Штамм соrynевастеriuм аммоniаgеnеs продуцент инозин-5 монофосфата — SU 1806199 (original) (raw)

(71) Всесоюзный научно-исследовательинститут генетики и селекции промышных микроорганизмов(73) Всесоюзный НИИ генетики и селепромышленных микроорганизмов(56) Авторское свидетельство СССРМ 575783, кл, С 12 Р 19/32, 1974.Патент Японии М 57-206381-А,кл. С 12 й 1/20, опублик, 1982.Заявка Японии М 58-46319,кл. С 12 Р 19/32, опублик. 1983.,(57) Использование: биотехнология,биологическая промышленность и кмикробиологического синтеза инози Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается микробиологического синтеза иноэин- монофосфата (5,-ИМФ),5-ИМФ находит широкое применение в пищевой промышленности как высокоактивная вкусовая приправа.Целью изобретения является увеличение уровня накопления 5,-ИМФ и повышение эффективности использования глюкозы.Это достигается получением нового штамма СогупеЬастегив (ВгечЬастегыв) аввоЬацепез А 72-26, депонированного нофосфата, Сущность изобретения: штамм СогупеЬастегцв (ВгечЬастегов) аввопацепез ВКПМ Вполучен гене- тико-селекционным путем без применения мутагенной обработки с использованием ступенчатого отбора мутантов, реэистентных к павы ша ющимся концентрациям арсената из родительского штамма Вг. аввопацепез 79-5 (ВКПМ В), В отличие от родительского штамма В, накапливающего смесь четырех продуктов пуринового и пиримидинового происхождения - уридин-монофосфата, урацила, инозин-монофосфата и гипоксантина. штамм Вявляется продуцентом исключительно иноэин-монофосфата. Штамм Вобладает наиболее высокой активностью накопления иноэин- монофосфата (до 35,0 г/л) среди эффективных из патентной литературы штаммов. Кроме того, он более эффективно использует глюкозу на образование целевого продукта, 1 табл. во Всесоюзной коллекции промышленныхттееее микроорганизмов под номером ВКПМ В,Штамм Вполучен генетика-селекиианнмм путем бее применения мутегенной обработки с использованием ступенчатого отбора мутантов, резистентных к повышающимсл концентрациям арсената. Исходным материалом длл селекции послужил пигментообраэующий штамм Вг.аввоп)ацепез 79-5 (ВКПМ В), накапливающий смесь четырех продуктов пуринового и пиримидинового происхождения - уридин-монофосфата (УМФ), урацила 5-ИМФ инату штамм Вполностью потерял способность к накоплению пигмента и обрааоаанию но гипоксантина, Штамм Вотличается от родительского штамма Вустойчивостью к арсенату, улуцшенным ростом на жидких и твердых средах, утратой способности к образованию пигмента при росте на агаризованной среде Хоттингера, В отличие от родительского штамма, он накапливает исключительно 5,-ИМФ,Культурно-морфологические признаки.Грамположительная палочка длиной до 1,5 мкм, шириной 0,6-0,8 мкм, без жгутиков, неподвижная, не образует спор, На агариэованной среде Хотингера после 1-2 суток культивирования при 30-34 образуе колонии круглой формы диаметром 2,0-3,0 мм с ровным краем бледно-желтого цвета, Поверхность колоний гладкая, с матовым блеском и слабой концентрической исцерченностью. При посеве петлей на твердую среду Хоттингера после инкубации в течение 24 ч при 30-34 наблюдается умеренный рост, поверхность штриха гладкая, блестящая, бледно-желтого цвета. В отличие от родительского штамма, заявляемый штамм Вутратил способность к выделению в среду красно-бурого пигмента при инкубации на полноценной агаризованной среде Хоттингера,Аэроб, При посеве уколом в полноценный агар растет только на его поверхности. При инкубации на жидких полноценных средах при 30-34 беэ встряхивания рост отсутствует, пленки на поверхности не образуется. При встряхивании, через 24 ч наблюдается знацительное помутнение. -=-.- Для роста на жидкой и агаризованной средах требуется добавка аденина, биотина, витаминов В 1 иВз,Культуру поддерживают на косяках с агаризованной средой Хоттингера с добавкой аденина в концентрации 10 мг на 1 л среды.Физиолого-биохимические признаки.Штамм Вявляется ауксотрофом по аденину. Желатину не разжижает, на крахмальном агаре и обезжиренном молоке роста нет. На ломтиках картофеля рост умеренный, клетчатку не разрушает и не усваивает. Нитраты не восстанавливает, Усваивает глюкозу, фруктоэу, рибозу, цитрат, пуриновые и пиримидиновые рибонуклеозиды, плохо усваивает сахарозу, сорбит, маннит, не потребляет лактоэу, галактозу, фумарат, сукцинат., ксилозу, арабинозу, глицерин, рамноэу, маннозу,Антагонистических свойств не обнаруживает, Не патогенен,Устойчив к арсенату в концентрации2 мМ. В результате резистентности к арсепиримидиновых производных (УМФ и урацила).Как следует из данных, приведенных втаблице, при культивировании штамма В 5 5534 он образует до 32,2-35,0 г/л 5-ИМФ, вто время как штамм-прототип накапливает26,8 г/л 5-ИМФ, При этом скорость накопления 5,-ИМФ и степень конверсии глюкозыу заявляемого штамма значительно превышает соответствующие показатели штаммапрототипа.П р и м е р 1, Культуру СогупеЬас 1 ег 1 шп(Вгеч 1 Ьастег 1 цв) аавопадепез Всоскошенного агара Хоттингера переносят в15 жидкую посевную среду следующего состава, мас. :глюкоза техническая 2,0пептон 1,0дрожжевой экстракт 1,020 КаС 1 0,25вода до 100Посевной материал выращивают в колбах емкостью 750 мл, содержащих 75 мл среды, на качалке, делающей 240-250 об/мин25 при 34 в течение 24 ч, Посевной материалв количестве 10 об.% переносят в ферментационную среду следующего состава, ь:глюкоза техническая 15,0кукурузный экстракт 6,030 КН 2 Р 04 3,0Мд 5047 НгО 1,0моцевина 0,84вода до 100Среду стерилизуют при 0,8 атм в тече 35 ние 30 мин, мочевину стерилиэуют отдельнов аиде 40 -ного раствора при 0,5 атм30 мич,. После стерилизации рН среды подводят до 7,3 раствором КОН 7 й и добавляютраствор мочевины,40 Процесс ферментации осуществляют вколбах емкостью 750 мл, содержащих 30 млсреды, на качалке, делающей 350 об/мин,что соответствует скорости растворениякислорода 3,8 г 02/лч при 34 О, После.1 44 ч45 ферментации в культуральной жидкости накапливается 32,2 г/л 5-ИМФ, Степень конверсии глюкозы 21,5% (в прототипе 17,8 о ),П р и м е р 2. Штамм, условия выращивания посевного материала и условия фер 50 ментации те же, что в примере 1. Отличиязаключаются в составе ферментационнойсреды, мас оглюкоза техническая 14,0кукурузный экстракт 8,055 КН 2 РО 4 3,0М 9804 7 Н 20 1,0мочевина 0,84вода до 100После 144 ч ферментации в культуральй жидкости накапливается 35,0 г/л 5-ИМФ,1806199 Сравнение основных показателей, характеризующих заявляемый штамм и штамм-прототипСоставитель Л. КазариноваРедактор 3. Ходакова Техред М.Моргентал Корректор 3. Салко Заказ 966 Тираж ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям 113035, Москва, Ж, Раушская наПодпи откры ноеям при ГКНТ СССР., 4./ Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101 Степень конверсии глюкозы 25,0 ф 1 в прототипе 17,8 о )Таким образом, заявляемый штамм СогупеЬасйег 1 огп (Вгеч 1 Ьастег 1 ов) агпгпоп 1 адепез ВКПМ Вобладает следующими преимуществами по сравнению со штаммом-прототипом:превосходит штамм-прототип по количеству накапливаемого целевого продукта 5-ИМФ на 20-30 О; обладает большей скоростью накопления 5-ИМФ;отличается более высокой эффективностью использования глюкозы на единицу 5 продукции. Формула изобретения Штамм СогупеЬасгег 1 ит аегпоп 1 ацепез ВКПМ В- продуцент инозин-моно 10 фосфата.

Смотреть

Штамм соrynевастеriuм аммоniаgеnеs продуцент инозин-5 монофосфата