Способ внутривидовой дифференциации биотипа эль тор — SU 1030410 (original) (raw)
СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК С 12 Я 1/04 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Ростовский-на-Дону государственный противочумный институт(54) (57) . СПОСОБ ВНУТРИВИДОВОЙ ДЙФФЕРЕНЦИАЦИИ ЧХВКХО СНО 1 ЕВАЕ БИОТИПАЭЛЬ ТОР путем выращивания микроорганизмов на питательной среде в присутствии индикатора с последующейдифференциацией по литической активности, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью упрощения способа, выращивание осуществляют на поверхйостипитательной среды, содержащей в качеетве индикатора деэоксихолат натрияв концентрации 0,5-3 мг/мл среды.Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам дифференциации штаммов холерных вибрио-. нов, и может быть использовано в диагностических и научно-исследовательских целях. 5Известен способ внутривидовой дифференциации ч 1 Ьг 1 о спо 1 егае биотипа Эль Тор путем выращивания микроорганизмов на питательной среде в толще агара в присутствии индикаторачувствительных к вибриоцину микроорганизмов, с последующей дифференциацией по литической активности - величине зоны лизиса индикаторного штамма 11). 35Однако известный способ сложен в осуществлении.Целью изобретения является упрощение способа.Эта цель достигается тем, что согласно способу внутривидовой дифференциации ч 1 Ьг 1 о сЬо 1 егае,биотипа Эль Тор путем выращивания микроорганиз" мов на питательной среде в присутст" вии индикатора с последующей дифференциацией по литической активности, выращивание осуществляют на поверхности питательной среды, содержащей в качестве индикатора дезоюсихолат натрия в концентрации 0,5-3 мг/мл среды. 30Способ осуществляют следующим образом.Одну петлю агаровой. культуры засевают в 5 мл бульона (РН 7,7-7,8), выращивают 4. ч при 37 С, Затем одну 35 каплю полученной бульонной культуры наносят на поверхность агара Мартена, содержащего дезоксихолат натрия. Рецепт приготовления агаровой среды: :навеска 50 мг дезоксихолата натрия 40 вносится в 100 мл растопленного ага" ра Мартена (рН 7,6-7,8). Среду разли-. вают в 5.чашек Петри, после застывания агар совершенно прозрачный. Через сутки выращивания при 37 С .культуру убивают парами 40-ного формалина в течение 48 ч, помещая смоченную Формалином вату в крышку. чашки Петри при комнатной температуре. Учитывают результаты после удаления ваты с формалином. Среда приобретает молочно- серую окраску, непрозрачная. Вокруг колоний культуры образуется зона про- . светления агара в виде ореола. Каждый штамм холерного вибриона имеет характерный ореол и различается повеличине, степени прозрачности и поколичеству ободков мутных и прозрачных, По количеству ореолов холерные штаммы дифференцируются иа 2 типа; Х.тип - образующие один ореол, и 60 11 тип - 2 ореола; по величине ореолов: б размеров - 0,5-1-1,5 2-3. 4 мм; по степени прозрачности на 3 типа - мутный, полупрозрачный и проз.рачный. Так, штамм 517/130 образует ,65 один узкий (1 мм), мутный ореол, что свидетельствует о его слабой литической активности. То есть величина ореола при измерении радиуса от края макроколонии до края плотной среды у штаммов, обладающих слабой литической активностью, будет 0,5-1 мм, и возрастает от 2 до 4 мм у активных по лизису культур. По этому признаку штаммы легко дифференцируются между собой, Так же культуры, образующие два ореола, отличаются от куль- тур с одним ореолом. Но и внутри штаммов, имеющих два ореола, возможна дифференциация, Так, штамм 2635 образует у края колонии прозрачный узкий ореол (1 мм), а потом мутный (1,5 мм), в то же время штамм 8556 полупрозрачный широкий ореол (3 мм) и узкий мутный (1 мм).П р и м е р 1. Отсевают в две пробирки с 5 мл бульона по одной. петле агаровых культур вибрионов Эль Тор 9949 и 517/130, Выращивают в течение 4 ч при 37 С так, чтобы концентРаци микробных клеток составляла И10 -,П10 кл/мл.Готовят плотную пиЭтательную среду, содержащую 0,5 мг/мл деэоксихолата натрия, для чего навеску 50 мг дезоксихолата натрия растворяют в 100 мл агара Мартена и разливают в 5 чашек Петри по 20 мл. На подсушенный агар на расстоянии 4 см друг от друга наносят по одной капле выросших бульонных культур и ставят в термостат при 37 С на сутки. Затем посевы культур убивают парами формалина путем нанесения 40%-ного раствора Формалина на тонкий слой ваты, помещенной в крышку чашки Петри. Чашки оставляют при комнатной . температуре 48 ч. Учитывают результаты по наличию и величине (в мм)зоны просветления вокруг макроколоний сравниваемых штаммов. Штамм вибрионов Эль Тор 9949 образует широкий (2 мм) прозрачный ореол просветления в агаре. Штамм 517-130 образует узкий (1 мм) мутный ореол вокруг макроколонии.П р и м е р 2. Отсевают в две пробирки с 5 мл бульона по одной . петле агароВых культур вибрионов Эль Тор 9949 и 517/130 Выращивают в течение 4 ч при 37 С. Готовят плот.ную питательную среду с 1 мг/мл дезоксихолата натрия, для чего навеску 100 мг дезоксихолата натрия растворяют в 100 мл агара Мартена и разливают в 5 чашек Петри по 20 мл. По"сев и учет проводят так же, как в примере 1.П р и м е р 3. Отсевают в 2 пробирки С 5 мл бульона по одной петле агаровых культур вибрионов Эль Тор9949 и 517/130 Выращивают в течение 4 ч при 37 С. Готовят плотную питательную среду с 2 мг/мл диэоксихо3 1030410 4 лата натрия. Для этого навеску 20 мг чительных признаков не позволяет исдезоксихолата натрия растворяют впользовать компетентные доноры и ре мл агара Мартена и разливают в ципиенты. Кроме того, способность 5 чашек Петри по 20 мл. Посев и учет к продукции вибриоцина проявляется проводят так же, как в примере 1. у штаммов только после 10-15 пересевов на жидких и плотных питательныхПредлагаемый способ дает возмож- средах.ность легко дифференцировать как ти- ЭфФективность предлагаемого спопичные штаммы холерных вибрионов, соба составляет 100, в. то время как так и мутанты, полученные различны. по известному способу ни в ОДА слуми методами. При этом облегчается 10 чае не удается выявить .вибриоцины у дифференциация шзаммов одного серо- заведомо известных продуцейтов с ис,вара и фаговара, что является крайнепользованием в качестве индикаторных удобным при проведении генетическихкультур типичных штаммов холерных исследований, когда отсутствие отли- вибрионов.Составитель 1". Смирнова Редактор О. Полозка . Техред,С,Мигунова Корректор.А. Зимокосов. йеевае юЬаеавввмавамаеююеаюаштюю Заказ 5134/29 Тираж . 523 . Подписное ВНИИПИ Росударственного комитета СССР по делам изобретений и открытий:. 113035, Москва, Ж, РаушскаЯ наб., д, 4/5а а аа ееФ МВФФВм