Способ стерилизации субстрата-носителя для культивирования клубеньковых бактерий — SU 1712347 (original) (raw)

(51) 5 С 05 Р 11/08, С 12 й ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР РЕТЕН ОПИСАНИЕ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛ вательвен ной но-иссс дЕния И ергет.и- А.Бори-. М.А.Кра-. -исследо озяйст кий науч почвове рной зн енок, В ильев и 1976,о ССС1982,Изобретение относится к сельскохозяй- . счет чего снижается титр инокулянта, сокрэственной микробиологии и может быть ис- . щаются соки хранения препарата.пользовано в производстве препаратов Наиболее близким техническим решеклубеньковых бактерий, применяемых при.:нием является способ, в котором в качестве возделывании бобовых культур. субстрата-носителя используют измельченИзвестенспособстерилизациисубстра- ный торф, почву и их смеси с добавками та-носителя для клубеньковых бактерий, . источника углеводов, минеральных веществ предусматривающий внесение в субстрат и эктивированного угля, стерилизацию осутакой как торф, почв и их смесь источника ществляют после расфасовки в непроницауглеводов, минеральных веществ и активи- емую для микроорганизмов упаковку рованного угля, нейтрализацию полученной ионизирующим бета- или гамма-излученисмеси мелом, ее стерилизацию. ем, увлажнение проводят в два этапе - сначала до расфасовки до влажности 25-40,Недостатком данного способа является а затеи после расфасовки до влажности отсутствие в субстрате-носителе добавок, 40-600.интенсифицирующих процесс стерилиза- Недостаткомции; в составе получаемого препарата име- отсутствие в субсется много загрязняющей микрофлоры, зе снижающих дозу этого способа является трате-носителе добавок, облучения. Кроме того,(21) 4722461/13(46) 15.02.92. Бюл. 3 Ф 6 (71) Всесоюзный научноский институт.сельскох микробиологии, Белорусс ледовательский институт агрохимии и Институт яде ки АН БССР(56) Авторское свидетельст М 592807, кл. С 05 Р 11/08,Авторское свидетельст В 922104, кл. С 05 Е 11/08,(54) СПОСОБ СТЕРИЛИЗАЦИИ СУБСТРАТА-НОСИТЕЛЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ(57) Использование: сельскохозяйственная микробиология, производство препаратов клубеньковых бактерий, применяемых при возделывании бобовых культур. Цель. сни- жение себестоимости субстрата. Сущность изобретения: измельченный торф увлажняют, добавляют 10;-й водный раствор янтарной кислоты до содержания 0,004- 0,040 от сухого вещества торфа, выдерживают при комнатной температуре 24 ч, полученный субстрат-носитель рэсфасовывают в полизтиленовые пакеты по 50 г, герметично запэивают и стерилизуют иони зирующим излучением в дозе 0,8-1,0 Мрад, Способ позволяет снизить дозу облучения с 1,2 Мрад до 0,8 - 1,0, что приводит к снижению энергозатрат, 2 табл.себестоимость торфяных препаратов в значительной мере (около 30) определяетсязатратами, связанными с применениемпринятых доз (1,2 .М рад) гамма-облучения.Снижение такой дозы позволяет уменьшитьсебестоимость продукции.Цель изобретения - снижение стерилирующей дозы за счет добавки в субстратсенсибилизатора процесса радиационнойстерилизации,Для достижения цели перед облучениемв субстрат-носитель дополнительно вводятянтарную кислоту в количестве 0,004-0,04 о .Добавка янтарной кислоты стимулирует жизнедеятельность микроорганизмов, прорастание спор. Так как находящиеся в состоянии"покоя" микроорганизмы более радиорезистентны, чем в процессе активной жизнедеятельности, этот метод позволяет снизитьстерилизующую дозу облучения.Способ заключается в том, что в субстрат-носитель вводят янтарную кислоту вколичестве 0,004-0,04 оот массы сухогосубстрата-носителя, затем полученнуюсмесь тщательно перемешивают и выдерживают при 20 - 30 С в течение 24 - 36 ч. Далее субстрат-носитель расфасовывают внепроницаемые для микроорганизмов пакеты и подвергают радиационной стерилизации при дозе облучения 0,8 - 1,0 Мрад.П р и м е р 1, В размолотый торф вводятраствор янтарной кислоты в количестве0,0040 от массы сухого торфа, доводят еговлажность до 40 и нейтрализуют мелом,Параллельно готовят аналогичную смесь, нобез янтарной кислоты. Обе смеси выдерживают при комнатной температуре в течение24 ч с целью активизации процесса жизнедеятельности микроорганизмов.Полученный субстрат-носитель расфасовывают в полиэтиленовые пакеты по50 г и герметично их запаивают. Пакетыподвергают облучению ионизирующимизлучением, Затем пакеты, содержащиесубстрат-носитель с янтарной кислотой,а также пакетыбез янтарной кислотыразделяют на две группы: в одной группеопределяют степень стерильности субстрата-носителя, а в другой группе в пакетывводят клубеньковые бактерии, подращивают, определяют их титр и количество загрязняющей микрофлоры.Степень стерильности определяют следующим образом.Пакеты сразу же после облучениявскрывают, берут среднюю навеску субстрата-носителя из каждого пакета в количестве 1 г, разводят ее в 100 мл стерильнойводы, тщательно размешивают и пипеткойотбирают 1 мл суспензии, Микробиологиче 10 15 20 25 колбы отбирают 1 мл суспенэии, высевают в чашки Петри с использованием бобовой 30.35 40 45 50 55 ский посев производят в чашки Петри глубинным способом с использованием агаризованной среды МПА и выдерживают в течение 3 сут в термостате при 28+1 С, после чего производят подсчет выросших колоний. Для определения титра загрязняющей микрофлоры подсчитанное на чашках Петри количество колоний умножают на 100,поскольку разведение навески субстрата- носителя было произведено в 100 раэ,В оставшуюся часть пакетов шприцеванием вводят жидкую культуру клубеньковых бактерий по 25 мл на пакет с титром 10 КБ/г, в результате влажность субстрата-носителя достигает 60 о , место прокола заклеивают липкой лентой, содержимое пакетов перемешивают, пакеты выдерживают при 20 - 30 С в течение 30 сут для подращивания клубеньковых бактерий, После этого определяют титр клубеньковых бактерий. Для этого пакеты вскрывают, берут среднюю навеску препарата в количестве 1 г, разводят в стерильной воде, делая последовательно 8 разведений, из последней по разведению среды. Выдержав чашки Петри с посевом клубеньковых бактерий в течение 3 сут при 28+1 С, подсчитывают число колоний и умножают полученное значение на 10 .Количество загрязняющей микрофлоры устанавливают таким же образом, как при определении степени стерильности,Результаты влияния 0,004 о янтарной кислоты на микрофлору торфа и на содержание КБ в субстрате-носителе после его радиационной стерилизации приведены в табл.1.Иэ данных табл,1 видно, что введение янтарной кислоты в количестве 0,004 оот сухой массы торфа приводит к снижению стерилиэующей дозы с 1,2 до 0,8 Мрад, т,е.на 33 ,П р и м е р 2. В размолотый торф вводят раствор янтарной кислоты в количестве 0,040 от сухой массы торфа, Далее проводят операции по методике примера 1.Результаты опытов приведены в табл.2.Опыты показывают; что стерилизующая доза субстрата-носителя беэ янтарной кислоты составляет 1,2 Мрад, а с янтарной кислотой 0,8 Мрад, т.е. за счет введения янтарной кислоты произошло снижение стерилизующей дозы на 33%,. Уменьшение в субстрате-носителе содержания янтарной кислоты ниже 0,004 от массы сухого субстрата-носителя приводит к приближению значений стерилизующей дозы к 1,2 Мрад, т.е. эффект действия янтарной кислоты практически не определяется.1712347 Ф о р мул а из обре те н и я Способ стерилизации субстрата-носителя для культивирования клубеньковых бактерий путем обработки торфа гамма-об лучением, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью снижения себестоимости субстрата, перед облучением в торф вносят янтарную кислоту в количестве 0,004-0,046 от сухой массы субстрата, полученную смесь выдер живают 24 - 36 ч, а обработку гамма-облучением осуществляют в дозе 0,8-1,0 Мрад. Табли а 1 Без янтарной кислоты Титр микрооргаиизиов С янтарной кислотой Титр микроорганизмов Пакет Пакет Доза, Ирад КБ КБ Иикрофлора торфа Иикрофлора торфееТитр,КБ/10. Проба 2 Загрязнению,2 отКБх 10 Проба 2 Титр,КБ/гх 10 ПробаПроба 1 Загряз"нения,г отКБх 10 0,0 1 Сплошной рост загрязняющеймикрофлоры 0,5 0,7 2,9 3,2 3.2 З,8 2,9 2,8 0,8 1,0 1,2 Таблица 2 Без янтарной кислоты Пакет Доза Ирад С янтарной кислотой Пакет Титр микроорганизмов Титр иикроорганизиов Иикрофлора торфа КБ КБ Иикрофлора торФа Проба 1 Проба 2 ае т Титр ЗагрязКБ/ нения, з 10отКБ 10.э Проба 1 Проба 2 Титр КБ/г От Загряз"нения,отКБх 10 О,2 агрязняю плоеной россикрофлоры00 0000 5050200 грязняюще0 0 1 0 3,8 З,8 44 Составитель Т. ПолянскаяТехредМ,Моргентал Корректор Н, Ревская Редактор Н. Киштулин Заказ 507 Тираж .Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул, Гагарина, 10 Увеличение содержания янтарной кислотывыше 0,041, вызывает снижение титра клубеньковых бактерий в препарате. Использование изобретения позволяет снизить время облучения или уменьшить активность источника излучения; что в обоих слуЧаях приводит к уменьшению энергозатрат на радиационную стерилизацию и к уменьшению стоимости субстрата-носителя,Сплошной рост загОяз нюющей иикрофлорЫ 700 700 2;0 400 400 1,8 800 300 2,0 7 со 4 оО г,о 800 800 2,2 600 400 2,0, 0 0 2,6.0 0 , 2,8 19 Сп лоанщей ми20 30021 50022 20023 30024 40025 200г 6 10027 10028 029 100. ой росс крофлоры200 500 300 400 400 100 100 0,230,290,31 13 0,17 14 О,О 15 О, 1 О 16 0,03 7 0,04 18 50 100 .о 50 0 0 0 0 0 0 0 0 О О, О 0 0,44 О,41 0,02 0,006 0,06 0,02 0,003 0,007 0,35 0,46 0,59 0,450,009 0,01 0,001 0,005 0007 0,009 0,003 0,008

Смотреть

Способ стерилизации субстрата-носителя для культивирования клубеньковых бактерий