Штамм bacterium prodigiosum (serratia marcescens) в-10, м-2 продуцент неспицифической эндонуклеазы — SU 928794 (original) (raw)

. сока совит соцюлистйчкских гюваиикГосудАРсззеннОе пАтеятяоеВтдомспю ссср (Госшият ссщОПИСАНИЕ ИК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЗИ 9) 8 (11) 928794 А 1Я) С 1251 2 С 12 Я 9 16(73) Институт Етологии и генетини СО Ан СССР(54) ШТАММ ВАСТЙВМ РЙОМОВВОМ (8 ЕЙЙАТИ МАЙСЕВСЕЙЗ) Ву М- ПРО-:. ДУЦЕНТ НЕСПИЦИФИЧЕСКОИ ЗНДОНУКЛЕАЗЫИзобретение относится к микробиологии и представляет собой новый штаммВас 1 ег 1 це ргоб 91 озце(8.еагсезсепз) 8-10,М, который может быть использован какпродуцент неспецифической эндонуклеазы -препарата для борьбы с вирусными инфекционными заболеваниями животных и насекомых,Известен штамм Вас 1 ег 1 це ргоб 191 озцв(З,еагсезсепз) 8-10, М, синтезирующийвнеклеточную неспецифическую эндонуклеазу в количестве до 3600 ед/мл культуральной жидкости при выращивании напептонной среде.Однако штамм Вастег 1 це ргоб 191 озцв(Ялпагсезсепз) 8-10, Мобладает недостаточно высокой активностью внеклеточнойнеспецифической эндонуклеазы для получения фермента.Цель изобретения - увеличение активности - достигается тем, что штамм Вас 1 егцергоб 9 озлив 8-10, Мполучают из исходного музейного штамма В.ргоб 191 озце 8-10, М 1 под действием нитрозометилмочевины.Для этого культуру Вастег 1 це ргоб 191 озце8-10, Мвыращивали в минимальной средеследующего состава: лимонная кислота-моногидрат 22 г; ИаО 0,04 г; Мп 304 4 Н 20 0,04 г;глюкоза 10,0; рН доводили до 7,0 йН 4 ОН,вода дистиллированная 1 л до оптическойплотности (ОП) 0,63 (ОП измеряли с помощью фотоэлектроколориметра ФЗК-М,светофильтр М 3). Культуру охлаждали в течение 1 ч, центрифугировали (5000 об 1 мин). 20 мин, разводили в свежей среде до ОГ 1 0,2,добавляли в среду нитрозометилмочевинудо 0,2 и бактерии инкубировали в течение15 мин при встряхивании на качалке приЗОС. Обработанную мутагеном суспензиювысевали на чашки Петри с индикаторнойсредой для выявления продуцентов эндонуклеазы. Индикаторная среда содержалаРНК (рибонуклеиновая кислота) 0,6 мг/мм итолуидиновый голубой (0,01 ), который ок рашивает среду с РНК в голубой цвет. Вокруг колоний бактерий, выделяющихэндонуклеазу, через 24 ч роста в результатегидролиэа РНК появлялись ореолы ярко-розового цвета, Отбирались колонии с.большими по сравнению с контролем зонамирибонуклеазной активности. Отобранныеварианты проверялись на эндонуклеазнуюактивность при выращивании на пептоннойсреде,При такой проверке был отобран мутантВ,ргоб 91 озцв 8-10, М, характеризующийся следующими свойствами,Морфология, Клетки - подвижные короткие палочки, одиночные, парные или вцепочках; грамотрицательные, Величина клеток односуточной культуры на рыбном питательном агаре ,РПА) 1-3 х 0,6-0,8 мкм.Культуральные признаки и физиологобиохимические свойства, При посеве на РПА колонии округлые, гладкие, диаметром 1,5 мм через 48 ч роста при+30 С). Профиль колоний выпуклый, Пигментная окраска колоний, характерная для вида В,ргобц 1 озце, отсутствует, Желдину разжижает, молоко свертывает, крахмал гидролизует слабо, клетчатку не разлагает, нитраты восстанавливаетдо нитритов. Штамм является ауксотрофом, Иэ глюкозы, сахарозы, мальтоэы,маннита образует кислоту, на лактозе кис. лоту не образует, Оптимальный режим роста: температура 28-30 С; рН среды 7-8.При лабораторной проверке эндонуклеазиой активности полученного штаммаВ,ргоб 91 озце 8-10, Ми сравнении ее с20 активностью известного штаммаВ,ргоб 191 озце 8-10, Мпри выращиваниина пептонной среде оказалось, чтоВ.ргоб 191 озце 8-10, Мк 24 ч роста образует по 15000 ед. фермента на 1 мл среды,25 иногда как известный штамм В.ргоб 9 овце8-10, Мобразует к 26 ч роста 3600 ед.эндонуклеазы,Активность фосфодиэстеразы у штаммаВ.ргоб 9 озцв 8-10, Мсоставляет 0,130 0,144, а активность фосфомоноэстеразы0,004-0,0160 от активности неспецифической эндонуклеаэы в период 24-31 ч роста.У известного штамма В.ргоб 19 озце 8-10,Мактивность фосфодизстеразы составля 35 ет 1,0 ф и активность фосфомонозстеразы. 0,13-0,360 ь от активности основного фермена,Выращивание штамма В.ргоб 191 озце8-10. Мдля проверки зндонуклеазной ак 40 тивности проводили при условиях, описанных для известного штамма В.ргоб 19 озце8-10, М - 1,Сравнительные данные по динамикенакопления эндонуклеазы предлагаемого45 штамма В,ргоб 191 озце 8-10, Ми известного штамма В.ргоб 191 озцв В - 10, М представлены в таблице,П ример, Штамм В.ргоб 191 озцв 8-10,Мвыращивали на скошенном рыбном пи 50 тательнам агаре в течение 24 ч. Клетки суспендировали в физиологическом растворедо плотности 1 х 11 кл(мл и инокулировалив количестве 1 х 10 кл/мл в 25 мл пептоннойсреды следующего состава: пептон 16 г;55 йаС 1 Б,О г; МяС 2 0,1 г; трис-буфер 6,05 г;Н 2 О дист, 1,0 л, рН 8,2-8,3. Инкубированиепроводили а колбах Зрленемейера обьемом100 мл со встряхиванием на качалках (160об/мин) при 30 С. Через определенные интервалы времени из культуральной среды928794 за 15 мин инкубации при 37 С, В качестве субстрата использовали и-нитрофенилфосфат натрия.За единицу актив асти фосфодиэстера эы принимали увеличение ОП раствора Сабис-нит рофенилфосфата на 0,1 ОП при 400 нм. за 15 мин инкубации при 37 С. Измерениепроводили на спектрофотометре Сфв кюветах 1 = 1 см .э10 56) Авторское свидетельство СССРМ 431214, кл, С 12 К 1/02, 1974. ула изобретени ШТАММ ВАСТЕВОМ РЙОО 16 ОЯОМ,х ЗЕВЙАТ А МАВСЕЯСЕИЗ) В, М-;2, - м ародукт неспецифической эндонуклеазы Ц Составитель Редактор О,Колоскова Техред М,Моргентал 3 ректо.р Офравцо каз 3239 Тираж ПоНПО "Поиск" Роспатента пис 13035,.Москва, Ж, Раушская наб иэводственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина,отбирали пробы по 5 мл, проводили испытание на внеклеточную эндонуклеаэную активность. Проверку превращения РНК или ДНК в олигонуклеотиды под действием культуральной жидкости проводили по появлению кислоторастворимого материала с адсорбцией при 260 нм.При измерении активности фосфомоноэстеразы эа единицу активности фосфомонозстеразы принимали увеличение оптической плотности на 0,1 ОП при 400 нм енится в музее культур промышленнкроорганизмов ВНИИгенетика"ПМ В,

Смотреть

Штамм bacterium prodigiosum (serratia marcescens) в-10, м-2 продуцент неспицифической эндонуклеазы