Способ оценки физиологической активности лектина к сахарам — SU 1732276 (original) (raw)
Текст
3173собу в единицах концентрации углеводаварьирует в широких пределах и не мо"жет служить надежным критерием оценки. Кроме того, в ряде случаев добавление сахаров-ингибиторов не приводитк полному подавлению гемагглютинирующей способности лектиновдаже при высоких концентрациях углевода, что ,также снижает разрешающую способностьпримейяемой оценки.Цель изобретения - повышение точности определения.Поставленная цель достигается тем,что дополнительно определяют актив-ность лектина в пробах без добавления сахаров-ингибитороз по балльнойсистеме. От полученноГо значения вычитают сумму баллов реакции агглютинации с добавлением сахара-ингибитора. При этом чем больше величина раз"ности, тем вьппе физиологическая ак-.тивность лектнна к сахару.Способ осуществляется следующимобразом.Фиксированные объемы препараталектина с постоянным титром (1 г 4) помещают в иммунологические планшеты сполукруглым дном и смешивают с равными объемами углеводов в серии их последовательности двухкратных разведений. Систему инкубируют 1 ч прикомнатной температуре, после чего вкаждую лунку вводят равный исходномуобъему лектина объем 2 Х-ной суспензиитрижды отмытых эритроцитов и оставляют от 60"120 мин при й. +25 С,Аналогично проводят постановку реакции гемагглютинации с .исследуемымлектином без добавления сахара-ингибитора.Оценку гемагглютинирующей способности лектинов, как взаимодействую"щих с сахарой, так и без нйх, ведутвизуально по пятибалльной системегЭ балда - резко выраженная агглю"тниация. Эритроциты в виде тонкойпленки более или менее равномерно.,распределяются по всему дну лункиф2 балла - умеренная агглютинация.Эритроциты расходятся по дну лункина расстояние, превышающее в диаметре 2 мм, образуя кольцо с резко выра"женной зернистостью по краям; 1 балл - слабая агглютинация.Эритроциты расходятся по дну лунки на расстояние менее 2-х мм, образуя колечко или диск.столбчатой Форм примулы выделены дек тины (фракция, выпадающая в садокпри 763-ном насыщении этанолом пообъему) неизвестной углеводной специфичности. При помощи реакций ингибирования гемагглютинирующей способнос ти необходимо определить их физиологическую активность к шести сахарам:арабинозе, глюкозе, галактиту, галактозе, фруктозе.Реакцию гемагглютинации проводили 45 в иммунологических планшетах, оценивая по ранее указанной балльной системе. По известному способу оценкаосуществлялась поминимальному количеству сахара (в мИ), при котором 50 полностью подавляется реакция гемаг. глютинации.Изучая физиологическую активностьлектина, выделенного из длинностолбчатой формы примулы,.по известному 55 способу, нельзя сделать однозначноговывода об его активности к какому 10 15 20 25 30 6 40,5 балла - минимальная агглютинация.В центре совокупности эритроцитов,осевших на дно лунки, возникает не-большой просвет.4 0 баллов - отсутствие агглютинации. Эритроциты скапливаются в центре лунки.Затем определяют интенсивность агглютинации исходного раствора лектина без добавления сахара ингибитора суммируя значения в баллах каждой лунки иммунологического планшета. В случае, когда проба анализируется в восьми лунках, эта величина в зависимости от активности препарата лектина может достигать 24 баллов.Далее вычисляют сумму баллов реакции гемагглютинации смеси лектин-сахар (действительная активность). Она устанавливается при добавлении к лектину индивидуального сахара в восьми последовательных разведеннях.После этого вычисляют разность сумм баллов между пробами, определяя таким образом физиологическую активность лектина. При этом чем больше величина разности, тем вьппе она к сахару.П р и м е р. Путем дробного этанольного фракционирования из .неопыленных пестиков длинно- и коротко-. либо одному сахару. Из шести сахаров:одинаковое количество пяти подавлялогемагглютинирующую способность препа2276 По предлагаемому способу (в условных баллах) 1 угл еводы По прототипу, (вм 11 сахара) Активностьбез сахара-ингибитора Активностьдействитель изиологическаяактивность ная с саха- ром-ингибитором инностолбчатая форма 16 4,5 11,5 Арабиноза люкозаГалактит 16 16 силозаалактоэа 100 16. 8,5ороткостолбчатая форма Фруктоэ Арабиноэа 24 2 0 коза 23 1 Галактит 125 12,5 Ксилоза Галактоэ Фруктоэа 5. 173 рата. При оценке предлагаемым способом удалось установить, что из шести углеводов наибольшая разность сумм баллов между пробами, а Значит, и фи-. зиологическая активность, выявлена лишь к арабиноэе. За ним в порядке убывания следуют галактоза, глюкоза, галактит, ксилоза и фруктоза.У короткостолбчатой формы примулы при оценке по известному способу в наименьшей концентрации (12,5 мИ) подавляли активность лектина лишь два . сахара - ксилоэа и галактоза. Не удалось установить физиологической активности лектина к глюкозе и галактиту.Проведение оценки по предлагаемому способу показало, что данный лектин проявляет наибольшую физиологическую активность к ксилозе (19,5 балла). У галактозы этот показатель 17 единиц. Удалось также установить очень низкую активность препарата к галактиту, что нельзя было сделать при оценке по прототипу. 6Таким образом, предлагаемый способ, позволяет выявить разницу в физиологической активности в тех случаях, когда по прототипу такового не наблю дается, т.е. предлагаемый способ является более точным.Результаты способа представлены в -таблице. 10Формула изобретения. Способ оценки физиологической активности лектина к сахарам путем добавления к исследуемой Пробе лектинаразднчных сахаров - ингибиторов с последуюцей оценкой активности в реак, ции торможения гемагглютинации посумме баллов, .о т л и ч а ю щ и й "с я тем, что, сцелью повышения точ ности способа, дополнительно устанавливают активность лектина в пробахбез сахаров - ингибиторов, определяютфизиологическую активность по разнос.ти между суммами баллов и по уровню 25 разности оценивают активность лектина. 24 4,5 19,5 24 71724 9,5 14,5
Заявка
4698420, 05.06.1989
ПОЛТАВСКИЙ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЙ ИНСТИТУТ, КИЕВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМ. Т. Г. ШЕВЧЕНКО
ГОЛЫНСКАЯ ЕВГЕНИЯ ЛЬВОВНА, ПОСПЕЛОВ СЕРГЕЙ ВИКТОРОВИЧ, САМОРОДОВ ВИКТОР НИКОЛАЕВИЧ
МПК / Метки
МПК: G01N 33/53
Метки: активности, лектина, оценки, сахарам, физиологической
Опубликовано: 07.05.1992