Способ определения аденилаткиназной активности легких — SU 1659858 (original) (raw)
(51)5 6 01 й 33/68 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ ЕЛЬСТВ К АВТОРСКОМУ С(л СЛ Ф + фосфоэнолпирува ват + ТФ 00 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Белорусский научно-исследовательскийинститут экспертизы трудоспособности иорганизации труда инвалидов(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АДЕНИЛАТКИ НАЗНОЙ АКТИВ НОСТИ Л Е ГКИХ(57) Изобретение относится к медицинскойбиохимии и лабораторной диагностики заболеваний внутренних органов, в частностилегких и сердца. Целью изобретения является повышение точности способа за счет использования в качестве биологическогоматериала конденсата выдыхаемого воздуха, активации вспомогательного ферментапируваткиназы ионами магния и калия, заменой фосфатного буфера, более устойчивым и удобным в работе трис-буфером Изобретение относится к медицинской биохимии и лабораторной диагностике заболеваний внутренних органов, в частности заболеваний легких и сердца,Цель изобретения - повышение точности способа.Способ осуществляют спектрофотометрическим методом, основанным на измерении скорости сопряжения ферментативных реакций. Субстратами реакцийявляются АТФ и АМФ, а образующийся АДФ реагирует с фосфоэнолпируватом в присутствии пируваткиназы, Продуцируемый пируват определяют при помощи лактатдегидрогеназы при наличии НАД Н 2АТФ+ АМФ АДФ пвЯ 2 ао 1659858 А 1 0,05 М, рН,5, увеличением температуры инкубации до 37 С. Для исследования в две пробирки берут по 2 мл трис-буфера (0,05 М), 0,2 мл НАДН 2 (0,011 М), 0,2 мл фосфоэнолпирувата (0,015 М), 0,1 мл АТФ (0,025 М),0,1 мл АМФ(0,025 М),0,2 мл М 04(0,1 М), 0,2 мл КС (0,025 М), 0,01 мл пируваткиназы и 0,01 мл лактатдегидрогеназы, В опытную пробирку добавляют 0,1 мл конденсата выдыхаемого воздуха, в контрольную 0,1 мл бидистиллированной воды и помещают пробирки в термостат при 37 С на 30 мин. После инкубации охлаждают на льду и замеряют при 340 нм. Расчет проводят поЕ 3 10 1000формуле 6 22 1800 Е 2 679 ммоль/л/с. Способ позволяет при обследовании больных выявлять низкий уровень аденилаткиназнои активности, диагностирующей степень функциональных нарушений, 2 табл. Прируват+ НАДН 2 .Оактат+ НАД+ Для исследования в опытную и контрольную пробирки помещают по 2 мл трисбуфера (0,05 М), 0,2 мл НАДН 2 (0,011 М), 0,2 мл фосфоэнолпирувата (0,015 М), 0,1 мл АТФ (0,025 М), 0,1 мл АМФ (0,025 М), 0,2 мл М 9304 (0,1 М), 0,2 мл КС 3 (0,025 М), 0,01 мл пируваткиназы и 0,01 мл лактатдегидрогеназы. В опытную пробирку добавляют 0,1 мл конденсата выдыхаемого воздуха, а в контрольную 0,1 мл бидистиллированной воды и помещают в термостат при 37 С на 30 мин. После инкубации пробирки охлаждают на1659858 льду, замеряют оптическую плотность при 340 нм, Расчет проводят по ФормулеЕ " 310 " 10006 22 1800 Е2679 ммоль/лс ) где Е - разница экстинций контрольной и 5 опытной проб;6,22 - коэффициент молярной экстинции НАДН 23 - обьем инкубационной смеси;1000 - пересчет на 1000 мл; 10 1800- пересчет на 1 с,10- пересчет на 1 мл конденсата.П р и м е р 1, В клинических условиях данным способом проводят исследование конденсата выдыхаемого воздуха у больных 15 ХНЗЛ без бронхоспастического синдрома, с бронхвспастическим синдромом, при бронхиальной астме и ишемической болезни сердца.Результаты исследования представле ны в табл.1.Как видно иэ табл.1, пиазатели аденилвткиназной активности в конденсате выдыхаемого воздуха у обследованных больных значительно ниже, чем у здоровых 25 и коррелируют со степенью Функциональной недостаточности. Адеиилаткииазиая активность легкихпо коидеисату выдыхаемого воздуха,мХ/л/с п Х+ЯхЗдоровые 0,740 ф 0,125 ЛН 1-11 ст,ЛН 11 ст ЛН 0-1 ст.ЛН 1 11 ст Бронхиальная астма: 10 ЛН 0-1 ст.ЛН 1-11 ст,115 ИБС: 13 ХКН 0-1 ст.ХКН 1-11 ст. Группа обследованньи ХНЗЛ без бронхоспастического синдрома: ХНЗЛ с бронхоспастическим синдромом; При исследовании плазмы крови у данных больных изменения аденилаткиназной активности менее выражены,Сравнительные данные приведены в. табл.2.Таким образом, способ позволяет с большим коэффициентом достоверности и специфичности выявить при обследовании больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких (ХНЗЛ) и ишемической болезни сердца (ИБС) низкий уровень аденилаткинаэной активности, диагностирующий степень функциональных нарувеФормула изобретения Способ определения аденилаткиназной активности легких, включающий исследования биологической жидкости путем измерения скорости в системе сопряженных ферментативных реакций, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве биологической жидкости используют конденсат выдыхаемого воздуха, система сопряженных Ферментативных реакций дополнительно содержит 0,1 М МО 304 и до 25 М КО, а в качестве буфера - 0,05 М трис-НО буфер рН 7,5 и реакции осуществляют при 37 С.Таблица 1 0,356 й 0,040 с 0,001 0,245 0,030 с 0,001 0,314 ф 0,123 с 0,001 О, 251 - 0,02 б сО, 001 Оэ 278+ Оэ 049Оф 0010273 - О, 032 сО, 01 0,317 Х О, 050 с О, 001 0,1582 0,070 с 0,0011659858 Таблица 2 Аденилаткиназная активность плазмы крови, милл/с Группы обследованныхт Х Ф. Бй 11 5,31 Ю 0,53 оровые ХНЗЛ без бронхоспаческого синдрома:(0,0 БС 1 с О,1-11 ст Составитель А,АгуреевРедактор С,Лисина Техред М,Моргентая Корректор М.Пожо аказ 183 Э Тираж 417Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101