390727 — SU 390727 (original) (raw)
. Кл. С 120 7/О Заявлено 20.1 Х.1971 ( Приоритет 21,1 Х.1970, Опубликовано 11,И 1.1703785/30-182733/70, Япони Государственный комитеСовета Министров СССРпо делам изобретенийи открытий ДК 63:576,8(088.8 3. Бюллетеньта опубликования описания 29.Х 1.1 Авторыизобретсния Ино цуми ранцыи Тосио Канония)ная фирмаКомпани, Лния) Сусуми ва аявител Иностран итомо КемикалС митед ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОБНОГО ИНСЕКТИЦИДА учения ми и культив Изобретение относится к области защиты возделываемых растений от насекомых-вредителей микробиологическим путем, более конкретно к микробиологическим способам получения инсектицидных веществ.Уже известен способ получения микробиологических дрепаратов, содержащих микроорганизмы, относящиеся к виду Вас 111 цз Йцг 1 препью, для борьбы с вредными насекомыми сада, огорода и леса, основанный на том, что 1 протеиновые кристаллы-токсины, образующиеся в клетках спор этих микроорганизмов, проявляют высокую токсичность по отношению к личинкам насекомых. Гамма-эндотоксины вызывают отравление, приводящее к гибели на секомых.Известные препараты оказывают аналогичное инсектицидное действие и на тутового шелкопряда. Кроме того, действие препарата продолжается и после опрыскивания, так как в телах убитых токсинами насекомых из-за образования спор возникает вторичная инфекция, которая переносится на другие индивидуумы, в частности на тутового шелкопряда, ветром, дождем, движением животных и насе комых.Предлагается способ пол кробного инсектицида, включающе ирование Вас. Йцппрепз 1 з в жидкой питательной среде, выделение спнор и токсинов посредством центрифугирования и высушивание, при котором с целью исключения вторичной инфекции споры лишают способности к размножению, сохраняя их инсектицидную активность, Для этого культуральную жидкость обрабатывают в период минимального образования токсинов перекисью водорода, Р-пропилактоном илиультразвуком.В период минимального образования токсинов культивирование прерывают и к культу- ральной жидкости добавляют перекись водорода из расчета 0,5 - 5,0 вес.7 О, Р-пропилактон берут из расчета 0,25 вес.%. Воздействие ультразвуком проводят из расчета 20 килоциклов в течение 20 мин.П р и м е р. Микроорганизм, относящийся к виду Вас. Йцппрепз 1 з, выделяют из мертвых насекомых и культивируют, а затем отбирают наиболее токсичные штаммы.В пробирку загружают 10 мл среды, состоящей из 1 мл дистиллированной воды, 10 г пептона, 10 г мясного экстракта и 3 г хлористого натрия и доводят рН до 7,2. После стерилиза ции среду инокулируют отобранными штам мами. Культи в; рован пе проводят п рп взбалтывании в течение 72 час. Споры и гамма-токЧисло убитых насекомых через время, часТаблица 2 Насекомое Способность размножаться спор штаммов Степень стабилизации гамма-токсинов"ф Концентрация перекиси водорода,вес, оа45 ЗО 24 50 (%) 2 6 АЕ Гусеница сосноваяКапустный червь Рисовый червь 12 (100) 0 (100) 0 (100) 0 0 5 3 2 1 0,75 0,50 0,25 0,125 0,065 17 14 ЗО 2050+ сины собирают путем центр ифугирования (15 С, 7000 об/мин, 10 мин) и промывают дистиллированной водой, после чего снова центрифугируют (5 С, 7000 об(мин, 10 мин) и высушивают в вакууме с сохранением способности их к размножению.Сухие вещества разбавляют водой до концентр ации 2 вес. 7 о и после пер смешивания распыляют на тутовые листья, которые скармливают двадцати шелкопрядам второго дня второго возраста для определения вирулентности штамма.Полученные результаты даны в табл. 1. При меч ание. Общее число подопытных насекомых каждого штамма - 20. Из данных табл. 1 видно, что самые сильные по вирулентности штаммы - А, Е, Г. Эти штаммы выращивают в стерильной среде (500 мл при 27 С в течение 96 час) состава, г/л: 5 КНгР 04, 5 КгНРО, 0,0002 хлористоводородного тиамина, 0,5 Мд 504, 0,3 Мп 50, 0,01 1 еЯО, 0,05 СаС 1 г, 1,5 Ка - ИНРО, 3 цитрата натрия и 10 Сазагп 1 о асЫ.После подтверждения с помощью фазо-контрастного микроскопа, что образовалось доф - обозначает уничтожена, + обозначает уцелела.фф + эффективность токсинов слегка уменьшена по сравнению с необработаннои культуральной жидкостью; + -1 эффективность токсинов такая же, как у необработанной жидкости. 1 О 15 2 О 25 ЗО 35 статочно кристаллических токсинов, культивирование прекращают и культуральную жидкость подвергают обработке для лишения спор спосзбности к размножению, В качестве обр.батывающсго агента добавляют перекись ьодорода из расчета 0,065; 0,125; 0,25; 0,5;0,75; 1,0; 2,0; 3,0; 5,0, вес. % . Через 24 час берут 1 мл обработанной культуральной жидкости и инокулируют 10 мл стерильной среды. Полученные результаты даны в табл, 2, из которой ьидно, что при добавлении к культуральной жидкости 0,5 вес. аз, перекиси водорода живых спор не наблюдалось.Так как после добавления 0,5 оо или более перекиси водорода выживших спор не наблюдают совсем, то каждый штамм подвергают обработке перекисью водорода из расчета 0,5 вес.% для лишения способности спор к размножению, споры собирают путем центрифугирования (5 С, 7000 об(мин, 30 мин) несколько раз промывают дистиллированной водой, высушивают под уменьшенным давлением для получения сухих веществ. Затем готовят 2%-ный препарат и равномерно наносят его на тутовые листья, которые скармливают четырем шелкопрядам. Результат подтверждает, что обработанный препарат может полностью убивать тутового шелкопряда за 2 - 3 час и что токсины в клетках в активном состоянии. Такие же результаты получают с препаратами, обработанными 1 з-пропилактоном, взятым из расчета 0,25 вес.са или ультразвуком из расчета 20 кплоциклов в течение 20 мин.Проводят опыты по определению инсектицидной активности препарата, полученного из штамма (табл. 1) вышеуказанным путем, на вредных насекомых. Полученные результатыприведены в табл, 3. Из табл. 3 видно, что микробный инсектицид, полученный путем лишения микроорганизма способности размножаться, обладает инсектицидным действием для вредных насекомых, Кроме того, микробный инсектицид не вызывает вторичной инфекции и поэтому не оказывают вредного действия на тутовогошелкопряда.Указанные сухие клетки вводят внутрь мышам в дозах 3 г на 1 кг веса, отравления или нарушения физиологических отправлений не происходит.390727 Предмет изобретения Составитель С. Скрябина Техред Л. ГрачеваКорректор А. Васильева Редактор Е, Хорина Заказ 3060715 Изд. Мо 1753 Тираж 467 Подписное 1 Яг 1 ИИПИ Государственного комитета Совста Министров СССР по делам, изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр, Сапунова, 2 1. Способ получения микробного инсектицида, включающий культивирование Вас 111 цз йпг 1 препз 1 з в жидкой питательной среде, выделение спор и токсинов посредством центрифугировапия и высушивапия, отличающийся тем, что, с целью исключения вторичной инфекции, споры лишают способности к размножению, сохраняя их инсектицидную активность.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что лишение спор возможности к размножению осуществляют путем обработки культуральной жидкости перекисью водорода Д-пропилактоном или ультразвуком,3. Способ по п. 2, отличающийся тем, чтоперекись водорода берут для обработки куль туральной жидкости из расчета внесения 0,5 -5,0 вес,о/о.4. Способ по п. 2, отличающийся тем, чтодля обработки культуральной жидкости берутД-пропилактон из расчета внесения 0,25 вес 7 о.10 5. Способ по п. 2, отличающийся тем, чтообработку культуральной жидкости ультразвуком производят из расчета 20 килоциклов втечение 20 мин.