с А 61-Х 2 (ОН-форма) иХА 0-2, как описано в примере 18. После 50лиофилизации выходит 0,148 г 2,6,8-триаминопурин-/3-0-2, 3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде 0,7метанола (т.пл, 154 С).Вычислено, %: С 44,76; Н 6,24; К 34,08. 55СюН 15 М 7020,7 СН 40Найдено, %; С 44,51; Н 5,95; й 33,78.П р и м е о 33. 2-Амино-бензиламинопурин-3-0-2,3 -дидеоксирибофуранозид. 2-Амино-бензиламинопурин (0,2 г, 0,8 ммоль), полученный нуклеофильным замещением хлорного радикала в 2-амино-бхлорпурине (А дгсЬ СЬет 1 са 1 Со, М 11 ааиМее Ю бензиламином) и 3 -деокситимидин (0,282 г, 1,2 ммоль) подвергают взаимодействию и хроматографируют на колонках с А 61-Х 2 (ОЙ-форма) и ХА 0-2 - по методике, описанной в примере 18, за исключением того, что используют меньшее количество пуриннукулеозидфосфорилазы (10,000 м,ед.) и тимидинфосфорилазы (5,00 м.ед.), После лиофилизации получают 0,182 г 2- амино-бензиламинопурин-3-0-2 . 3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде 0,60 метанола (т,пл. 92 - 94" С),Вычислено, %:58,78; Н 6,28; И 23,37, С 17 Н 2 ой 6020,60 СН 40Найдено, %: С 58,60; Н 6,06; й 23,48.П р и м е р 34, 2-Амино-б-циклопропиламинопурин-ф-2, 3 -дидеоксирибофуранозид.2-Амина-циклопропиламинопурин (0,495 г, 2,1 ммоль, полученный нуклеофильным замещением хлорного радикала у 2- амина-хлорпурина (А 1 с 1 г 1 сЬ СЬепса 1 Сь, М 11 чаоКее Я 1) циклопропиламином) и 3 -деокситимидин (0,73 г 3,2 ммоль) подвергают взаимодействию и хроматографируют на колонках с А 61-Х 2 (ОН-форма) и ХАО- по методике, описанной в примере 18, После лиофилизации. получают 0,419 г 2-амина-бциклопропиламинопуринф-2, 3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде 0,3 гидрата (т.пл. 82 - 84 С).Вычислено, %: С 52,80; Н 6,34; К,28.42, С 13 Н 1 ВИ 602 О,ЗН 20Найдено, %; С 52,83; Н 6,35; М 28,44.П р и м е р 35. 2-Амино-метиламинопурин-,8-0-2, 3 -дидеоксирибофуранозид.2-Амино-метиламинопурин (0,5 г 3,0 ммоль, полученный нуклеофильным замещением хлорного радикала у 2-амино- хлорпурина (А 1 бг 1 сЬ СЬеп 1 са Со, М 1 ЬчацКее Ю) метиламином) и 3 -деокситимидин (0,893 г, 3,9 ммоль) суспендируют в 100 мл 10 мМ калийфосфатного буфера, рН 6,8, содержащего 0,04% азид калия. В реакционную смесь прибавляют очищенные пуриннуклеозидфосфорилазу (2,880 м.е, д) и тимидинфосфорилазу (1.200 м.ед,) и реакцию .проводят при перемешивании при 33 С в течение 72 часов. Реакционную смесь наносят на колонку с А 61-Х 2 (ОН-форма) 2,5 х 10 см и полученный продукт вымывают 90% водным раствором метанола, Растворитель удаляют в ваккуме и остаток разделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем, 2,5 х 30 см, используя хлороформ:;метанол (97: 3 по объему), После лиофилиэации получают 0,3 г 2-амино-б-метиламинопурин-Р-2, 3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде гидрата(т.пл, 95 С, частичное плавление при 75 С).Вычислено, о; С 48,66; Н 6,24; И 30,95.С 11 Н 16 Н 6020,4 Н 20. Найдено, О,: С 48,57; Н 6,27; й 30,77.П р и м е р 36, 2-Амино-б-н-пропиксипурин-3-0-2, 3 -дидеоксирибофуранозид,2-Амино-нупропоксипурин (0,21 г,1,11 ммоль, полученный нуклеофильным замещением хлорного радикала у 2-амина-бхлорпурина (АИг 1 сЬ СЬет 1 са Со, М 11 ччаМееЧЧ 1) алкоксильным анионом в результатевзаимодействия гидрида натрия и н-пропанола) и 3 -деокситимидин (0,293 г, 1,3 ммоль)суспендируют в 100 мл 10 мМ калийфосфатного буфера, рН 7, содержащего 0,04% азида калия. К реакционной смеси прибавляюточищенные пуриннуклеозидфосфорилаэу(2,880 м.ед.) и тимидинфосфорилазу (1200м.ед.) и затем перемешивают при 33 С втечение 48 ч. Реакционную смесь наносятна колонку с А 61-Х 2 (ОН-форма) 2,5 х 5 см, иэлюируют 90;4 водным раствором метанола. Растворитель удаляют в вакууме и остаток разделяют флэш-хроматографией наколонке с силикагелем 2,5 х 30 см, исполь-зуя смесь хлороформ;метанол (9: 1, по объему), После лиофилиэации получают 0,132 г2-амина-б-н-пропоксипурин-Р-2, 3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде 0,2 гидрата (т,пл. 70 С).Вычислено, ,6; С 52,59; Н 6,59; й 23,59.С 13 Н 19 Й 503 0,2 Н 20Найдено, о: С 52,52; Н 6,62; й 24,49.П р и м е р 37. б-БензиламинопуринР-2, 3 -дидеоксирибофуранозид.6-Бензиламинопурин (1 г, 4,44 ммоль,99 та СЬеа 1 саз, 51 1.оо 1 з МО) и 3 -деокситимидин (1,0 г, 4,4 ммоль) суспендируют в 50мл 15 мМ калийфосфатного буфера, рН 7,2.В реакционную смесь прибавляют очищенные пуриннуклеозидфосфорилазу (2,000м.ед.) и тимидинфосфорилазу (7, 900 м,ед) иперемешивают при 25 ОС. Через 1 прибавляют б мл диглима. и перемешивают. при 37 Св течение 65 дней. Полученный фильтратдоводят до рН 10,5 гидроксидом аммония,затем наносят на колонку с А 61-Х 2 (формаформиата), 2 х 6 см. Полученный продуктэлюируют ЗОО-м водным раствором пропанола, Затем продукт хроматографируют наколонке Р, 2,5 х 90 см, вымывают 30(,водным раствором пропанола и после лиофилизации получают 0,063 г б-бенэиламинопуринф-2, 3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде 0,5 гидрата(т. пл. 65 С), 5 101520 25 П р и м е р 39. б-н-Пропиламинопурин-ф-2,. 3 -дидеоксирибофуранозид.6-н-Пропиламинопурин (0,500 г, 2,81 ммоль, 319 гпа СЬетса 1 з, 31 1 оцз МО) и 3- деокситимидин (0,957 г, 4,26 ммоль) подвергают взаимодействию и хроматографируют на колонках с А 61-Х 2 (ОН-форма и ХОпо методике, описанной в примере 18 за исключением того, что 5 мл диметилсульфоксида заменяют дополнительной порцией 5 мл М, й-диметилформамида, Растворитель удаляют в вакууме из фракций, содержащих продукт, и остаток разделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем, 3 х 50 см, используя смесь хлороформ: этанол (9: :1 по обьему), После лиофилизации получают 0,499 б-н-пропиламинопурин-,8-0-2 . 3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде 0,7 гидрата.Вычислено, о: С 53,85; Н 7,09; К 24,15, С 13 Н 198502 0,7 Н 20Найдено, о: С 53,93; Н 7,08; К 24,18.П р и м е 3 40. 6-Циклогексиламинопурин-Р-2, 3 -дидеоксирибофуранозид.6-Циклогексиламинопурин получают нуклеофильным замещением хлорной группы 6-хлорпурина циклогексиламином.б-Циклогексиламинопурин (1,0 г, 5 ммоль) и 3-деокситимидин ( 607 г, 9,1ммоль) растворяют в 25 мл 2-метоксиэтиленового простого эфира и 500 мл 10 мМ калий 30 35 40 45 50 55 фосфатного буфера, рН 7,2. Прибавляют очищенные пуриннуклеозидфосфорилазу(5.000 м.ед,) и тимидинфосфорилазу Вычислено, оь: С 61,06; Н 6.03; й 20,94, С 17 Н 19 Й 502 0.5 Н 20Найдено, : С 61,29; Н 6,21; М 20,69; П р и м е р 38, б-Изопропоксипурин-/3- 0-2, 3 -дидеоксирибофуранозид.б-Изопропоксипурин (0,5 г 2,8 ммоль, Я 19 еа СЬеп 1 са 1 з, Бт 1 ооз МО) и 3-деокситимидин (0,95 г, 4,2 ммоль) подвергают взаимодействию и хроматографируют на колонках с А 61-Х 2 (ОН-форма) и ХА 0-2 пометодике, описанной в примере 18, Растворитель удаляют в вакууме из фракций, содержащих продукт, и остаток растворяют в ЗОО водном растворе пропанола, Хроматографируют на колонке с 6 - 10,5 х 90, элюируют 30 оь водным раствором пропанола свыходом смолы, которую переносят для лиофилизации во флакон с ацетоном. Послелиофилизации получают 0,313 г б-изопропоксипурин-Р-2, 3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде 0,2воды и 0,2 ацетона (т,пл. 75 С),Вычислено, 07 ь: С 55,65; Н 6,73; М 19,09.С 13 Н 16 М 4030,2 СЗН 60 0,2 Н 20Найдено, о: С 55,65; Н 6,59; М 19,12, 27 1779256(5,000 м.ед.) и тимидинфосфорилазу (3850м,ед.) и реакционную смесь перемешиваютпри 37 С в течение 7 дней, Затем реакционную смесь наносят на колонку со смолойХАРи тщательно промывают водой. Продукт элюируют 90% водным раствором метанола. Фракции, поглощающие УФ,сгущают и наносят на колонку со смолойА 6-Х 2 (ОН-форма) 2 х 12 см и элюируют30% водным раствором метанола. Продукт 10тщательно дополнительно хроматографируют на колонках с Р, 2,5 х 90 см, и с С,. 2,5 х 90 см и вымывают продукт из каждойколонки 30% водным раствором пропанола,После лиофилизации получают 0,093 г 6- 15циклогексиламинопуринфР, 3 -дидеоксирибофуранозида (т,пл, 70 - 92 С),Вычислено, %: С 60,55: Н 7,30; И 22,07.С 15 нгз М 502Найдено, %: С 60,37; Н 7,39; К 21,94, 20Пи м е р 41, 6-МетиламинопуринфР, 3 -дидеоксирибофуранозид.6-Метиламинопурин (4, 31 ммоль; 1 г,полученный от Я 9 ва СЬегпса Со, 51оозМО) и 3-деокситимидин (4,40 ммоль, 1 г 25суспендируют в 50 мл 10 мМ калийфосфатного буфера, рН 7, содержащего 0,04% азида калия, В реакционную смесьприбавляют очищенные тимидинфосфорилазу (2,000 м,ед, ) и пуриннуклеозидфосфорилазу (2,4000 м,ед.) и полученнуюсуспензию перемешивают при 35 С, Черезтри дня реакционную смесь выдерживаютприС, После оттаивания смесь фильтруют и фильтрат наносят на колонку 2,5 х 10 35см, заполненную дауэкс-гидроксидом,Продукт элюируют из колонки 90% раствором метанола в воде (по обьему), Фракции,содержащие продукт, хроматографируютдваждь на колонке 5 х 90 см со смолой Во 40Вас Р, используя 30% раствор н-пропанола в воде (по обьему), фракции, содержащиепродукт, сгущают и после лиофилизацииполучают 0,391 г 6-метиламинопурин-В-Р 2, 3 -дидеоксирибофуранозида, который 45анализируют в воде 0,1 гидрата,Вычислено, %: С 52,62; Н 6,10; М 27,89,С 11 Н 15 М 5020,1 Н 20Найдено, %: С 62,75; Н 6,16; И 28,01,Данные ЯМР - анализа: 34/с, 1 Нв/, 508,12/с, 1 Н, Н 2/, 7,72/шир. 1 Н, КН/, 6,23 /дд, 1 Н, Н 1/, 5,06/т 1 Н. 5 ОН/, 4,10/м, 1 Н,Н 4/,3,58/-3,69,/м 1 Н, 5 СН 2/, 3,453.55/м, К 1, 5 СН 2/, 2,95/шир. ЗН, СНз/,2,40/м, 2 Н, 2 СН 2/ и 2,07/м, 2 Н, 3 СН 2/ 55Активирусная активность.6-Циклопропиламинопуринф Р, 3-дидеоксирибофуранозид и 6-метиламинопурин/-Р, 3 -дидеоксирибофуранозидиспытывали на активность против ВИЧ, врезультате чего установлена активностьпротив ВИЧ при концентрации 1 мкмоль.П р и м е р 42. 6-/Циклопропилметиламино/-9-(2 й, 5 Я-тетрагидро-) (пивалоилокси/метил)-2-фурил)9 Н-пурин,Соединение по примеру 6,6-/циклопропилметиламино/-9-2 Я, 55)-тетрагидро(оксиметил)-2-фурил)-9 Н-пурин (0,322 г, 1,1ммоля) растворяют в 50 мл ацетонитрила,добавляют 4-метиламинопуридин (10,5 мг,0,1 ммоля) и триэтиламин (620 мкл, 4,4ммоля) и колбу затем подвергают резкомуохлаждению в ванне со льдом. Триметилуксусный ангидрид (450 мкл, 2,2 ммоля) растворяют в 10 мл ацетонитрила и добавляюткаплями в колбу в течение 15 мин, Реакционную смесь перемешивают при комнатнойтемпературе 24 ч, Дополнительные аликвоты триэтиламина (620 мкл, 4,4 ммоля) и пивалоилхлорида (250 мкл, 2,0 ммоля)добавляют за 24 ч, 48 ч, 72 ч и 98 ч, После120 ч перемешивания при комнатной температуре добавляют дополнительно пивалоилхлорид (500 мкл, 4 ммоля) и триэтиламин(1,24 мкл, 8,8 ммоля) и реакционную смесьнагревают с обратным холодильником 16 ч.Реакционную смесь резко охлаждают метанолом, а растворители удаляют в вакууме,Остаток суспендируют в 25 мл этилацетатаи удаляют соли фильтрованием, Растворитель отгоняют в вакууме и остающийся материал хроматографируют на "Хроматроне"с 2 мл пластинкой из силикагепя, с применением смеси гексана с ацетоном (7, 3); фракцию, содержащую целевой продукт,дополнительно очищают элюированием изколонки с силикагелем (2,5 х 40 см); используя смесь дихлорметана с метанолом (98: 2),Лиофилизация позволила получить 0,218 г6-/циклопропилметиламин/-9-(2 й, 53)-тетра гидро-/пи вал о ил о кс и/метил /-2-фурил)5 10 15 20 30 35 40 45 50 55 б-/ Ци клоп ро и ил метил э мино/-9 Н-(2 К, 5 Я-тетрагидро-/оксиметил/ -2-фурил Н-пурин (0,290 г, 1 ммоль/, 4-диметиламинопиридин (10 2 мг, 0 1 ммоля) и триэтиламин (620 мкл, 4,4 ммоля) растворяют в 50 мл ацетонитрила. Колбу подвергают резкому охлаждению в ванне со льдом и добавляют эцетилхлорид(1500 мкл, 2,1 ммоля), Реакционную смесь доводят до комнатной температуры и перемешивают 4 ч. Добавляют дополнительные аликвоты триэтиламина (620 мкл, 4,4 ммоля) и ацетилхлорида (150 мкл, 2,1 ммоля) и реакционную смесь перемешивают всю ночь, Реакционную смесь охлаждают метанолом и рэстворители выпаривают в ваккуме. Остаток суспендируют в 25 мл этилацетата и соли удаляют фильтрованием, Растворитель выпаривают в вакууме и остающийся материал хроматографируют на хроматроне (4 мм пластинка из силикэгеля) с применением смеси гексана с ацетоном (7: 3), Лиофилизация дает 0,174 г 9-(2 В, 53)-5-(ацетоксиметил-тетра гидро)-2-фурил-б-/циклоп ропилметиламино/ -9 Н-пурина в виде масла (выход 51%),Вычислено, %: С 56,31; Н 6,53; й 20,52, С 16 Н 21 М 50 з0,55 Н 20Найдено, %; С 56,26; Н 6,50; й 20,50.Данные ЯМР, Н ЯМР /200 МГц, диметилсульфоксид-д 5) д 8,31 и 8,29 / 2 синглет, 2 Н, Н и Нв, 6,29/мультиплет, 1 Н, Н 1 / 4,32/широкий, 1 Н, Н 4/, 4,16 /мультиплет, 2 Н, Н 5 и Н 5" /, 3/б 3,38 / синглет, ЗН, ИСНз/, 3,25/ широкий/ 2 Н, й-СЦ СН 2 СН 2/, 2,5 / широкий, 2 Н, Нз и Нз"/, 2,14 /мультиплет, 2 Н, Н 2 и Н 2" /. 2,98 / синглет, ЗН, СНзСОО/, 0,88 и 0,73/2 мул ьтиплет, 2 Н каждый, й-СН Сй 2 СН 2П р и м е р 44, б-/Циклопропилметиламино/-9-(2 В, 5 Я)-5-/(гексаноилокси)-метил/-тетрагидро-фурил-пурин.6-/Ци клоп ропилметиламино/-9-/2 К, 5 Я/тетра гидро-/окси метил /-2-фурилН- пурин 0,503 г, 1,7 ммоля) триэтиламин (2.0 мл, 14 ммолей) и 4 метиламинопиридин (10 мг, 0,1 ммоля) растворяют в 50 мл ацетонитрила. Добавляют гексаноилхлорид (980 мкл, 7,0 ммолей) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 3 ч. Реакционную смесь охлаждают метанолом и растворители выпаривают в вакууме. Остаток растворяют в 25 мл этилацетата и нерастворившиеся соли удаляют фильтрованием. Остаток после выпаривания этилацетэта растворяют в метаноле и пропускают через колонку (4,8 х 13 см) с силикагелем, Фракции, содержащие целевой продукт, соединяют, концентрируют и хроматографируют на хроматроне (4 мм пластинка из си ликагеля) с применением смеси гексанэ с ацетоном (8: 2). Продукт дополнительно очищают на хромэтроне (2 мм пластинка из силикагеля) с применением смеси хлороформа с ацетоном (99; 1), Лиофилизация дает 0,268 г б-/циклопрапилметилэмино- (2 й, 55)5-/(гексаноилокси)-метил- тетрэгидро-фурилН-пурина в виде масла (40%-н ый выход),Вычислено, %: 61,71; Н 7,56; й 17,99.С 20 Н 29 И 503 10 Н 20Найдено, %: С 61,81; Н 7,58; й 17,92, Данные ЯМР Н ЯМР /300 ГМц, диметилсульфоксид-д 5/ д 8,30 и 8,28/ 2 синглет,2 Н, Н 2 и Нв/; 6,28 / мультиплет, 1 Н, Дж. 6,3 Гц, Дж = 4,2 Гц, Н 1/; 4,30;/ широкий 1 Н, Н/ 4,23 / мультиплет, 2 Н, Н 5 и Н;," , 3,38 / синглет, ЗН, М-СНз/; 3,24 / мультиплет 1 Н,К-СН СН 2 СН 2/; 2,51 / широкий 2 Н, Нзи Нз"2,22 / мультиплет, Н 2 и Н /, 2,14 / мульти- плет 2 Н, ООСОН 2 СН 2/СН 2/СНз, 1,45 видымый пентет, 2 Н, Дж .= 7,3 Гц, ООССН 2 СН 2/СН 2/2 СНз, 1,20 / мультиплет, 4 Н, ООССН 2/СН 2 СН 2/2 СНз, 0,88 и 0,73 /2 мультиплет, 2 Н каждый, й-СН СН 2 СН 2/и 0,82/триплет, ЗН, Дж = 6,8 Гц, ООССН 2 СН 2/СНз/П р и м е р 45, 6/Циклопропилметиламино/-9-2 й; 5 Я)-5-/нонаноилокси,б-/Циклопропилметилэмино/-9-(28, 5 Я/оксиметил/-2 фурилН пурин (0,998 г, 1,7 ммоля), 4-диметиламинопиридин (10 мг, 0,1 ммоля) и триэтилэмин (2,0 мл, 14 ммолей) растворяют в 50 мл эцетонитрила. Добавляют нонаноилхлорид (2,26 мл, 7,0 миллимолей) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 3 ч, Реакционную смесь охлаждэют метанолом и растворители выпаривают в вакууме, Остаток растворяют в 25 мл этилацетата и нерэстворившиеся соли удаляют фильтрованием. После выпаривания этилэцетата остаток растворяют в метаноле и пропускают через колонку (4,8 х 13 см) с силйкагелем, Фракции, содержащие целевой продукт, соединяют, концентрируют и хроматографируют на хроматроне (4 мм пластинка из силикагеля) с применением смеси гексана с ацетоном (80; 20), 2 отдельных последовательных пропуска на хромэгроне (4 мм пластинка из силикагеля) с применением смеси хлороформа с ацетоном (80: 20), Две отдельные последовательные очистки на "Хромэтроне" с использованием смеси хлороформа и ацетона (95: 5) и смеси гексэна с ацетоном (85: 15) с последующей лиофилизэцией дали 0,236 г 6-/циклопропилметиламино-2 В.58)-(5-нонаноилокси)-ме 1 ил -тетрэгидро5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 2-фурил)-9 Н-пурина в виде масла (выход 32%)Вычислено,: С 63,91; Н 8,23; К 16,20, СгзНз 5 К 50 з0,15 НгОНайдено, %: С 63,73; Н 8,05; К 16,05, Данные ЯМР: Н ЯМР /300 МГц, диметилсульфоксид д 6/ д 8,29 и 8,28/2 синглет, 2 Н, Нг и Нв/ 6,28/ двойной дуплет 1 Н, Дж, 4,5 Гц, Дж = 5,9 Гц, Н 1/, 4,21 /широкий, 1 Н, Н 4/ = 4,17 /гп, 2 Н, НБ и Н 5"/, 3 38/ 5, ЗН, К-СНз/, 3,24/Ь,1 Н, К-СНСНгСНг/1 2,51 широкий/ 6,2 Н, Нз и Нз" /; 2,24/ мультиплет, 2 Н, Нг и Нг" /, 2,16 / мультиплет, 2 Н, ООССНгСНг/ СНг/5 СНз/, 1,45/ широкий 2 Н, СООСНг-/СНг/-5 СН//; 1,22 /широкий, 10 Н, ООССНгСНг/СНг/5 СНз/ 0,88 и 0,72 /2 мультиплет 2 Н, каждый, К-СНСНгСНг/, 0,83 триплет, ЗН Дж = 6,7 Гц, ООССЦгСНг/СНг/5 СНз/.П р и м е р 46, б-/Циклопропилметиламино/-92 В, 53)-5/-гектаноилокси/-метилтетрагидро-фурил)-ОН-пурин.б-/Циклоп ропилметиламино/-9-(2 К, 58)тетрагидро-1 оксиметил/-2-фурил)-9 Н- пурин (0,310 г, 1,1 ммолей), 4-диметиламинопиридин (10 мг, 0,1 ммоля) и триэтиламин (1,0 мл, 7 ммолей) растворяют в 50 мл ацетонитрила. Добавляют гептаноилхлорид (800 мкг, 5,0 ммолей) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре б ч. Реакционную смесь охлаждают метанолом и растворители выпаривают в вакууме, Остаток растворяют и пропускают через колонку,(4.8 х 13 см) с силикагелем. Фракции, содержащие продукт, соединяют, концентрируют и помещают на препаративные пластинки (20 х 20 х 0,2 см) и силикагеля. Пластинки проявляют смесью хлороформа с ацетоном (80: 20). Продукт соскабливают с препаративной пластинки (В 1 = 0,5) иэлюируют из силикагеля этанолом. Послевыпаривания растворителя продукт дополнителыЬ очищают на хроматроне (2 мм пластинка из силикагеля) смесью гексана сацетоном (80; 20).Л иофилизация позволяетполучить 0,227 г 6-/циклопропилметиламино/-9-(2 В, 5 Я)-5-(гектаноилокси)метил/-тетрагидро-фурил)-9 Н-пурина в видемасла (выход 51 о ),Вычислено, %: С 62,54; Н 7,80; К 17,36.Сг 1 Н 31 К 503 0,10 нгоНайдено, о ; С 62,56; Н 7,79; К 17,28.Данные ЯМР: Н ЯМР /200 МГц, диметилсульфоксид-б 6/ д 8,27 и 8,26/ 2 синглет,2 Н, Нг и На/, 6,26/ мультиплет, 1 Н, Н 1/; 4,26 / широкий 1 Н, Н 4/, 4,15 / мультиплет, 2 Н, Н 5 и Н 5" 3,36/ синглет, ЗН, К-/СНз/, 3,24 /широкий, 1 Н, К-СН, СНг, СНг/; 2,48/ широкий, 2 Н, Нз и Нз" /, 2,17/мул ьтиплет -4 Н,Нг и Нг" ООССНг/СНг/4 СНз/; 1,42 / ши. ракий, 2 Н, ООССНгСНг/СНг/гСНз/; 1,19/ широкий бН, ООСС/СНг/г-/СНг/3 СНз/, 0,85 и 0,71 /2 мультиплет, 2 Н каждый, К-СН СНгСНг/; и 0,80 / триплет ЗН, ) - 6,9 Гц, ООС / СНг/5 СЦЗ/П р и м е р 47, 6-/Циклопропилметиламино/-9-(2 В, 53)-5-/(метоксиацетокси)-метил/-тетрагидро-фурил)-9 Н-пурин,б-/Ци клоп ро пил метил а ми но/-9-(2 В, 5 Ятетрагидро-/оксиметил-фурил)-9 Н- фурил (0,319 г, 1,1 ммоля), 4-диметиламинопиридин (10 г, 0,1 ммоля) и триэтиламин (1,0 мл, 7 ммолей) растворяют в 50 мл ацетонитрила, Добавляют метоксиацетилхлорид(460 мкм, 5,0 ммолей) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре б ч. Реакционную смесь охлаждают метанолом и растворители выпаривают в вакууме. Остаток растворяют в ацетоне и пропускают через колонку (4,8 х 13 см) с силикагелем, Элюент, поглощающий ультрафиолетовое излучение, концентрируют и разделяют на хроматроне (4 мм пластинка иэ силикагеля) с применением смеси хлороформа с ацетоном (95; 5). Растворители удаляют в вакууме, а остаток дополнительно очищают на препаративной пластинке из силикагеля (20 х 20 х 0,2 см). Для проявления используют смесь хлороформа с ацетоном (70; 30). Продукт соскабливают с препаративной пластинки и элюируют из силикагеля этанолом. Лиофилизация дает 0,217 г б-/циклопропиламинометиламино/9-(2 В, 5 Я-/(метоксиацетокси)-метил/-тетрагидро-фурил Н-пурина в виде масла (53 о -ный выход).Вычислено,: С 55,26; Н 6,52; К 18,95.С 17 НгЗК 5040,45 НгОНайдено, %: С 55,17: Н 6,38: К 18,34, Данные ЯМР: "Н ЯМР /200 МГц, диметилсульфоксид б 6 / д 8,30 и 8,26 / 2 синглет, 2 Н, Нг и Н 8/ 6,27/ явный триплет, 1 Н, Н 1/, 4,31 /широкий 1 Н, Н 4 /, 4,21/ широкий 2 Н, Н 5 и Н 5 л /, 3,99/ явный дублет, 2 Н, ООССНгОСНз/, 3,37/ синглет ЗН, К-СНз/ 3,25 / синглет, ЗН, ООССНгОСНз/, 3,19 / широкий 1 Н, К-СЦСНгСНг/, 2,46 / широкий, 2 Н, Нз и Нз" /, 2,12 /мультиплет, 2 Н, Нг и Н 1/; 0,87 и 0,73/2 мультиплет, 2 Н каждый,К-,Н СНг-СН/г.П р и м е р 48, б-/Циклопропиламино/- 9-// 2 В 55 /-5-// изобутироилокси/метил/- тетрагидро-фурил/9-Н-пурин.б-/Циклопропилметиламино/-9-//(2 В, 55)тетрагидро-/оксиме 1 ил/-2-фу рил/-9 г 1 -пурин (0,321 г, 1,1 ммоля), 4-диметиламинопиридин (10 мг, 0,1 ммоля) и триэтиламин (1,0 мл, 7 ммолей) растворяют в 50 мл ацетонитрила, Добавляют ангидрид изомаслянойкислоты (830 мкг, 5,0 ммолей) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 6 ч. Реакционную смесь охлаждают метанолом и растворители выпаривают в вакууме, Остаток растворяют в ацетоне и пропускают через колонку (4,8 х 13 см) с силикагелем Фракции, содержащие продукт, соединяют, концентрируют и помещают на препаративные пластинки из силикагеля (20 х 20 х 0,2 см), Пластинки проявляют в смеси хлороформа с ацетоном (80: 20). Продукт соскабливают с препаративной пластинки (В 1 = 0,5) и элюируют из силикагеля этанолом, После выпаривания растворителя продукт дополнительно очищают на хроматроне (пластинка из силикагеля 2 мм) с применением смеси гексана с ацетоном (80: 20), Лиофилизация дает 0,277 г 6-/циклопропилметиламино/-9-//2 й, 5 Я/- 5-//изобутироилокси/-метил/-тетрагидро-фурил/-9 Н-пурина в виде масла (выход 69),Вычислено, %: С 59,26; Н 7,07; й 19,20, С 18 Н 258503О,ЗОН 20Найдено, %: С 59,30; Н 6,92; й 19,05.Данные ЯМР: Н ЯМР /200 МГц дейтерированный хлоформ/ д 8,39 и 7,99/ 2 сингл ета, 2 Н, Н 2 и Н 8/ 6,31 / мул ьтиплет, 1 Н, Н 1 /; 4,38/ широкий 1 Н, Н 4/ 4,30 / мультиплет2 Н, Н 5 и Н 5" /, 3,46 / синглет, ЗН, К-СНз/, 3,22 / широкий 1 Н, МСН, СН 2 СН 2/, 2,56 / широкий, ЗН, Нз, Нз и ООСН// СНз/2/ 2,11/ мультиплет, 2 Н, Н 2 и Н 2" /, 1,16/ дуплет, 6 Н, Дж = 7,0 Гц ООСН/ СНз/2/; 0,98 и0,76/ 2 мультиплета, 2 Н каждый, й-СН СН 2СН 2/.П р и м е р 49, б-/Циклопропилметилами, но/-9-/ 2 К, 5 /-5-/пентаноилоксиметил/- тетрагидро-фурилН-пурин.б-/Циклопропилметиламино/-/(28, БЯ)тетрагидро-(оксиметил)-2-фурил/- 9 Н-пурин (0,624 г, 2,1 молля), 4-диметиламинопиридин (2,7.мг, 0,2 ммоля и триэтиламин (2,0 мл, 14 ммолей) растворяют в 100 млацетонитрила, Добавляют хлоранидрид валерьяновой кислоты (1,08 мл, 8,9 ммолей) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре б ч, Реакционную смесь быстро охлаждают метанолом и растворитель выпаривают в вакууме. Остаток растворяют в ацетоне и пропускают через колонку (4,8 х 13 см) с силикагелем, После выпаривания растворителя продукт дополнительно очищают на хроматроне (4 ммпластинка иэ силикагеля) с применением смеси гексана и ацетона (85: 15), Фракции, содержащие целевой продукт, соединяют, концентрируют и помещают на препаративные пластинки (120 х 20 х 6,2 см) из силикагеля.5 10 15 20 25 30 35 40 50 55 Пластинки проявляют в смеси хлороформа и ацетона (80: 20). Продукт соскабливают с препаративной пластинки и элюируют из силикагеля этанолом. Затем продукт очищают с помощью испарительной хроматографии в колонке (2,5 х 40 см) с силикагелем с применением смеси хлороформа с ацетоном (95: 5). Лиофилизация приводит к получению 0,463 г б-/циклопропилметиламино/-9-(2 В, 5 Я-/пентаноилоксиметил/-тетрагидро-фурил)-9 Н-пурина в виде масла (выход 580).Вычислено, 0: С 60,38: Н 7,33; И 18,53 С 19 Н 27 Й 50 з0 25 Н 20Найдено, 7 ь: С 60,66; Н 7,36; 0 18,14, ЯМР данные, Н ЯМР /300 МГц, диметилсульфоксид д 8 /д 8,30 и 8,28/ 2 синглета, 2 Н, Н 2 и Н 8// дуплет, дуплет, 1 Н, Дж = 4,1 Гц, Дж = 6,3 Гц, Н 1, 4,29 / широкий 1 Н, Н 4/, 4,18 / мультиплет, 2 Н, Н 5 и Н 5 "/, 3,38 /синглет, ЗН, И-СНз/; 3,25 /широкий, 1 Н, М-СН, СН 2, СН 2/, 2,51 / ширОкий, 2 Н, НЗ, и НЗ" /, 2,22 / мультиплет, 2 Н, ООССН 2 СН 2 СН 2 СНз/, 2,13 / мультиплет, 2 Н, Н 2 и Н 2" /, 1,44 / мультиплет, 2 Н, СООСН 2 СН 2 СН 2 СНз/. 1,23 / мультиплет, 2 Н, ООССН 2 СН 2 СН 2 СНз 0,89 и 0,74 / 2 мультиплета, 2 Н каждый, М-СН СН 2 СН 2/, и 0,82 /триплет, ЗН, Дж = 7,2 Гц. ООССН 2 СН 2 СН 2 СНз/П р и м е р 50, б-/Циклопропилметиламино/-9-/(2 Й, 55)-5-/пропаноилокси/-метил/тетрагидро-фурилН-пурин.5-/Цикл опропилметилами но/-9-/(2 В, 5 Я-тетрагидро(оксиметил)-2-фурил/-9 Н- пурин (0,369 г, 1,3 ммоля) -4-диметиламинопиридин (10 мг, 0,1 ммоля) и тризтиламин (2,0 мл, 14 ммолей) растворяют в 50 мл ацетонитрила. Добавляют пропионилхлорид (450 мкл, 5,2 ммоля) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 2 ч. Реакционную смесь быстро охлаждают метанолом и растворитель выпаривают в вакууме.К остатку добавляют этилацетат и нерастворившиеся соли удаляют фильтрованием, Затем фильтрат помещают в колонку (4,6 х 13 с мм) с силикагелем и элюируют метанолом, После выпаривания растворителя продукт элюируют на пластинке "Хроматрона" (4 мм силикагель) с применением смеси гексана с ацетоном(75: 25). Фракции, содержащие целевой продукт, соединяют, концентрируют и дополнительно хроматографируют на хроматроне (2 мм пластинка из силикагеля), используют смесь хлороформа и ацетона(95: 5), содержащие продукт фракции помещают на препаративные пластинки иэ силикагеля (20 х 20 х 0,2 см), которые затем проявляют смесью хлороформа с аце 17792563536тоном (85: 15). Окончательной очистки достигают посредством третьей очистки нахроматроне (2 мм пластинка из силикагеля)с применением смеси гексана и ацетона (80,/ 2 мультиплета, 2 Н каждый, И-СНСН 2 СН 2/.П р и м е р 51. б-(Циклопропилметиламино)-9-2 В, 53-/(и-метилбенэоилокси)метил/тетрагидро-фурил)-9 Н-пурин,б-(Циклопропилметиламино-/(2 В, 58)тетрагидро-(оксиметил)-2-фурил/-9+и урин (0,295 г; 1,0 ммоля), 4-диметиламинопиридин (20 мг; 0,2 ммоля) и триэтиламин (2,0мл; 14 ммолей) растворяют в 50 мл ацетонитрила. Добавляют и-метилбензоилхлорид иреакционную смесь перемешивают прикомнатной температуре б ч. Реакционную.смесь быстро охлаждают метанолом и растворители выпаривают в вакууме, Остатоксуспендируют в этилацетате и нерастворившиеся соли отфильтровывают, Фильтратконцентрируют и. наносят на препаративные пластинки из силикагеля (20 х 20 х 0,2см). Пластинки проявляют в смеси хлороформа с ацетоном (95: 5), Продукт соскабливают с препаративной пластинки иэлюируют из силикагеля этанолом. Продуктдополнительно очищают путем испарительной хроматографии на колонке (2,5 х 40 см)с силикагелем с применением смеси хлороформа с метанолом (98: 2). Лиофилизациядает 0,330 г 6-/циклопропилметиламино/-9/(2 й, 5)-5-/(и-метилбензоилокси)-метил/тетрагидро-фурил/-9 Н-пурина в видемасла (выход 78%),Вычислено, %: С 63,89, Н 6,45; К 16,48,С 22 Н 25 КвОз0,20 Н 20О,ЗОС 2 Н 60Найдено, %: С 64,10; Н 6,24; й 16,29,ЯМР данные: Н ЯМР / 200 МГц, диметилсульфоксид-б 6/ д 8,28 и 8,25/ 2 синглета,2 Н, Н 2 и Нв/, 7,75 и 7,25 / 2 мультиплета, 2 Нкаждый, ООССН 6 Н 4, - СНз/, 6,28/ дуплетдуплет, 1 Н, Дж = 6,5 Гц, Дж 4,0 Гц, Н 2/ 4,42/мультиплет, 2 Н, Н 2 и Н 2" /, 0,85 и 0,70 / 2 мультиплета 2 Н каждый, й-СН СН 2 СН 2/П р и м е р 52, б-/Циклопропилметиламино/-9-(2 й, 5 Я-/(бензоилокси)метил/- тетрагидро-фурил/-9 Н-пурин.6-/Ци клоп ро пил метила мино/-9-/(2 й, 53-тетра гидро(оксиметил)-2-фурил/-9 Н- пурин (0,310 г 1,1 ммоля), 4 диметиламинопиридин (27 мг, 0,2 ммоля) и триэтиламин (1,1 мл, 8 ммолей) растворяют в 50 мл ацетонитрила. Добавляют бензойный ангидрид (0,92 г, 4,0 ммоля) и реакционную смесь перемешивают.при комнатной температуре б ч. Реакционную смесь быстро охлаждаютметанолом и растворители выпаривают в вакууме. Остаток суспендируют в зтилацетате и нерастворившиеся соли удаляют фильтрованием, Фильтрат концентрируют инаносят на препаративные пластинки из силикагеля (20 х 20 х 0,2 см). Пластинки проявляют в смеси хлороформа с ацетоном (80:;20). Продукт соскабливают с препаративной пластинки и элюируют из силикагеля этанолом, Продукт концентрируют, затем повторно наносят на препаративные пластинки из силикагеля (20 х 20 х 0,2 см). Эти пластинки проявляют в смеси дихлорметана с метанолом (90: 10), Продукт соскабливаютс препаративной пластинки и элюируют из силикагеля эталоном, Окончательная очистка достигается посредством испарительной хроматографии на колонке (2,5 х 90 см) с силикагелем с применением смеси дихлорметана с метанолом (90; 10). Лиофилизация дает 0,342 г 6-(циклопропилметиламино)-9/(2 К, 5 Я-/(бензоилокси)метил/-тетрагидро-фурил/-9 Н-пурина в виде масла. (Выход 78%),б-/Циклопропилметиламинопурин-/ (2 В, 5 Я-тетрагидро-(оксиметил)-2-фурил/- 9 Й-пурин (0,3, 0.96 ммоля) растоворяют в 10 мл ацетонитрила. Добавляют тризтиламин (4,4 ммоля) и 4-диметиламинопиридин (0,0102 г, 0,086 ммоля) в 10 мл ацетонитрила и содержимое охлаждают до 0 С. и-Нитробенэоилхлорид (0,27 г, 2 ммоля) растворяют в 7 мл ацетонитрила и полученный раствор добавляют каплями, поддерживая температуру реакционной смеси на уровне ООС при перемешивании, Спустя 90 мин, раствори- тель удаляют и остаток растворяют в метаноле. После добавления 25 мл сухого силикагеля растворитель удаляют в вакууме и содержимое хроматографируют на колонке (4,9 х 28 см), содержащей силикагель, Подвижную фазу представляет смесь хлороформа и метанола (95: 5, соотношение объемов). Фракции, содержащие продукт. соединяют и последующее разделение проэводят на хроматроне, снабженном 4 мм пластинкой из силикагеля, Подвижной фазой служила смесь гексана, ацетона (7; 3, соотношение обьемов). Фракции, содержащие продукт, соединяют и после лиофилизации получают 0,311 г 6-/циклопропилметиламино/-9-/(2 В, 5)-тетрагидро/(4-нитробензоил)-окси/-метил-фурилН-пури на,Вычислено,, С 57,53; Н 5,06; К 19,17; Сг 1 Нггй 605Найдено, О : С 57,50; Н 5,10; К 19,22.ЯМР данные: ЯМР /2000 МГц, диметилсульфоксид-бв/ д 8,05 - 8,29 /мультиплет, 4 Н / 0,8, 0,4 и 8,00 / 2 синглет, 2 Н, Нг и Нв /, 6,27 / мультиплет, 1 Н, 1 Н 1/; 4,56 / широкий, 1 Н, Н 4 / 4;41 / мультиппет, 2 Н, Н 5 и Н 5" /, 3,30 / синглет, ЗН, К-СНз/, 3,17 /широкий, 1 Н, циклопропил СН/, 2,6 / широкий, 2 Н, Нг и Нг/; 2,14 / мультиплет, 2 Н. Нз и Нз" /, 0,87 и 0,79/2 мультиплета, 4 Н, циклопропил СНгСНг/.П р и м е р 54. 6-(Циклопропилметиламино-)(2 В, 5 Я)-тетра гидро-(и-аминобензолметил-фурил)-9 Н-пурин.6-/Ци кроп ро пил метиламино/-9-(2 В, 5 Я-тетрагидро/и-нитробензоил-фурил /9 Н-пурин (0,203 г, 0,463 ммоля) смешивают 10 палладием на активированном угле(0,1 г) и 4-диметиламинопиридином (0,0102 г, 0,086 ммоля) в метаноле (150 мл), Восстановление производят в атмосфере азота при давлении 9,4 кг/см (52 фунта/кв, дюйм)гв течение 6 ч. После удаления твердых веществ фильтрат высушивают и остаток хроматографируют на силикагеле с подвижной фазой, представляющей смесь хлороформа и метанола (95; 5). Фракции, содержащие продукт, соединяют и после удаления растворителя получают 0,127 г б-/циклопропилметиламино/9-/(2 В, 5 Я-тетрагидро/и-аминобензоилметил/2-фурил/-9 Н-пурин, который анализируют с использованием5 0,5 эквивалентов воды, Выход ббо . Т,пл.63 С. Тонкослойная хроматография: В =- =0,69 (силикагель, хлороформ, метанол) 9; 1(4,4 ммоля) и 4-диметиламинопиридин (0,1ммоля) и реакционную смесь охлаждают вванне со льдом, Добавляют ацетилхлорид35 (2,1 ммоля) и реакционную смесь доводят докомнатной температуры. После перемешивания в течение 4 часов дополнительно добавляют триэтиламин (4,4 ммоля) иацетилхлорид (2,1 ммоля). Реакционную40 смесь перемешивают всю ночь при комнатной температуре. Добавляют метанол (50мл) и растворитель удаляют в вакууме, Остаток растворяют в этилацетате и нерастворившиеся сопи удаляют фильтрованием,45 Продукт отделяют на хроматроне с применением смеси гексана с ацетоном (7: 3) 4 ммпластинка из силикагеля, Лиофилиэация дает0.174 г 6-/циклопропилметипамино/-пурин 9-/(2 К, 53)-тетрагидро-//(ацетил)окси/50 метил/-2-фурил /-9 Н-пурин а, которыйанализировали в виде 0,56 гидрата.Вычислено,: С 56,31; Н 6,53; К 20,52,С 16 Нг 1 И 5030,55 Нг 0Найдено,; С 56,26; Н 6,50; М 20,50.55 ЯМР данные, Н ЯМР /200 МГц, диметилсульфоксид-д 6/д 8,31 и 8,29 /2 синглета,2 Н, Нг и Нв/, 6,29 /мультиплет, 1 Н, Н 1 /,4,32 /широкий, 1 Н, Н 4 /, 4,16 /мупьтиплет,2 Н, Н 5 и Н 5" /3,38 / синглет, ЗН, К-СНз/, 177925610 15 эидовудин/, его фармацевтически приемлемые производные и использование их при лечении ретровирусных инфекций у человека, в том числе СПИД, и ассициированные клинические состояния,Опубликовання заявка на Европатент М 0206497 относится в основном к пуриновым нуклеозидам, применяемым при лечении вирусных инфекций, вызывающих иммунодефицит у человека и аналогичные состояния. В частности, в указанной заявке описан 2,6-диаминпурин-ф-2, 3 -диде 1оксирибофураноэид, предназначенный для лечения вирусных инфекций, приводящих к иммунодефициту человека.В ходе данной работы, найдено, что некоторые 6-замещенные 2, 3-дидеоксинук 1леозиды, упоминаемые ниже, пригодны для лечения или профилактики вирусных инфекций, в частности раствор ретровирусных инфекций и особенно СПИД.Ранее были описаны некоторые 6-замещенные пуриновые нуклеозиды, и в частности, в журнале В 1 оог 9, С 11 е 1 т 1, 9/1/ стр. 52 - 59, 1983 г, описан 6-метиламинопурин-ф-О1 12-, З-дидеоксирибофураноэид, применяемый далее в данном описании для лечения вирусных инфекций, вызывающих иммунодефицит человека и аналогичные состояния.Цель изобретения - изыскание способа получения новых соединений, описываемых указанной ниже структурной формулой, обладающих более высокими лечебными свойствами при лечении и профилактике вирусных инфекций,Согласно изобретению предлагается способ получения нуклеозидов формулы2 члХ)ма где 81 - водород или амийо: В 2 - Сг - С 6-алкокси- или метокси замещенный Сз - С 6- циклоалкилом, Сз - С 8-циклоалкокси, пирролидинил, или аминогруппа, эамещенная С 2 - Сб-алкилом, Сз - Сб-циклоалкилом, или ди-замещенная Сз - С 6-цикла- алкил-Сг - С 6-алкилом или ди-С 1 - Сб-алкилом, или их фармацеватически приемлемых сложных эфиров.Согласно изобретению нуклеозиды формулы 1 получают путем взаимодействия пуринового основания формулы (11) ВН, где В - соответствующий, остаток пурина, с 3- деокситимидином в апротонном полярном растворителе в фосфатном буфере в прису 20 25 30 35 40 45 50 55 ствии смеси ферментов переноса пентоэила, такой как смесь тимидинфосфорилазы и пуринуклеозидфосфорилаэы с последующим в случае необходимости переводом полученного соединения формулы (1) в его фармацевтически приемлемый сложный эфир обработкой соответствующим галоидангиридом. К примерам ретровирусных инфекций, которые можно лечить или предупреждать способом в соответствии с настоящим изобретением, относятся такие как вирус, вызывающий иммунодефицит человека (ВИЧ), ВИЧи лимфотропный вирус Т-клеток у человека (Н ТУ), например, инфекции(620 мкл, 4;4 ммоля), после чего колбу быстро охлаждают в ванне со льдом в атмосфере 15азота, Фенилацетилхлорид (1,11 г, 7,2 ммоля) добавляют в колбу каплями в течение 15мин. Реакционную смесь перемешиваютпри комнатной. температуре 0,5 ч, Реакционную смесь быстро охлаждают метанолом 20и растворитель удаляют в вакууме, Остатокрастворяют в 2 мл смеси хлороформа с метанолом (9: 1) и хроматографируют на колонке (5 х 15 см) с силикагелем вприменяемом растворителе. Содержащие 25продукт фракции дополнительно хроматографируют на хроматографе с 2 мм пластинкой из силикагеля и проявляют смесьюгексана с ацетоном (7: 3). Лиофилизациясодержащей продукт фракции дает 0,459 г 30б-/циклопропилметиламино/-9-/(28, 55)тетра гидро-/(фен ила цетил)метил/-2-фурил/-9 Н-пурина в виде масла; Выход 78, т,пл,25 С.Вычислено, о/: С 64,95, Н 6,18; Н 17,19, 35С 22 Н 258503Найдено, ,: С 64,90; Н 6,20, К 17,10,Данные ЯМР: ЯМР 200 МГц диме-тилсульфоксид-б 6 / д 8,29, 8,27 /синглет,2 Н, Н 2 и Нз/, 7,23 /мультиплет, 5 Нф/ 6,27 40/, 3,36 /Я. ЗН, И-СНз/, 3,21/Ю, 1 Н, КСНСН 2 СН 2 /, 2,2 /Ю, 2,2 /Ю, 2 Н, Нз и Нз" /2,12 /гп, 2 Н, Н 2 и Н 2" /, 0,83 и 0,70 /2-мультиплета 2 Н каждый, й-СНСН 2 СН 2 /,Основное преимущество соединенийпо изобретению в сравнении с прототипными нуклеизодами, описанными в "Воогд,Сйегп,", состоит в их стабильности в крови, 50так соединения по изобретению обладаютусиленным терапевтическим действием засчет благоприятных фармакологическихсвойств, обусловленных лучшей стабильностью. Например, хорошая стабильность может увеличить продолжительность действиясоединения, если соединение не преобразуется сразу же после поступления в кровь.Таким образом, зто соединение можетпроявлять свойственное ему терапевтическое действие в течение длительного периода времени, Помимо зтого, длительное время воздействия позволяет определить схему приема лекарственного средства с большими интервалами,Повышенную стабильность соединений по изобретению демонстируют данные, приведенные в таблице, которые показывают, что содеркание прототипного соединения 6-метил-аминопуринР-О,3-дидеоксирибофуранозида, описанного в "В 1 оогд,Самее,", указанном в качестве ссылки (пример 41), снижается до 61 ОД за 2 часа. Все соединения по изобретению содержатся в количестве свыше 80% в течение 4 часов, что свидетельствует о существенно большей стабильности в цельной человеческой крови,Данные испытаний полученных соединений по стабильности в крови,Препараты цельной венозной человеческой крови с добавлением стрептомицина, пенициллина и О-глюкозы инкубируют при 37 С вместе с 30 мкМ концентрациями соединений, подлежащих испытанию. Аликвотные пробы отбирают через 10 мин, 2 ч и 4 ч, и анализируют путем жидкостной хроматографии высокого давления, причем, проба, изьятая через 10 минут, служит в качестве контрольной пробы 1 = О, Результаты (выракенные в О/, вещества, оставшегося после 2 или 4-часовой инкубации) представлены в таблице,Формула изобретенияСпособ получения нуклеозидов общей формулы 1: Я 2где В 1 - водород или амино;Р 2 - С 2 - С 6-алкокси- или метокси. замещенный Сз С 6 Циклоалкилом, Сз Сз циклоалкокси, пирролидинил, или аминогруппа, замещенная С 2 - Сб-алкилом, Сз - С 6-циклоалколом, или ди-замещенная Сэ - С 6-циклоалкил-С 2 - С 6-алкилом или ди-С 1 - С 6-алкилол 1 или их фармацевтических приемлемых сложных.эфиров, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что пуриновое основание формулы 1 ВН, где В - соответствующий остаток пурина, подвергают взаимодействию с 3-деокситимидином в апротонном полярном растворителе в. фосфатном буфере в присутствии смеси ферментов переноса пентозила, такой как смесь тимидинфосфорилазы и пуринуклеозидфосфорилазы с последующим в42 1779256 41 а человека в клеточнои структуре. д Составитель Н.Гозаловаедактор З,Ходакова Техред М;Моргентал Корректор П,Ге аказ 4204 Тираж Подписное . ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 ГКНТ СС Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Уж, ул, Гагарина, 10 случае необходимости переводом полученного соединения общей формулы 1 в его фармацевтически приемлемый сложный эфир, обработкой соответствующим галоидангидридом.Приоритет по признакам: 09,04.87 при Я 1 - водород или амина, Я - С 2- Сб-алкокси-, аминогруппа, замещенная С 2 - Сб-алкилом; 29,05.87 и ри Я 2 - ам и ног руп па, замещенная Сз - Сб-циклоалкилом, или ди-заме- щенная Сз - Сб-циклоалкил-Сг - Сб-алкилом, или ди-С 1 - Сб длкилом5 30,09.87 при Я 2 - метокси, замещенныйСз - Сб-циклоалкилом, Сз - Сб-циклоалкокси, пирролидинил.10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 дения внутривенно 0,1 - 5 раствора активного вещества, не обязательно растворенного в физиологическом растворе, или приоральном приеме в виде пилюли, содержащей примерно от 1 до 100 мг/кг активногоингредиента. Требуемую концентрацию вкрови можно поддерживать непрерывнымвливанием для подачи примерно 0,01 до 5,0мг/кг/ч или периодическими вливаниями,содержащими примерно от 0,4 до 15 мг/кгактивного вещества.Хотя можно активное вещество вводитьв чистом виде, предпочтительно его назначать в виде фармацевтического состава.Рецептуры изобретения содержат хотябы один активный ингредиент, как указановыше, в комбинации с одним или несколькими его приемлемыми носителямии в необязательном варианте другие лекарственные средства, Каждый носитель должен быть "приемлемым" в смыслесовместимости с другими компонентами лекарственного состава и безвредности егобольному. В рецептуры входят носители,пригодные для орального, ректального,назального, местного (в т,ч, ротового иподъязычного), вагинального или парентерального (в т.ч, подкожного, внутривенного, внутримышечного и внутрикожного)введения. Для удобства лекарственные составы можно представлять в единичной дозированной форме и приготавливатьлюбыми известными в фармации методами.Такие методы включают операцию связывания активного вещества с носителем, который составляет один или нескольковспомогательных ингредиентов. Обычно лекарственные составы приготавливают посредством равномерного и тщательного, соединения активного вещества с жидкиминосителями или тонкоизмельченными твердыми носителями, или с обоими, а затем принеобходимости формовэния целевого продукта,Лекарственные составы предлагаемогоизобретения, предназначенные для орального введения, можно приготавливать в виде дискретных единиц, например, каккапсулы, пилюли или таблетки, каждая из,которых содержит дозированное количество активного вещества, в виде порошка илигранул, в виде раствора или суспензии вводном или безводном жидком веществеили в виде жидкой эмульсии типа масло-вода или вода-масло, Активный ингредиентможет быть также представлен в виде шарика, или пасты,Таблетки можно получать путем уплотнения или прессования, по желанию с одним или несколькими вспомогательными компонентами, Спрессованные таблетки можно получать путем уплотнения в соответствующей машине активного вещества в свободнотекущем виде, например как порошок или гранулы, при желании смешанного со связующим (например, повидоном, жела- тином, оксипропилметилцеллюлозой), замасливэтелем, инертным разбавителем, консервантом, дезинтегрантом (например,; натрийгликолягом крахмала, сшитым повидоном. сшитой натрийкарбоксиметилцеллюлозой), поверхностно-активным или диспергирующим веществом., Сформовэнные таблетки можно получить путем формования в соответствующей машине смеси из порошкообрэзного соединения, увлажненного инертным жидким разбавителем, По желанию на таблетки можно нанести покрытие или надрез и их можно составлять так, чтобы обеспечить медленное или регулируемое высвобождение активного вещества, содержащегося в таблетке, используя, например, оксипропилметилцеллюлозу в различных соотношениях для получения требуемого профиля высвобождения. По желанию, таблетки можно выполнить с знтеральной оболочкой для выделения частично из кишечника помимо желудка. Указанное особенно имеет преимущество для производных пуриновых нуклеозидов, поскольку такие соединения подвержены кислотному разложению.Лекарственные препараты, пригодные для местного применения в ротовой полости, включают лепешки с активным веществом в ароматизированной основе, обычно сахаре и акации или астрагале; пастилки с активным веществом в инертном носителе, например как желатин и глицерин, или сахаре и акации, и растворы для полоскания ротовой полости, содержащие активное вещество в соответствующем жидком носителе,Лекарственные составы для ректального приема могут быть представлены в виде свечей с соответствующей основой, содержащей, например, масло какао или салицилат.Прописи, пригодные для вагинального применения, могут быть представлены в виде писсариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пены или спрзйев, содержащих дополнительно к активному веществу такие носители, которые известны в данной области для этих целей.В рецептуры, предназначенные для парентерального введения, входят водные и безводные изотонические стерильные растворы, которые могут содержать противоокислители, буферы, бактериостаты ирастворенные вещества, которые переводят состав в изотоничный с кровью предполагаемого больного. и водные и безводныестерильные суспензии, которые могут содержать суспендирующие вещества и загустители, Указанные лекарственныепрепараты могут быть представлены в герметичных емкостях с одноразовой или многоразовой дозой, например, ампулах илифлаконах, причем их можно хранить в сублимированно-высушенном (лиофилизованном) состоянии, необходимо тольконепосредственно перед употреблением добавление стерильного жидкого носителя.например, воды для инъекций. Моментально приготавливаемые инъекционные растворы и суспензии можно получать изстерильных порошков, гранул и таблеток типа, описываемого выше в данком описании.Предпочтительными препаратами, используемыми в единичной дозировке, являются такие, которые содержат, как ранееуказывалось в данном описании, суточнуюдозу или единицу, суточную дробную дозуили ее соответствующую долю активного веществаПредлагаемые соединения можно также представлять для использования в форме ветеринарных, препаратов, которыеможно получать, например, традиционнымив данной области способами.Следует иметь в виду, что при добавлении к ингредиентам, особенно указываемым выше, предлагаемые препараты могутвключать другие вещества, общепринятыев данной области, имеющие отношение ктипу рассматриваемого лекарственногопрепарата. Например, вещества, пригодные для орального введения, могут включать такие вспомогательные агенты, какподслащивающие добавки, загустители иароматизированные вещества,П р и м е р 1, 6-К-пиперидинопурин-0-2,3-дидеоксирибофуранозид,б-й-пиперидинпурин, (2,41 ммоль, 0,5 гБ 9 гпа Спевса з 51 оцз МО) растворяют в10 мл диметилсульфоксида при нагревании,После охлаждения до комнатной темпер ату р ы и р и ба вл я ют 3 -деокситимидина(3,62 ммоль, 0,82 г) вместе с 30 мл 10 м Мкалийфосфатного буфера с рН 6,8, содержащего 0,04% азида калия.Прибавляют очищенную тимидинфосфатную (10,000 м.ед) и пуриннуклеозидфосфорилаэу (20,000 м.ед), абсорбированные в10 мл ОЕАЕ-целлюлозе, и полученную суспензию перемешивают при 35 ОС. Через 8часов реакционную смесь фильтруют ифильтрат наносят на систему из сопряжен ных колонок. Первая колонка заполнена гидроксидной смолой А 61-Х 2 (2,5 х 10 см), а вторая - смолой из Амберлита ХАО -2 (2,5 - 20 см), После нанесения образца колонку промывают большим объемом воды, и полученный продукт элюируют метанолом, После удаления растворителя и повторного Подвижную фазу представляют смесь хлороформ; метанол (9: 1 по объему). Продуктсодержащие фракции соединяют, повторно растворяют в этаноле и фильтруют через 0,22 мкм фильтр. Этанол упаривают, а продукт растворяют вводе. После лиофилизации б-К-пиперидинопурин-/3-0-2,3 -ди 1 деоксиробофуранозид(0,265 г) анализируют в виде 0,1 гидрата, содержащего 0,3 этанола. 20 Вычислено, %; С 58,74; Н 7,27; М 21,96 С 15 Н 21 Й 502Найдено, %: С 58,86; Н 7,14; й 21,82 ЯМР д 8,36 /с.1 Н, Нв/, 8,19 /С, 1 Н, Н 2/ 6,23/дд, 1 Н, Н 1 5,01 /т, 1 Н 3 = 5,54, ОНБ/, 4,12 /м, ЗН, Н 4 СН 2/ 3,52 /м, 2 Н. Нб/, 2,37 /м, 2 Н/ Н 2/2,04 /м, 2 Н, Нз /, 1,61 / б,25 2 Н, СН 2/ П р и м е р 2, 6-хлоропурин-/3-0-2, 3 -дидеоксирибофуранозидСинтез б-хлоропуринф-2,3 -дидеоксирибофуранозида осуществляют по ме 30 тодике примера 1, за исключением того, что 6-хлопурин (519 пза Спевсаэ, Я 1 1 оцз МО)растворяют в 5 мл каждого из диметилформамида и диметоксиэтана.После отфильтровывания твердого вещества фильтрат доводят до и римерно 5 мл в вакууме с последующим растворением в 100 мл воды. Полученный продукт хроматографируют на колонке со смолой ХАО(2,5 х х 20 см), После промывки колонки 500 мл воды, продукт элюируют метанолом. Продуктосодержание фракции объединяют и 35 40 45 прибавляют 20 мл сухого силикагеля. Весьраствор удаляют в вакууме. Сухой силикагель наносят на верхнюю часть колонки с силикагелем, доведенную до равновесного состояния смесью хлороформ; метанол (9;50:1 по объему), продуктсодержащие фракции, в которых нет диокситимидина, объединяют. После удаления растворителя в вакууме осадок растворяют в этаноле, филь труют с дальнейшим растворением в воде и 55 лиофилизуют. Полученный продукт дополнительно очищают хроматографией на колонке, содержащей полигосильную С 1 в смолу, в смеси из метанола и воды (8; 2 по объему). После удаления растворителя в варастворения в смеси хлороформ метанол (9: . 1 по объему), дополнительно хроматогра фируют на колонке с силикагелем (5 х 20).кууме продукт растворяют в воде и лиофилизуют с выходом 0,199 г б-хлоропурин-ф-О 2, 3 -дидеоксирибофуранозида (т.пл,100 С)Вычислено, О/О: С 47,16;.Н 4,35; К 22,00; 5С 13,92,С 10 Н 11 С 1 М 402Найдено, о/О: С 47,10; Н 4,35; й 21,94; О13,86.П р и м е р 3, 6-Этиламинопурин-3-0- 102, 3 -дидеоксирибофуранозид,1(и риготовлен ного нуклеофильн ым замещением хлорной группы у 6-хлорпурина (51 дгпаСЬеп 11 са 1 з, 31 1 оц 1 з МО) аминогруппой этиламина) и 3,33 ммоль, 0,755 г (3-детокситимидина) соединяют вместе с 50 мл 10 мМкалиевофосфатного буфера с рН 6,8, содержащего 0,04 азида калия. Прибавляюточищенную тимидинфосфорилазу (400 20м.ед,), и пуриннуклеозидфосфорилазу (700м.ед) и полученную суспензию перемешивают при 37 С, Через 48 часов добавляют еще700 ед, пириннуклеозидфосфорилазы и 400ед. тимидинфосфорилазы, и реакционную 25смесь перемешивают при 37 С. Через 5дней реакционную смесь фильтруют и наносят на колонку с гидроксидной смолой АбХ 2 (2,5 х 10 см), Полученный продуктэлюируют водной промывкой и хроматографируют на амберлитовой смоле ХАО(2,5 -20 см). После нанесения образца колонкупромывают большим объемом воды. Про-дукт элюируют метанолом, После удалениярастворителя продукт повторно растворя-,35ют в воде и ацетоне, затем лиофилизуют свыходом 0,299 г б-этиламинопуринф.О 2,3 -дидеоксирибофуранозида, которыйанализируют как 0,2 М воды и 0,1 оцетона.(т.пл. = 30 С(а) 20 С =-29,45 С/0,5 ДМФ/) 40Вычислено, О/О: С 57,17; Н 6,64; И 25,68С 12 Н 17 М 502 0,2 Н 20 0,1 СЗН 60Найдено,: С 54,13; Н 6,69; М 25,75,П р и м е р 4, б-этилметиламинопуринР-2, 3 -дидеоксирибофуранозид,45Методика синтеза 6-этилметиламинопурин-Р-О,3, дидеоксирибофуранозидааналогична примеру 2, Реакционную смесьфильтруют, фильтрат наносят на колонку сдауэкс 1-гидроксидом (2,5 - 10 см), Продукт 50элюируют 90 браствором метанола в воде(по объему) и хроматографируют на амберлитовой смоле ХАО(2,5 х 20 см) послеудаления растворителя до примерно 5 мл иповторного растворения в 100 мл воды, После нанесения образца колонку промываютбольшим объемом воды, полученный продукт элюируют 95 раствором этанол-вода(по объему), Продуктсодержащие фракции объединяют и 20 мл сухого силикагеля прибавляют. Весь растворитель удаляют в ваккуме, Сухой силикагель наносят на верхнюю часть колонки с силикагелем (4,8 х 20 см), доведенную до равновесного состояния смесью хлороформ:метанол (98; 2, по объему), Продуктсодержащие, фракции объединяют и после упаривания растворителя в вакууме растворяют первоначально в этаноле и фильтруют, После удаления растворителя и повторного растворения в воде раствор лиофилизуют с получением 0,3 6- этилметиламиноР-О, 3 -дидеоксирибофуранозилпурина, который анализируют как 0,05 гидрат (т.пл,30 С).Вычислено, о :С 56,12; Н 6,92; М 25,17, С 13 Н 19 Й 502 0,05 Н 20Найдено, о : С 56,12; Н 6,94; К 25,14, ЯМР: д 8,36 /с, 1 Н, Нз/, 8,19 /с, 1 Н, Н 2/ 6,23 /дд. 1 Н, Н 1/ 5,05 / т, 1 Н, 3 = 5,58, ОН 5/ 4,09/м, 1 Н, Н 4/ 4,08 /м, 2 Н, СН 2/ 3,51/м, 2 Н, Н 5/. 3,33 /с, ЗН, СНз/, 2,41 м, 2 Н, Н 2/, 2,03/м, 2 Н, Нз/ 1,14 т, ЗН, Л = 7,01, СНз/П р и м е р 5. б-иодопуринР-2, 3 -дидеоксирибофуранозид .б-иодопурин (0,624 г, 2,54 ммоль, 51 дгла СЬел 11 са 1 з, 51 1 оц 1 з МО) и 3 -диокситимидин (0,71 г, 3,13 ммоль) смешивали с 700 мл 10 мМ калийфосфатного буфера с рН 6,68, содержащего 0,04 азида калия, Прибавляют очищенную тимидинфосфорилазу(2,000 ед,) и пуриннуклеозидфосфорилазу (7,000 м,ед), и полученную суспензию перемешивают при 35 С. Через 48 ч реакционную смесь фильтруют, и фильтрат сушат в вакууме, Полученный осадок растворяют в 95 орастворе этанола с водой (по объему), и после прибавления до примерно 20 мл силикагеля, растворитель удаляют в вакууме. Сухую двуокись кремния наносят на верхнюю часть колонки с силикагелем (2,8 Х 50 см), и полученный продукт элюируют смесью метанол; хлороформ (5: 95, по всему объему). Фракции, содержащие только продукт, соединяют, а растворитель удаляют в вакууме. Осадок повторно растворяют в этаноле и фильтруют через 0,22 мкм фильтр, После удаления большей части этанола и прибавления примерно 25 мл воды, полученное вещество лиофилизют с выходом 0,088 г б-иодопурин-3-0-2, 3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют как 0,2 гидрат (т. пл, 151 - 153 С).Вычислено,:С 35,15; Н 3,46; М 15,77.С 1 оН 11 М 4020,2 Н 20Найдено; С 35,31; Н 3,31; М 15,83, П р и м е р б. б-Циклопропилметиламинопурин-/3-0-2, 3 -дидеоксирибофурано 1зид, 1779256б-Циклопропилметиламинопурин получают нуклеофильным замещением хлорной группы 4 б-хлоропурина (3 дваСЬев 1 саз, Я 1 1 ош 3 МО) аминогруппой циклопропилметиламина (5 два СЬев 1 са 1 з,Ят 1 овз МО) 6-циклопропилметиламинопурин (2,64 ммоль, 0,50 г) растворяют в 5 млдиметилформамида. После охлаждения докомнатной температуры прибавляют 3 -деокситимидин (3,98 ммоль, 0,90 г) вместе с 30мл 10 мМ калийфосфатного буфера с рН6,8, содержащего 0,04 азид калия, Прибавляют очищенную тимидинфосфорилазу(20,000 м,ед,), абсорбируемых в 10 мл 0 ЕАЕцеллюлозе (ИВатвап), Полученную суспензию перемешивают при 35 С. Через 8 часовреакционную смесь фильтруют, фильтратнаносят нэ систему из сопряженных колонок. В первой колонке находится смола АО 1-Х 2 (ОН-форма), 2,5 х 10 см, в то время какво второй колонке - амберлитовая смолаХА 0-2 (2,5 х 20 см). После нанесения образца колонку промывают 500 мл воды и продукт элюируют метанолом, Затем продуктподвергают флэшхроматографии в колонке.с силикагелем, 5 х 20 см, используя смесьхлороформ; метанол (9: 1 по объему). Растворитель удаляют в вакууме, и полученнуюсмолу помещают во флакон с ацетоном. После лиофилизации получают 0,588 г 6-циклопропилметиламинопурин-ф-2,13 -дидеоксирибофуранозида, который анализи- руют как 0,15 воды и 0,15 ацетона.Вычислено, %: С 57,71; Н 6,77; И 23,29.С 14 Н 19 Й 502 0,15 Н 20,15 СЗН 60Найдено, : С 57,73; Н 6,94; 1 ч 23,39.П р и м е р 7. б-Изопропиламинопурин-9-ф-2, З-дидеоксирибофуранозид.Синтез 6-изопропиламинопурин-ф, 3 -дидеоксирибофуранозида осуществ 1ляют по методике примера 1, за исключением того, что 6-изопропиламинопурин(приготовленный из б-хлоропурина, 5 дваСЬевса 1 з, Зт 1 ойз МО и изопропиламина)растворяют в 5 мл каждого из диметилформамида и диметилсульфоксида,После лиофилизации, б-изопропиламинопурин-/3-0-2, 3 -дидеоксирибофуранозид(0,52 г) анализируют как 0,2 гидрат(т,пл.55 - 57 С)Вычислено, : С 55,58; Н 6,96; М 24,93,С 13 Н 19 М 502 0,2 Н 20,Найдено,.;ь: С 55,54; Н 6,96; й 25,01,П р и м е р 8, ТиамипринР-2, 3 -ди 1 1деоксирибофуранозидТиамиприн(ВцггоцдЬз Яе сове Со, ВезеагсЬ Тг 1 апд 1 е Раг 3 с ИС) (0,05 г) растворяютв 2,5 мл диметилсульфоксида и 15 мл диме 10 15 20 токсиэтана и смешивают с 3 -диокситимиди 1ном (0,8 г) в ЗО мл калийфосфатного буфера с рН 6,8, Прибавляют очищенную тимидинфосфорилазу (1600 м.ед.) и пуриннуклеозидфосфорилазу (70,000 м,ед.) и полученнуюсуспензию перемешивают при 35 С, Через96 часов реакционную смесь фильтруют и объем сгущают в вакууме до сиропа, Прибавляют воду (25 мл) и раствор выдерживают в течение ночи при 3 С. Преципитат собирают фильтрацией, затем суспендируют в 5 мл диметилформамида и фильтруют. К фильтрату прибавляют 15 мл метанола, а затем раствор выдерживают при температуре - 20 С. Через 5 дней твердое вещество собирают фильтрованием, растворяют в 65 растворе метанола с водой (по объему) и хроматографируют на гидроксидной смоле А 6-1-Х 2, Продукт элюируют 65 раствором мета н ол; вода (по объему), После удаления растворителя в вакууме, твердоевещество растворяют в 20 мл смеси хлороформ: метанол (9: 1) и хроматографируют на пластинке из сили кагеля (3 х 50 см), доведен 25 ной до равновесного состояния смесью хлороформ:метанол (9; 1 по объему). Продуктсодержащие фракции объединяют и растворитель удаляют в вакууме. Остаточный силикагель выделяют из продукта растворениемЗО в 95растворе этанола с водой( по объему)и фильтруют через 0,22 мкм фильтр, Этанолупаривают, и прибавляют примерно 200мл воды. Полученную суспензию лиофилизуют с выходом 0,056 г тиамипринР-2,135 З-дидеоксирибофуранозида, который анализируют как 0,4 гидрат, содержащий 0,7эквивалентов метанола (т.пл. 130 С, частичное плавление при 110 С),Вычислено, : С 41,84; Н 4,68; Я 7,60; й40 26,55.С 14 Н 16 ЯИВ 04 0,4 Н 200,7 СН 40Найдено, : С 41,93; Н 4,43; Б 7,48; И26,34.П р и м е о 9, 2-Амино-б-н-пропоксипу 45 ринф.0-2,3 -дидеоксирибофуранозид,(полученного нуклеофильным замещениемхлорной группы в 2-амино-хлороприне(АбгсЬ СЬевса Со, М 11 цчаоКее Т 1) элкок 50 сильным анионом при реакции между гидридом натрия и пропанолом и (0,29 г) 3-деокситимидина соединяют в 100 мл калийфосфатного буфера, рН 6,8, содержащего0,04 азида калия, Прибавляют очищенную55 тимидинфосфорилээу (1200 м.ед.) и пуриннуклеозидфосфорилазу (8400 м.ед,) и полученную суспензию перемешивают при35 С. Через 48 часов реакционную смесьфильтруют, фильтрат хроматографируют на10 20 25 30 40 4550 колонке с гидроксильной смолой Аб-Х 2 (2 х х 25 см), Полученный продукт элюируют 90 раствором метанола с водой (по обьему), Растворитепь удаляют в вакууме, и остаток растворяют в метаноле. Прибавляют 10 мл сухого силикагеля, и метанол удаляют в вакууме, Высушенный силикагель наносят на колонку с силикагелем (2,5 х 30 см), доведенную до равновесного состояния в смеси хлороформ: метанол (9: 1), которая также является растворителем для элюирования. Фракции, содержащие только целевой продукт,соединяют, а растворитель удаляют в вакууме. Остаточный силикагель удаляют, а продукт высушивают согласно примеру .8 Получают 0,132 г 2-амино-н-пропоксипурина-18-0-2, 3 в дидеоксирибофуранози 1 1да, который анализируют как 0,2 гидрат (т,пл, =70 С); Вычислено, %; С 52,91; Н 6,56; й 23,73.С 13 Н 19 Й 5030,2 Н 20Найдено, %; С 52,52; Н 6,62; й 23,49.П р и м е р 10, б-Этилтиопурин-р-О,3-дидеоксирибофуранозид (5,5 ммоль, 1 г) б-этилтиопурина, полученного от Я 19 ва С 1 ев 1 са 1 з Со, Я 1 1 оц 1 з МО (4,47 ммоль) 31- деокситимидина, суспендируют в 50 мл 15 мМ калийфосфатного раствора с рН 7,2, Прибавляют очищенные тимидинфосфорилазу (7890 м.ед,) и пуриннуклеозидфосфорилазу (1980 м.ед.) и суспензию перемешивают при 35 С. Через 144 ч реакционную смесь фильтруют и фильтрат выдерживают при - 20 С. После размораживания фильтрат доводят до рН 10,7 гидроксидом аммония и хроматографируют на колонке со смолой из доуэкса-формиата (2,5 х 8 см), Затем элюируют 30% раствором н-пропанола с водой (по объему), Фракции, содержащие продукт объединяют, а растворитель удаляют. Остаток растворяют в 30% растворе н-пропанола с водой (по объему) и хроматографируют на колонке (50 х 30 см) Во Раб Р - 2. Продукт элюируют из колонки 30% раствором н-пропанола с водой (по объему). Продуктсодержащие фракции объединяют, а растворитель упаривают в вакууме с выходом 0,427 г 6-этилтиопурин-3-0-2 . 3 -дидеоксирибофуранозида, кото 1рый анализируют как 0,5 гидрат,Вычислено,: С 49,81; Н 5,92; К 19,36;3 11,44. С 12 Н 16 ЯМ 402 0,5 Н 20. Найдено, о : С 49,63; Н 5,96: М 19,28; Я 11,06. Данные ЯМР: д 8,71 /с, 1 Н, Нв /. 8,67 /с,1 Н, Н 2/, 6,33 /тр, 1 Н, Н /м. 4,1/, 2 Н, ОН,Н 4 / 3,4 - 3,6/ м. 2 Н, 5 СН 2/, 1,8 - 2,4/м, 4 Н, 2 и 3 СН 2/ 1,5 /тр. ЗН, СН 3/,П р и м е р 11, 2-Амино-б-бензилтиопурин-ф-2, 3 - дидеоксирибофураноэид,1 12-Амина-бенэилтиопурин (1,9 ммоль, 0,5 г), полученный от 519 ва СЬевса 1 з, Со, Бт 1 ош 1 з МО, и 3-деокситимидин (2,0 ммоль, 0,543 г) растворяют в 20 мл 10 мМ калий-фосфатного буфера, рН 7, содеражащего 0,04% азид калия. Прибавляют очищенные тимидинфосфорилазу (2,000 м.ед.) и пуриннуклеозидфосфорилазу(2,900 м.ед,) и полученную суспензию перемешивают при 35 С. Через 3 дня прибавляют 80 мл 10 мМ калийфосфатного буфера, рН 7, Через день реакционную смесь фильтруют. Полученную лепешку растворяют в 90 растворе метанола с водой (по объему), фильтруют, фильтрат хроматографируют на колонке 2,5 х 10 см с дауэкс-гидроксидом. Продукт элюируют из колонки 90% раствором.метанола с водой (по объему), Фракции, содержащие продукт, обьединяют и после лиофилиэации получают 0,086 г 2-амино-б-бензилтиопуринР-2, 3 -дидеоксифуранозида,1Вычислено,: С 57,13; Н 5,36; К 19,59;5 8,97.С 17 Н 19 Н 502Найдено, %: С 57,02; Н 5,39; И 19,51; 5 8,89.Данные ЯМР: д 8,18 / С, 1 Н, Н 8/ 7,3 /м, 5 Нф, 6,6 /с, 2 Н, МН 2/, 6,08/ дд, 1 Н 1 /, 4,93 / шир, 1 Н 5 ОН/, 4,45 /шир. 2 Н, СН 2/, 4,08 /м, 1 Н, 4 Н 4 , 3,43 - 3,55/м, 2 Н 5 СН 2/ 2,35/м, 2 Н, 2 С 1-2/ 2,0 /м, 3 СН 2/П р и м е р 12. 6-Этоксипурин-/3-0-2, 3 -дидеоксирибофуранозидб-Этоксипурин (3,0 ммоль, 0,5 г 51 цва СЬев 1 са 1 з Со, Ят 1 ош 1 з МО)и 3-деокситимидин (З,З ммоль 0,75 г) суспендируют в 25 мл 10 мМ калийфосфатного буфера с рН 6,8, содержащего 0,04% азид калия, Прибавляют очищенные тимидинфосфорилаэу (800 м.ед,) и пуриннуклеозидфосфорилазу (1200 м,ед.) и полученную суспензию перемешивают при 35 С. Через 24 часа прибавляют 85 мл 10 мМ калийфосфатного буфера, рН 6,8 и реакционную смесь перемешивают в течение 5 дополнительных дней при 35 С, Выделившийся осадок выделяют фильтрованием и фильтрат хроматографируют на колонке 2,5 х 10 см с дауэкс-гидро ксидом. Полученный продукт элюируют 90% раствором метанола с водой (по объему), и фракции, содержащие указанный продукт, объединяют. После удаления растворителя в вакууме растворяют в 30% растворе н-пропанола и воды (по объему) и хроматографируют на колонке со смолой Во Раб Р.Фракции, содержащие продукт, объединяют и после лиофилиэации получают 0,225 г б-этоксипурин-Р-2, 3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют 0,15 гидрата,Вычислено, %: С 53,68; Н 6,15; й 20,98.С 13 Н 17 Й 5020,15 Н 20. Найдено, %: С 54,05; Н 6,15; М 20,88.Данные ЯМР; д 8,6 /с, 1 Н, Нв/, 8,5 / с 1 Н, Н 2/, 6,3 /дд, 1 Н, Н 1 /, 4,97 / тр. 1 Н, 5 ОН/,4 6 (м,2 Н,.СН 2./,4,1 /м, 1 Н, Н 43/, 3 33 /м, 2 Н СН 2/, 2,41 /м, 2 Н 2 СН 2/, 2,03 /м, 2 Н, 3 СН 2/, 1,4/тр, ЗН,= 0,035 Гц, СНз/.П р и м е р 13, 6-Диметиламинопурин- (3-0-2, 3-дидеоксирибофуранозид6-Диметиламинопурин (6,13 ммоль, 1 г 519 гпа СЬегпса 1 з Со, 51ойз МО) и 3-деокситимидин (4,44 ммоль, 1 г) суспендируют в 50 мл 1 Р мМ калийфосфатном буфере рН 7,0, содержащего 0,04% азида калия, Прибавляют очищенные тимидинфосфорилазу (2000 м;ед.) и пуриннуклеизидфолсфорилазу (3000 м.ед.) и полученную суспензию перемешивают при 35 С. Через 120 часов реакционную смесь фильтруют и фильтрат хроматографируют на колонке со смолой из дауэкс-годроксида (2,5 х 8 см), используя в качестве элюента 90% раствор метанола и воды (по объему). Фракции, содержащие указанный продукт, обьединяют, а растворитель удаляют в вакууме. Остаток растворяют в 25 мл 30% раствора н-пропанола и воды (по объему) и хроматографируют на колонке со смолой Во Вас Рс водой (по объему). Фракции, содержащие продукт, объединяют, а растворитель удаляют в вакууме. Остаток растворяют в 30 мл деионизованной воды и хроматографируют на колонке с сефадексов 6-10 (5 х 90 см), В качестве элюента используют воду, Соответствующие фракции объединяют и после лиофилиэации получают 6-диметиламинопурин-ф-2, 3 -дидеоксирибофуранозид,который аналИзируют как 0,3 гидрат (т,пл, = =162 С)Вычислено, %:С 53,64; Н 6,60; М 26,06 С 12 Н 17 Й 502 О,ЗН 20Найдено, %: С 53, 63: Н 6,63; й 25,8.П р и м е р 14. 6-Гидрооксиэтиламинопурин-/3-0-2, 31-дидеоксирибофуранозид.6-Гидроксиэтиламинопурин (2,8 ммоль, 0,5 г, Я 9 гпа СЬегпса 1 з Со, Ят 1 оцз МО) и 3-деокситимидин (3,30 ммоль, 0,76 г) суспендируют в 75 мл 10 мМ калийфосфатного буфера, рН 6,8, содержащего 0,04% азида калия, Прибавляют очищенные тимидинфосфоридазу (400 м,ед,) и пуриннуклеозидфасфорилазу (700 м.ед.) и полученную суспензию перемешивают при 35 С, Через 8 дней добавляют 600 м.ед. тимидинфосфо 10 рилазы и 1050 м.ед. пуриннуклеозидфосфорилазы, Через день реакционную смесь фильтруют и фильтрат наносят на колонку2,5 х 10 см, с дауэкс-гидроксидом, Указанный продукт элюируют метанолом. Фракции, содержащие продукт, объединяют и упаривают в вакууме, Остаток затем наносят на колонку 2,5 х 50 см с силикагелем и элюируют под давлением смесью хлороформ;метанол (8: 2), Фракции, содержащие продукт, объединяют и после лиофилизации получают б-гидроксиэтиламинопурин/7- 0-2, 3 -дидеоксирибофуранозид, которыйанализируют как 0,65 гидрат (т.пл, = 153 С), 15 . Вычислено, %; С 49,53; Н 6,34; М 24,7.С 12 Н 17 К 4050,65 Н 20Найдено, %: С 49,83; Н 6,07; К 23,7, П р и м е р 15. 6-Циклопропиламинопурин-(/3-0-2, 3 -дидезоксирибофуранозид.20 б-Циклопропиламинопурин (полученный из б-хлоропурина (Я 9 п 1 а СЬевсаз Со, 51 1 оо 1 з МО) и циклопропиламина) (2,86 ммоль, 0,5 г) и 3-деокситимидин (4,30 ммоль, 1 г) растворяют в 10 мл смеси диметилсуль фоксид: 1 ч, М-диметилформамид (1: 1) и далее разбавляют 30 мл 10 мМ калийфосфатного буфера с рН 6,8, содержащего 0,04% азида калия. Прибавляют тимидинфосфорилазу(10,000 м,е.) и пуриннук леозидфосфорилазу (20,000 м,ед,),абсорбируемые в 10 мл ОЕАЕ-смолы (ВЭа 1 тап), и полученную суспензию перемешивают при 35 С, Через 8 ч реакционную смесь фильтруют, и затем фильтрат наносят 35 на систему иэ сопряженных колонок, Первая колонка заполнена дауэкс- гидроксидом(2,5 х 10), в то время как вторая колонка содержит амберлитовую смолу ХАО(2,5 х х 20), После нанесения образца колонки про мывают большим объемом воды и полученный продукт элюируют метанолом, Фракции, Содержащие укаэанный продукт, соединяют и после лиофилизации получают 0 54 г 6-циклопропиламинопуринф 0-2,45 3 -дидеоксирибофуранозид, который анали 1зируют как 0,55 гидрат (т.пл, 63 - 65 С).Вычислено, %: С 54,75; Н 6,40; М 24,55.С 13 Н 17 Й 2020,55 Н 20Найдено, %: С 54,67; Н 6,43; й 24,57.50 П р и м е р 16. 6-Циклопропиламинопуринф-2, 3 -дидеоксирибофуранозид,б-Циклопентиламинопурин (полученный из 6-хлоропурина 39 гпа СЬеп 1 са 1 з, Зт 1 оцз МО и циклопентамиламина) (2,49 ммоль,1 55 0,56 г) растворяют в 5 млй, М-диметилформамида и 5 мл диметилсульфоксида, Прибавляют 3-деокситимидина (3,94 ммоль, 0,894 г)вместе с 30 мл 10 м М калийфосфатного буфера, рН 6,8, содержащего 0,04% азида5 10 15 20 30 35 40 45 50 55 калия, Уксусной кислотой рН доводят до 6,8.К реакционной смеси прибавляют очищенные тимидинфосфорилазу (10,000 ед.) и пуриннуклеозидфосфорилазу (20,000 м.ед,),соединенные с ОЕАЕ-целлюлозой(ВВа 1 гпап).Полученную суспензию перемешивают при35 С в течение 8 ч, фильтруют и фильтратвыдерживают при 20 С в течение ночи.После оттаивания фильтрат наносят наколонку 2,5 х 10, наполненную дауэкс-гидроксидной смолой. Продукт элюируют водой. Фракции, содержащие продукт,объединяют и хроматографируют на колонке, содержащей смолу ХАО(2,5 - 20 см).Затем продукт элюируют 350 мл воды, а далееметанолом, Фракции, содержащие продукт,растворяют в воде и после лиофилизованияполучают 0,459 г б-циклопентиламинопурин;3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде 0,05 гидрата(А 1 с 1 г 1 сЬ Сйет 1 са 1 Со, М 1 Ьаафсее Ю и мета. нола), и 3-деокситимидин (4,50 ммоль, 1 г)растворяют в 10 мл смеси диметилсульфоксид 11,11-диметилформамид 1: 1 с последующим разбавлением 30 мл 10 мМкалийфосфатного буфера с рН 6,8, содержащего 0,04% амида калия. К реакционнойсмеси прибавляют очищенные тимидинфосфорилазу (10,000 м.ед.) и пуриннуклеозидфосфорилазу (20,000 м,ед,), абсорбируемыена 10 мл ОЕАЕ-смоле, и полученную суспензию перемешивают при 35 С. Через 8 ч реакционную смесь фильтруют и фильтратнаносят на колонку 2,5 х 10 см, содержащуюдоуэкс - 1-гидроксид. Фракции, содержащие продукт, сгущают и доводят до объема70 мл, Указанную пробу наносят на колонку2,5 х 20 см, заполненную амберлитовой смолой ХАО. Колонку промывают большимобъемом воды, а продукт элюируют метанолом. Фракции, содержащие продукт, объединяют и после лиофилизования получают2-амино-б-метоксипуринф-О, 3 -дидеоксирибофуранозида.Вычислено, %: С 49.81; Н 5,70; К 26,40;С 11 Н 15 Й 50 зНайдено, %: С 49,70; Н 5,72; й 26,34.Пи м е р 18. 6-н-ПропоксипуринР 0-2, 3 - дидеоксирибофуранозид.б-н-Пропоксипурин (0,5 г, 2,8 ммоль31 два Сбее 1 са 1 з Со, 51 1 ов 1 з МО) и 3-деокситимидин (0,96 г, 4,2 ммоль). раснапяю в 5 мл диметилсульфоксида и 5 мл Й, Й-дилетилформамида, В реакционную смесь прибавляют 30 мл ММ калийфосфатного буфера, рН 6,8,содержащего 0,04% азида калия, и очищенные тимидинфосфорилазу (10,000 м,ед,) и пуриннуклеозидфосфорилазу (20,000 м.ед,), абсорбируемые в 10 мл ОЕАЕ-целлюлозной смоле, и полученную суспензию перемешивают при 35"С в течение 7 ч. Смолу удаляют из реакционной смеси центрифугированием и надосадочную жидкость наносят на колонку со смолой А 61- Х 2 (ОН форма). 2,5 х 10 см, соединенную с . колонкой на смоле ХАО, 2,5 х 20 см, Указанные колонки промывают 500 мл воды и полученный продукт элюируют метанолом, Продукт разделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем, Зх 50 см, используя смесь хлороформ; метанол (9; 1 по объему). После лиофилизации получают 0,554 г б-н-пропоксипурин-0-2, 3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде 0,3 гидрата.Вычислено, %; С 55,04; Н 6,61; М 19,75; С 1 зН 1 в 1 ч 40 зО,ЗН 20Найдено, %: С 55,05; Н 6,61; М 19,72П р и м е р 19, б-н-Бутоксипуринф-О 2, 3 - дидеоксирибофуранозид.б-н-Бутоксипурин (0,5 г 2,6 ммоль,31 дгпа СЬегл 1 са 1 з Со, Яс 1 оц 1 з МО) и 3-деокситимидин (0,70 г, 3,1 ммаль) суспендируют в 100 мл 10 мМ калийфосфатного буфера рН 6,98, содержащего 0,04% азида калия, К реакционной смеси прибавляют очищенные пуриннуклеозидфосфорилазу (3,500 м.ед,) и тимидинфосфорилазу (800 м,ед.) и полученный раствор перемешивают при 32 С, Через 7 дней реакционную смесь фильтруют и фильтрат наносят на колонку, содержащую смолу АО-Х 2 (ОН-форма) 2,5 х 10 см, Продукт элюируют 90% водным раствором метанола. Растворитель удаляют в вакууме из указанного продукта и остаток разделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем, 2,5 х 80 см, используя смесь хлороформ; метанол (8,2 по объему), Продукт растворяют в воде и наносят на колонку, содержащую смолу ХАО, 2,5 х 20 см. Колонку промывают 500 мл воды, а затем метанолом. После лиофилизации получают 0,276 г б-н-бутоксипурин-Р-О, 3 - дидеоксирибофуранозида (т,пл. 55 С),Вычислено, ,4: С 57,72: Н 6,90: й 19,17, С 14 Н 20 М 403Найдено, %: С 57,86; Н 7,29; К 18,83, П р и м е р 20. б-Циклопропилметоксипурин-В-О,3 -дидеоксирибофуранозид.

Смотреть

Способ получения нуклеозидов или их фармацевтически приемлемых сложных эфиров