Способ получения -гомостероидов или их 1, 2 дегидропроизводных — SU 697054 (original) (raw)

(23) Приорите (3) 4666/72 осударствеиный комитет СССР по делам изобретений и открытиИ(72) Авторы изобретения Иностранцыт, Лео Алиг и Марсель Мюлле (Швейцария) до Иностранная фирма Ф.Гоффманн ля Рош и К-ДЕГИДРОП ется в том,формулы Изо получе Р-гомо я к способу в литератур ормулы тение относи не описанныроидов общей С 11СО активных орга- наприЫ, 2178,1 1 РО или их 1,2-дегидропроизводных,где В,( - водород, фтор, хлор илиметил; В и В 3 независимо друг отдруга означают окси- или низшую ацилоксигруппу, обладающих биологической активностью,Известен способ получения 11 о(.-оксипрогестерона путем окисленияпрогестерона с помощью культурыкп 1 яориз аггЬ 1 зиз (1).Цель изобретения - расширениеассортимента биологическиР-гомостероидов.Основаный на известной реакцииокисления, предлагаемый способ получения Р-гомостероидов или их 1,2-дегидропроизводных заклю что Р-гомостероид обще где В, В и ВЗ имеют вышеуказанное1 о значение, или его 1,2-дегидропроизводное окисляют в положение 11с помощью микроорганизмов или выделенных из них ферментов с последующим выделением целевого продукта.Ж Желательно использовать микроорганизмы таксономических единиц фунги и шизомицетов, в особенности аскмицетов, фикомицетов, базидиомицетов и актиномицетов, а также полученные химическим или физическимспособом мутанты,Наиболее подходящими микронизмами являются Сигъи 1 аг 1 а,мер С. сипаса ИКВ 1 2380 и ИйЗ АЬз 1 с 11 а, например А. соегцса697054э 4435, Со Ые 1 о 1 г 1 сйцщ, например С. оГ,р 1 я 1 АТСС 12520, Ре 11 сц 1 аг 1 анапример Р, Х 1(,авеп 1 ояа 1 ГО 6675, Я(;герощусея, например Я, ЙгаЛ 1 ае АТСС10745, Сцпп 1 п 9 ЬагпеИа, например,Сцп. Ьа 1 п 1 ег 1 АТСС 9244, Сцп. чего.1;"се(,(,а 1 а АТСС 8983, Сцп. е 0 едапя АТОС9245 и Сцп, есй 1 пцга 1 а АТСС 8984,Руспоярог 1 щп, например Русп. яр. АТСС12231,П р и м е р 1, 500 мл стерильного )питательного раствора, содержащего 5,0 сахарного крахмала, 05Согп яеер 119 цоп, 0,2 нитрата натрия ИаИОз, 0,1 дигидрофосфата калияКНРО 4, 0,05 хлорида калия КС 0,0,05 сульфата магния МЧЯО 4, 0,002сульфата железа РеБО 4,засевают двухнедельной культурой, выросшей наскошенном агаре, и пять дней встряхивают при 30 С, Полученной подготовйтельной культурой засевают 20=лподготовительный Ферментер с 15 лстерильной среды, содержащей 5,0сахарного крахмала, 0,25 Согпягеер 119 цог,0,1 ИаИО 3, Ор 5 КНРО 4,и выдерживают 72 ч при перемешивании 25(220 об/мин) и аэрации (15 л/мин),при 29 С. 900 мл полученной подготовительной культуры переводят в20-л главный Ферментер, содержащий14,1 л той же среды, что и подгото- ЗОвительный Ферментер, выдерживают втечение суток при перемешивании иоаэрации при 29 С, смешивают с проФнльтрованным в стерильных условияхраствором 3 г 17 с-окси-ацетокси-Р-гомо-прегнен,20-диона в 150 млдиметилформамида и ферментируют40 ч. Затем полученную смесь фильтруют и мицелий экстрагируют метилизобутилкетоном. Экстракты объединяюти концентрируют в вакууме, остатокхроматографируют на силикагеле, полученный сырец перекристаллизовываютиэ смеси ацетон-гексан и получают11, 17 . -диокси-ацетокси-Р гомо-прегнен,20-дион. П р и м е р 2, Питательную среду,состоящую из 0,15 Согп ягеер 119 цсг0,5 пептона и 0,5 глюкозы в дистиллированной воде (рН 7,3), затоавливают Ага)",гоЬасег я 1 щргех АТСС 6946,выдерживают сутки при 28"С, прибавляют раствор 25 мг Р-гомогидрокортизона в 1 мл 80-ного водного этанола, инкубируют 48-72 ч, отделяютмицелий от субстрата, промывают водой и прОмывные воды и субстрат экстрагируют метиленхлоридом. Переработка экстрактов дает Р-гомо,17 г 1 Ы.,21-триоксипрегна,4-диен,20-дион(Р-гомопреднизолон),Аналогичным образом можно получать11(,11 аЫ,21-триокси-Р-гомопрегна,4-диен,20-дион (Р-гомопреднизолон), т.пл, 250 С (разл,) бЫ-Фтор-Р-гомогидрокортизон,т.пл. 233-235 Сбс(;Фтор-Р-гомопреднизолон,т.пл, 261-264 Сбд:хлор,17 а,21 - триокси-Р-гомопрегн-ен,20-дион11 ,17 ас(,триокси-бы.-метил-Р-гомопрегн-ен,20-дионП р и м е р 3. МикроорганизмС. 1 цпа 1 а ИВВ 1, 2380 выращивают и пересевают, как в примере 1, 900 млпредварительной культуры переводятв 50 л испытательного ферментера,содержащего 30 л стерильной средыиз 1 Согп я 1 еер ЬЧцог, 1 соевоймуки и 0,005 соевого масла, Послевыращивания предварительной культурыв течение 12 ч при 29 С, аэрации(220 об/мин) смешивают ее с профильтрованным в стерильных условияхраствором б г бс-фтор-Р-гомо-Ве 1 сйяе 1 п-Б-ацетата в 200 мл метилцеллозольва и ферментируют дальше втех же условиях, Через 68 ч Ферменгацию прекращают (контактное время52 ч), Культуральную жидкость фильтруют и Фильтрат и отфильтрованный мицелий экстрагируют метилизобутилкетоном. Экстракты очищают и концентрируют в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле. Головной погон после элюирования содержит непревращенный и омыленный исходныйматериал. Из средней фракции получают бд;Фтор(,17 ас,21-триокси-Р-гогло-прегна,20-дион, которыйперекристаллизовывают из уксусногоэфира. Выход 1,85 г. Т.пл. 235-236 С,с 2 14300. В аналогичных условиях при использовании С. (,цпаг,а ИВИ 2178, Сцп. Ьа 1 п 1 ег 1 АТСС 9244 или Сцп. е геуапяАТСС 9245 вместо С, 1 цпа 1 а ИВВХ 2380 выделяют только 11)3-оксисоединения. П р и м е р 4, В условиях примера 1 Р. Г 11 ащепояа Г. яр. яаяаК 11 АУСС 13289 выращивают и пересевают.900 мл предварительной культуры переводят в 20=-л стеклянный Ферментер, содержащий 14 л стерильной среды из 6 жидкого сахарного крахмала (3 глюкозы), 1 Согп ягеер 19 цог, 0,2 ИаИО, 0,1 КНО 0,2 КНРО 4, 0,05 МЧВО 4,0,002 Ре 804 и 0,05 КС 8 После выращивания предварительной культуры в течение 12 ч при 29 С, аэрации (30 л/мин) и перемешивании (220 об/мин) смешивают ее с профильтрованным в стерильных условиях раствором 3 г бс(.-метилаы, 21-диокси-Р-гомо-прегна,20-дион- -21-ацетата в 100 мл диметилформа69 7054 СН 2 Нсо гдеметидругацилропрс яФорм ула изобретения Составитель Т, ЛевРедактор Т. Шарганова Техред М.Келемеш оваКорректор Г Решетн Тираж 513 ЦНИИПИ Государственного к по делам изобретений и 13035 Москва, ЖРаушскЗаказ 6610/60 Подписноемитета СССРткрытийя наб д. 45 Филиал ППППатентф , г, Ужгород, ул, Проектная мида и ферментируют дальше в такихже условиях.Через 17 ч ферментации (контактное время 52 ч) культуральную жидкость Фильтруют. Мицелий и культуральную жидкость экстрагируют метилизобутилкетоном, Экстракты объединяюти концентрируют в вакууме, Остатокпромывают гексаном и хроматографируют на силикагеле. При градиентномпроявлении смесью метиленхлорид-аце- )Отон (1:1) из исходной фракции получают 870 мг омыленного сырья,После перекристаллизации из смеси этиловый эфир - уксусный эмирсредние фракции составляют 133 мг6 с-метил"11,17 а,21-триокси-Р-гомо-прегна,20-диона, Т.пл. 218219 С. Е 4 15100,После перекристаллизации из смеси гексан-изопропиловый эфир следя,щие Фракции составляют 660 мг бе- -метил,17 а,21-триокси-Р-гомо- -4-прегна,20-диона. Т.пл, 184- 186 С. Е 42 15000. Вместо Р. ЕХЕащеповс Й. вр. вава 111 ОТСС 13289 можно использовать штамм Р. Кц 1 ащеп 1 ова 1 РО 6675. Способ получения 0-гомостероидовбщей Формулы 111 ф- водород, фтор, хлор илиВ и В 9 независимо друг от означают окси- или низшую ксигруппу, или их 1,2-дегидизводных,о т л и ч а ю щ и йтем, что 0-гомостероид общей лы6 н кСО З,где Н, Р. и Вз имеют вышеуказанное значение, йли его 1,2-дигидропроизводное окисляют в положении11 с помощью микроорганизмов, способных к 11-гидроксилированию 0-5-стероидов с последующим выделением целевого продукта.Источники инФормации,принятые во внимание при экспертиз1. Физер Л Физер М. Стероиды,М., Мир, 1964, с683.

Смотреть

Способ получения -гомостероидов или их 1, 2 дегидропроизводных