Штамм вируса гепатита ни-а, ни-в для приготовления специфических диагностических препаратов — SU 1687612 (original) (raw)

СОЮЗ СОВЕТСКИХСО ИАЛИСТ ИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК)5 С 12 М 7/00 Н ОП АВТОРСКОМ ЕТЕЛ ЬСТВУ усологии и ких препаГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР(56) ччоп 9 О.С. ет а. Ербегпс апб епбеп 1 с 1 ераттз и пба. ечбепсе аког а поп-А, поп-, В ЬерасЮз чгцз аетоо 9 у. -апсет : 876 - 879 (1980).Ваауап М.Я, ес а, Ечбепсе аког а чгаз и йоп - А, акоп - В Нерабтз Тгапзгпйеб ча йе Реса - Ога Воине, - птегчгоо 9 у, 20 23 - 31 (1 983).(54) ШТАММ ВИРУСА ГЕПАТИТА ни-А, ни-В ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ (57) Изобретение относится к вирусологии и касается получения диагностических препаратов, Цель изобретения - новый штамм Изобретение относится к виркасается получения диагностичесратов.Цель изобретения - выделение нового штамма вируса эпидемического гепатита ни-А, ни-В, способного вызывать соответствующую инфекцию у обезьян, сопровождающуюся выделением вируса, используемого для специфической диагностики гепатита ни-А, ни-В у людей.Штамм вируса эпидемического гепатита ни-А, ни-В Ошвыделен из фекальной пробы больного, взятой за день до появления желтухи, Штамм депонирован в 5 О 1687612 А 1 вируса эпидемического гепатита ни-А; ни- В, способного вызывать соответствующую инфекцию у обезьян, сопровождающуюся выделением вируса, используемого для специфической диагностики гепатита ни-А, ни- В у людей. Штамм вируса эпидемического (энтерально передающегося) гепатита ни-А, ни-В Ошвыделен из фекальной пробы больного, взятой за день до появления желтухи, и депонирован в Государственной коллекции вирусов под ч. 831. При заражении яванских макак штамм Ошвызывает развитие инфекции со специфическим поражением печени, выделением вируса с фекалиями, накоплением вируса в печени и желчи, появлением антител к вирусу эпидемического гепатита ни-А, ни-В. Вируссодержащие материалы и сыворотки, полученные от зараженных обезьян, используются для осуществления специфической диагностики эпидемического гепатита ни-А, ни-В, 1 табл,Государственнои коллекции вирусов под М 831 и обладает следующими свойствами,Морфологические свойства.Фекальная проба в виде экстракта была исследована методом иммуноэлектронной микроскопии с использованием сывороток добровольца, зараженного и перенесшего эпидемический гепатит ни-А, ни-В; реконвалесцентной сыворотки, содержащей антитела к вирусу ни-А, ни-В и взятой до заражения и не содержащей антител к данному вирусу. 8 исследуемой пробе были обнаружены вирусные частицы, реагирующие с реконвалесцентной сывороткой и нереагирующие с сывороткой, взятой до заражения,Вирусные частицы представляли собой сферические образования размером 27 - 28 нм, в препаратах они обнаруживались в виде полных и пустых форм. В присутствии реконвалесцентной сыворотки эти частицы выявлялись в вице скоплений или единичных структур, покрытых характерным венчиком антител, При исследовании 2;4-ной фекальной суспензии концентрация частиц составляла 1000 на 5 ячеек электронно-микроскопической сеточки.Биофизические свойства, Для изучения биофизических свойств выделенного штамма, названного Ош, были приготовлены очищенные двумя разными способами экстракты, Первый способ очистки включал два этапа центрифугирования - при 3000 об/мин и 10000 об/моин, Второй способ очистки включал помимо центрифугирования трехкратное замораживание-оттаивание при температурах - 70 С/37 С, При иммуноэлектронно-микроскопическом исследовании очищенных первым способом экстрактов вирус гепатита ни-А, ни-В выявлен в количестве 1000 частиц на 5 ячеек сеточки, а при исследовании экстрактов, очищенных вторым способом, выявлены только единичные частицы вируса,Исходя из этих результатов, далее для изучения плавучей плотности выделенного вируса в градиентах хлорида цезия были использованы только экстракты, очищенные первым способом, При проведении анализа фракций (с помощью метода иммуноэлектронной микроскопии) различных градиентов в хлориде цезия не удалось выявить вирусспецифические структуры.Полученные данные показывают, что выделенный вирус разрушается в результате замораживания-оттаивания, а также в результате воздействия концентрацией солей хлорида цезия, что характерно для вируса эпидемического гепатита ни-А, ни-В,Далее были проведены опыты по определению коэффициента седиментации данного вируса в сахарозе, Результаты показали, что основная масса частиц вируса выявлялась во фракции, соответствующей коэффициенту седиментации 183 в.Антигенные свойства,Вируссодержащие фракции далее объединяют и снова центрифугируют в 30,-ной сахарозе для осаждения частиц вируса, Полученный осадок ресуспендирован в фосфатно-солевом буфере, и вируссодержащая суспензия исследована методом иммуноэлектронной микроскопии в шифрованном опыте с различными сыворотками. Прове 25 30 35 лением вируса с фекалиями и накоплением 10 15 20 40 45 50 денные исследования показывают, что вирусоподобные структуры размером 27 нм реагируют с сыворотками, содержащими антитела к вирусу эпидемического (фекально-орального) гепатита ни-А, ни-В, и выявляются с хорошим венчиком антител, Сыворотки, не содержащие антитела к указанному вирусу, не реагируют с этими структурами,Полученные данные свидетельствуют о том, что при описанной очистке и концентрировании в сахарозе частицы вируса выделенного штамма сохраняют свои морфологические и антигенные характеристики, присущие вирусу эпидемического гепатита ни-А, ни-В,Антигенные свойства штамма Ошбыли исследованы с помощью реконвалесцентных сывороток, полученных из разных стран мира (Индия, Бирма, Непал, Франция, Афганистан). Исследование показывает антигенную близость выделенного штамма вирусу гепатита ни-А, ни-В, распространенному в данных странах Штамм Ошвируса гепатита ни-А, ни-В в виде 10-ного фекального экстракта, обработанного антибиотиками, был введен внутривенно яванской макаке, После этого у обезьяны развивалась типичная инфекция, и вирус далее был пассирован на яванских макаках,При заражении яванских макак штамм Ошвызывает развитие инфекции со специфическим поражением печени, выдевируса в желчи и печени, Вирус выделяется с фекалиями и накапливается в желчи в количестве, достаточном для получения вирусного антигена и осуществления специфической диагностики эпидемического гепатита ни-А, ни-В,Ниже описаны возможности использования вируса гепатита ни-А, ни-В, получаемого от обезьян, зараженных штаммов Ош,П р и м е р 1. Использование вируса гепатита ни-А, ни-В, полученного из фекальных проб инфицированной штаммом Ош яванской макаки, для диагностики гепатита ни-А, ни-В,Фекальные пробы от инфицированной штаммом Ошяванской макаки собирают на 15 - 25 день после заражения и готовят из них 10%-ные фекальные экстракты: к 0,5 г фекалий добавляют 5,0 мл 0,01 М раствора фосфатно-солевого буфера (ФСБ), встряхивают 15 мин на шуттель-аппарате, затем центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин, переливают надосадочную жидкость в пластиковые пробирки и осветляют центрифу1687612 Место сбора Количество положительных и обКоличество обсле рваных 2/84 12/37 34/52 24/38 1/24 2/25 Европейская часть СССРТашкентДемократическая Республика АфганистанИндияМонгольская Народная РеспубликаФ анция Составитель И. ТарасоваТехред М.Моргентал Корректор Т. Палий Редактор М. Петрова Заказ 3678 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Г 3 роизводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгрод, ул, Гагарина, 101.гированием в течение 30 мин при 10000 об/мин. Далее экстракты проверяют на наличие антигена методом иммуноэлектронной микроскопии,Положительные на антиген фекальные пробы в виде 10;-ных экстрактов используют в качестве антигена для выявления антител к вирусу эпидемического гепатита ни-А, ни-В в исследуемых сыворотках больных и в качестве положительного контроля при обследовании на вирус фекальных проб больных.В таблице показано присутствие антител к вирусу эпидемического гепатита ни-А, ни-В в сыворотках больных из различных географических зон мира.П р и м е р 2, Использование вируса гепатита ни-А, ни-В, полученного из желчи, инфицированной штаммом Ошяванской макаки, для моделирования гепатита ни-А, ни-В.Яванскую макаку, инфицированную штаммом Ош, забивают на 14 - 15 день после заражения. Желчь из желчного пузыря отсасывают стерильным шприцем и в дальнейшем проверяют на содержание вируса методом иммуноэлектронной микроскопии, Содержание вируса в желчи достигает 300 частиц на 5 ячеек электронно- микроскопической сеточки,В зависимости от содержания вируса желчь разводят в 5 - 10 раз стерильным физиологическим раствором, добавляют канамицин (0,5 мг/мл) и используют для заражения яванских макак. Заражение проводят внутривенно введением 1 мл разведенной физраствором желчи, Далее наблюдают развитие инфекции эпидемического гепатита ни-А, ни-В: выделение вируса сфекалиями, характерные для острого гепа 5 тита гистологические изменения печеночной ткани, появление вирусспецифическихантител.Для моделирования гепатита ни-А, ни-Вможет быть использован также фекальный10 экстракт, приготовленный по примеру 1.П р и м е р 3, Использование вирусагепатита ни-А, ни-В, полученного от инфицированной штаммом Ошяванскоймакаки, для получения гипериммунных ди 15 агностических сывороток,Для получения гипериммунных диагностических сывороток используют обезьяну(яванскую макаку), предварительно зараженную штаммом Оши переболевшую20 гепатитом ни-А, ни-В. Через два месяца после первого заражения обезьяне внутривенно вводят 1 мл вируссодержащей жидкости,полученной из фекальной пробы (пример 1)или из желчи (пример 2). Через две недели25 после повторного заражения обезьяну обескровливают. Из полученной крови обычным способом готовят сыворотку.Полученную сыворотку титруют методом ИЭМ и в дальнейшем используют для30 выявления вируса гепатита ни-А, ни-В в фекальных пробах больных с целью специфической диагностики.Формула изобретенияШтамм вируса гепатита ни-А, ни-В, ГКВ35 М 831 для приготовления специфическихдиагностических препаратов.

Смотреть

Штамм вируса гепатита ни-а, ни-в для приготовления специфических диагностических препаратов