Способ оценки токсичности биологических жидкостей — SU 1725120 (original) (raw)
союз советскихСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 6 01 М 33/48 ТЕНИЯ ПИС ИЕ ИЗОБ К АВТОРСКО ИДЕТЕЛ ЬСТВУ 6 по. утем ти, вия цией Изобретение от частности оно приме токсичности биологи ниэма человека при ях, сопровождающих Цель изобретени за .счет сокращения раций при одноврем ности способа. Способ осуществ зом. Пробу исследуем кости подвергают фий биологической жидьтрации в пенной фа. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР 1.(71) Всесоюзный научно-исследовательский и испытательный институт медицинской техники(56) Авторское свидетельство СССР В 1224723, кл. 6 01 й ЗЗ/48, 1984.(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ТОКСИЧНОСТИ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ(57) Изобретение относится к медицине, биологии и может быть использовано для определения . токсичности биологических жидкостейорганизма человека. Цель изобретения - упрощение способа за счет сокращения числа трудоемких операций при одновременном повышении точности е саба, Оценку токсичности производят и забора пробы биологической жидкос приготовления фильтрата, воэдейст носится к медицине, в нимо для определения ческих жидкостей огра- различных заболеванися интоксикацией, я - упрощение способа числа трудоемких опе;. энном повышении точляют следующим обра 1725120 А 1 этим фильтратом на суспензию подвижных биологических микрообъектов с последующей. регистрацией зависимости подвижности суспенэии подвижных микрообъектов от времени. При этом пробу подвергают фильтрации в пенной фазе через фильтр с диаметром пор 45 й 5 Ао и пропускной способностью 0,5 ч. 0,1 в области мол.м. 50000, в качестве суспензии подвижных биологических микрообъектов используют суспензию сперматозоидов быка в глюкозо-цитратном растворе, определяют жизнеспособность сперматозоидов быка, а токсичность определяют по изменению жизнеспособности суспензии сперматозоидов быка в фильтрате относительно жизнеспособности суспензии сперматозоидов быка в глюкозоцитратном растворе. Предлагаемый способ позволяет повысить точность оценки токсичности биологических жидкостей организма человека: при различных заболеваниях, сопровождающихся интоксиказе через фильтр с диаметром пор 45+ 5 А и пропускной способностью 0,5. 0,1 в области мол.м. 50000, В качестве суспензии подвижных биологических микрообъектов .используют суспензию сперматозоидов быка в глюкозоцитратном растворе. Жизнеспособность суспензии сперматозиодов быка определяют как произведение среднего времени подвижности на логарифм величины подвижности в момент начала воздействия фильтратом, а токсичность определяют по изменению жизнеспособности суспенэии сперматозоидов быка в фильтрате относительно жизнеспособности суспенэии сперматозоидов быка в глюкозоцитрат, ном растворе.Выбор характеристик фильтра,аименно, диаметра пор 45. 5 А и пропускной способностей 0,5 й 01) обусловленнеобходимостью удаления из образца биологической жидкости высокомолекулярныхсоединений, вызывающих агглютинациюсперматозоидов. Зо позволяет правильнооценить жизнеспособность суспензиисперматозоидов. Кроме того, характеристики фильтра таковы, что в фильтрат попадаютвсе компоненты, ответственные за токсичность,Фильтрация в пенной фазе позволяетиспользовать малые обьемы образца, обеспечивает лучшее перемешивание и удаление фильтрационной корки.Использование в качестве суспензииподвижных биологических микрообъектовсуспензии сперматозоидов быка в глюкоэоцитратном растворе обусловлено тем, чтосперматозоид как клетка млекопитающегопо сравнению с парамециями по известному способу более адекватно реагирует наизменение состава биологических жидкостей организма человека.П р и м е р 1. У больного из катетера,. стоящего в одной из центральных вен, берут 10 мл крови, далее ее центрифугируют15 мин са скоростью 3000 б/мин. Полученную сыворотку подвергают с помощью перистальтического насоса фильтрациичерез волоконный фильтр с диаметром пор45.5 А и пропускной способностью0,5.ф. 0,1 в области мол.м, 50000.Для определения степени токсичностифильтрат сравнивают с контрольным раствором. Контрольной пробой служитглюкозоцитратная среда (цитрат натрия, водадистиллированная).Опытным образцом в экспериментеслужит фильтрат, доведенный до изотонии.На 5 мл фильтрата добавляют 0,2 г глюкозыи 0,050 г цитрата натрия.Вкачестве суспензии подвижных биологических микрообъектов используют замороженную в парах жидкого азотагранулированную сперму быка.Оттаивание каждой гранулы осуществляют в 0,5 мл глюкоэоцитратной среды при40 С, После оттаивания сперму сливают вколбочку и тщательно перемешивают. Затем в 1 мл опытной пробы добавляют 0,2 млоттаянной спермы; Приготовленные опытный и контрольный образцы помещают визмерительные кюветы, Проводят измерение зависимости подвижности - величины, 10 равной концентрации подвижных клеток на средний модуль их скорости, от времени в условных единицах для опытного и контрольного образцов. Вычисляют жизнеспособность суспензии сперматозоидов быка в опытном Ж и контрольном Ж" образцах какпроизведение среднего времени подвижности 1 ср на логарифм подвижности в начальный момент времени одгпт = 0Ж =т ср Оягп с =0, Ж =тср оцп 3 т =0Среднее время подвижности измеряют вминутах, а подвижность в условных единицах.Определяют токсичность (индекс токсичности) как отношение жизнеспособности опытного образца к жизнеспособности контрольного образца. 100%20гдет - индекс токсичности.Для сыворотки крови больного В. с диагнозом панкреанекроз,абсцесс сальниковой сумки с прорывом в свободную брюшную полость, разлитой гнойный перитонит состояние после операций: 1 ср = 21,7 мин, гпт-о = 438 у.е., Ж=57,8 мин, ср" =51,5 мин, гпт-о" =178 у.е., Ж" = 131,5 мин, т =44%.П р и м е р 2. Для сыворотки кровибольного А. с диагнозом панкреанекроз, ферментативный перитонит состояние после холецистостомии, дренирования и тампонирования сальниковой сумки и брюшной полости асср =- 25,1 мин, гпт- = 35 605 у.е., Ж = 68,6 мин, тср" = 51,5 мин. щт-о= 178 у,е., Ж" = 131,5 глин,= 53%.П р и м е р 3. Для сыворотки кровибольного Я; с диагнозом сепсис, разлитой гнойный перитонит, флегмона забрюшинного пространства и парарентальной клетчатки состояние после операций: тср = 12,8 мин, щг-о=258 у.е., Ж"30,9 мин, тср"=34,1 мин, п 1 т-о" = 190 у,еЖ= 77,7 мин, т = 40%.П р и м е р 4. Для сыворотки крови 45 здорового человека Т.: 1 ср =36,4 мин, вт-о= 217 у.е., Ж = 217,6 мин, асср = 49,1 мин, гпт-о = 167 у.е., Ж" = 167,9 мин, т = 130%.П р и м е р 5. Для сыворотки кровиздорового человека К.: асср = 51,6 мин, ат-о =335 у.е., Ж=339 мин,асср =62,8 мин, тт-о" = 284 у,еЖ" = 284 мин, т = 119%.Из примеров 1-4 видно, что больныеимеют значение индекса токсичности значительно ниже (выше интоксикация), чем у здоровых людей. У больного Я. по сравнению с больными В; и А, индекс токсичности наименьший, что свидетельствует.о большей выраженности интоксикации, которая привела бального к летальному исходу. У всех представленных пациентов с синдро1725120 стей за счет использования стандартной суспензии сперматозоидов, сохраняемой неограниченного долго до использования в жидком азоте, а также за счет возможности использования инструментальной оценки подвижности суспензии сперматозоидов. Возможность использования суспензии сперматозоидов обеспечивается предварительной фильтрацией исследуемого образца. 35 . Составитель Н.ГуляеваТехред М.Моргентал Корректор О.Кундрик Редактор И.Горная Заказ 1172 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул, Гагарина, 101 мом эндотоксикоэа величина индекса токсичности совпала с клинико-лабораторными данными.Определенный данным методом индекстоксичности дает возможность объективной 5оценки степени выраженности эндотоксикоэа, выбора метода деэинтоксикационнойтерапии и ее оценки.П р и м е р 6. Экспериментальное животное (собака), диагноз: перитонит. 10Получают лимфу, проводят пробоподготовку аналогично примеру 1: вся -17,5 мин,вс-о =403 уе.,Ж=45,6 мин,тср=32,4 мин,в-о" = 260 у,е., Ж" = 77,8 мин, 1 т = 58,6.П р и м е р 7. Экспериментальное животное (собака), диагноз: перитонит,Получают спинномозговую жидкость,проводят пробоподготовку аналогично примерам 1-4: тср = 18,2 мин, в-о = 512 у.е.,Ж = 49,3 мин, асср" 34,2 мин,вго" = 258 20у.е., Ж" = 81,9 мин, 1 т = 60,2%.Изобретение позволяет повысить точность способа эа счет оценки подвижностипо 1000 и более клеткам, а также эа счетопределения жизнеспособности суспензии 25сперматозоидов быка как произведениясреднего времени подвижности на логарифм величины подвижности в момент начала воздействия. В совокупности точностьпредлагаемого способа увеличивается, по 30крайней мере, на порядок, Предлагаемыйспособ позволяет также упростить определение токсичности биологических жидкоФормула изобретения Способ оценки токсичности биологи-. ческих жидкостей, включающий исследование воздействия биологической жидкости на суспензию подвижныхбиологических, микрообъектов с последующей оценкой токсичности по изменению подвижности объектов во времени непосредственно после добавления исследуемой жидкости, отл и ча ю щ и й с я тем, что с целью упрощения способа за счет сокращения числа трудоемких операций при одновременном повышении точности способа, пробу биологической жидкости предварительно подвергают фильтрации в пенной фазе, удаляя ингредиенты с мол.м, более 50000, в качестве микрообъектов используют суспензию сперматозоидов быка в глюкозоцитратном растворе, а жизнеспособность определяют как произведение среднего времени подвижности на логарифм величины подвижности.