Штамм. вкм, для изучения природы -плазмид и факторов вирулентности — SU 1112059 (original) (raw)

:лжГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯООМ аЮВетВЪв(54) ШТАММ Е.СО 1,1 ВКМ КЭ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ПРИРОДЫ К-ППАЗМИД И ФАКТОРОВВИРУЛЕНТНОСТИ,(57) Штамм Е.Со 11 ВКМ КВ (Коллекциямикроорганизмов при Институтебиохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР) для изучения природыЯ-плазмид и факторов вирулентности.Изобретение относится к микробиологии, а именно к характеристике генетических особенностей штаммаЕ.СО 11,15 ЗМа 1 , которому переданаконъюгативная плазмида, кодирующаяне только антибиотикорезистентностьно и патогенные свойства бактерий,и может быть использовано при выявлении и изучении возбудддтетдей острь:хкишечных заболеваний, вирулентныесвойства которых определяются плозмидами.Известна плазмица К 88, .обнаруженная в . энтеропатогенных, штаммах ки -шечной палочки, выделенных от поросят 111.Плазмида К 88 вызывает маннозоре -зистентную агглютинацию эритроцитовпоросят, содержит белковые субъединицы с молекулярнь 1 м весом 2200029500 дальтон, которые Образуютсятолько при температуре выше 18 С,Молекулярный вес плазмиды 50 МД,Наиболее близкой к изобретению(по технической сущности и достигаемому р езул ьт ату является пл аз мидаСРА/1, обнаруженн ая в шт аммах киш ечных папочек серогрупп О 8, 015,Об 3, 025, выделенных от людей, боль",ных диарреей С 21. ,(,1 дСгА/1 дает положительную реакциюманнозорезистентной агглютинациичеловеческих эритроцитоь группыкрови А при комнатной температуре.Ппазмида, кодирующая антиген 1 факто- ра колонизации, часто контролируети продукцию термостабильного энтеротоксина. Иолекулярньдй вес ее 60 ЬЯ,Она может переноситься к реципиентным бактериям Е.со 11 Кс помощьюБ.-факторов (1181, ЕТ.-19 К) либо ппазмидами типа Еп. СГА/1 подавляет фертильность бактерий, связанную с наличием Й -Фактора Й - 1 - 19 К и явля -етсяПрименение плазмиды СГА/1 не всег да позволяет изучить генетическиеи биологические свойства Фактороввирулентности, контролируемых плазмидами, так как она является неконъю- .Ягативной, способна к мобилизацииВ-фактораму или Епг.-плазмидами, ведет себя как йд, не определяет устойчивости бактерий к антибиотикам,а также синтез колицина.33Цель изобретения - выявление уштаммов энтеробактерий конъюгатввной плазмиды, применение которойпозволит более полно изучить биоло-ические и генетические свойстваз-ого класса плазмид.Плозмида обнаружена у штамма кишечнс;й палочки, выделенного от больного знтероколитом, и получила ОГ-значение рй 1 Р 211. Вновь выявлениая плазмида придает штамму-хозяину устойчивость к ампициллину (Ар), стрептомицииу (Ядп), тетрациклину (Тс) хлорамфениолу (Сгш), канамиину (Кш), способность синтезировать антиген колонизации, колицип, Для изучения плазмиды РКМР.211 она была передана методом конъюгации штамму Е:СО 11,153 Ба 1" (Штамм депоИ 1 дрован в институте биохимии и Физиологии микроорганизмов АН СССР под номером ВКд 1 Р,Ъ)Морфологические п.изнаки, Клетки Е.,со 11 ВКМ РЭ имеют вид прямых палочек величиной 15-3,0 х 0,3- 05 мкм, слабо подвижны, перетрихи, спор и капсул не образуют, по Граму не окрашиваются.Культуральные признаки. На мясопентонном агаре Е.со 11 ВКЛ К,Б дает слегка выпуклые полупрозрачные колонии диаметром 1-3 мм, на среде Эндо - круглые копонии, Окрашеннь 1 е в темно в красн цвет с металлическим блеском, диаметром 1-3 и, на кровя - ном агаре - круглые колонии без гемолиза, погупрозрачные. На мясопеп" тонном бульоне Е.со 11 ВКМ К 0 образует равномерное помутнение и осаДОК.фг 1 зиологические признаки. Е,со 11 8 К 11 Б./Б желатин не расжижает, образует индол, сероводород, восстанавливает нитоаты в нитриты, ферментиРует с образованием кислоты и газа глюкозу, лактозу, мольтозу, маннит, арасбинозу,. галактозу.1 енетические особенности. Штамм Е.со 1.1 ВКМ 11 В применяется в качестве реципиента при конъюгационнойперев,аче , плазмидКонъюг;, ионные скрещивания штамма Е,со 1: ВКМ 20, соцержащего в своем составе конъюгативную плазьпдду РКд 2.1 1, проводили по изВестнОмУ методу. В качестве реципиентов использовапи Е .со 11 С 600 МйЬг 1 едд 1 ос, Е.со 11 СбОО Ба 1 Жг 1 едд 1 ас. Во всех случаях были выявлены трансконъюганты, антибиотикорезистентность, а также способность синтезировать антиген колонизации и колицин которых соответствовали1 2059 О ВНИКНИ Заказ 6419/18 Тираж 521 Ог:. тисное Филиал ППП "Патент", г.Уитород, ул.йроектнал, 4 таковым у дацорцого штамма, (оньюгационный перенос плазмиды реципиецтным клеткам происходил через 20 ч с частотой 21 О , В отличие От известной СРА/1-плязмиды,выделенной ат людей, больных диарреей, ид цтифицированная плазмида рКМ 221 контролирует антибиатикорезистентнасть и способность продуцировать колицин, не угнетает Р-Опосредованную конъюгацию, имеет 21.-фецотип. Плазмида рКМЙ 211 не способна цаделять клетки хозяина чувствительностью к дацороспецифическим фагам 42, Г 1, Ы, М 82,Иь (1 псГ), 1 Ке (1 псН), РЮ (1 пс 8, 1 псЫ), 121 (1 пс 1).Следовательно, вновь выявленная плазмида не относится к группам несовместимости Р, Ы, Р, 1, 1.П р и м е р. Бцалагические свойства. Штамм Е.СО 11. ВКМ КО, которому в результате конъюгациаццого скрещивания с клиническим изалятом Е.СО 11 была передана плазмида рКМР 211, инкубировяли на агаре, содержащем 0,5 Е дрожжевого экстракта, Е триптона, 7 хлористого натрия, в течение 20 ч при 3 ЬС. Бактерии суспендиравали в О,5 И хлористом натрии(1 О Ч кл/м 11 ). Реакцию гемагглютинации проводили на стекле, смешивая бактерияльную культуру с 0,1 М Э -манназай в О,5 И хлористом натрии и 37 в н суспензией отмытых человеческих эритрацитов. Реакцию учитывали через О мин при 20 С, Штамм Е.СО 11 ВКМ К В давал положительную реакцию гемагглютинации человеческих эритрацитов групп крови А, В, АВ в присутствии-мяццазы, что свидетельствовало о наличии у него антигенов колонизации.Штамм Е,СО 11 ВКМ ЙО инкубиравали на чашках с мясопептанным агарам в течение 20 ч при 371 С. Колонии исследуемого штамма убивали путем обработки парами хлороформа в течение 20 мин при комнатной температуре. Затем на чашки с убитыми колониями штамма Е.СО 11 ВКИ КЭ засевали индикаторные штаммы Е.со 11. Кат 8 и Е.СО 11(, инкубировапи 20 ч при 3 С. Штамм Е.СО 11. ВКМ КП вызывал ингибирование роста бактерий индикаторных штаммов Е.СО 1 Кагя и Р ЧТО СВЦ( ЯтЕЛ;( , " ("(С( О Е 1 О ПО, Оо цас" ц (рацу 1;ира цать калициц.Физические свойства. 1(з штам.1,Е ( а В И Р, ",";(,:(еОч;кКац ЬЮ. с(Оь 3(,Е(с:( . ЯРЬг Р 2 ( 1 . бь 1 Я "и 1 еле Я и 1 ЯзИп ЯяДК. Электаафарез пл;.1 Як;дцай Пц (В 1(ца. ягуаров(О Яле 113 ВОли( Вь("явить (я;.И,ие . - Ои-(с 1(,П , - ; 1(чец В Опытах па тряцсфармяц 1 гц кле ;. Е, СО 1 1 К 12 80 (е . Яс. Вы ад транс" фармацтав сос-,авил 1.(;, 10 намкг ДН 1(, В результате были выделены трацсфармяцты, ,ацтибиатцкарезистетцость и В 11 рулентные свойства (способность пр;,дуц:1 равать ацтиген каОИ 1 зяци которых соответствовали таковым у исхоццога штамма,Молекулярный Вес плазмиды рК 1 Р 211 был Определен с помощью электрафарезя В ягаразнам геле при использовании В качестве свидетелей рЮк-плазмид с известивм молекулярным весом. Злектрафоретический анализ показал наличие плазмиды с молекулярным весам 98 МД. Вы . пление п(лззмид. контролирующихОдновременна устойчивость бактерий к лея-.ствецць. Веществам, я такжеспособность сииезиоавать Янтигец колацизации и кал(циц, прецставляетособый интерес так как такое сочетание свойств, определяемых плязмидай,делает культуры более опасными, повышяет их пята гециасть саздяет труднасти д. я лечения заболеваний, В связи с э т ц .4 ш т я мкы с ил я 3 ми "( а ми к О ди р у ю шими свойства Я"ибиатикарезистецт насти и Вирулецтцости, когут быть ИСПО.1;:ЬЗОВЯЦЫ 1 РЦ ВЬ(ЯВГ 1,энц 1ИЗУЧЕции Возбудителей острых кишечных инФекций, Это расширит наше па 1 шмянцемеханизмов инфекционных болезней иоткр "ет новые средства для диагноза,лечеция и предупреждения бактерияльныхинфекций, Кроме того, штам 1 ы с такими глазмидами пригаднь 1 для изучениягенетики и биологии Я-плазмид и факторов нирулентц, сти. В частности ОципозволятпаО(-.ить сущестВующуюкляссь 1 фикяццг плазмид,

Смотреть

Штамм. вкм, для изучения природы -плазмид и факторов вирулентности