Способ количественного определения производных кумарина — SU 1255922 (original) (raw)
(19) 01 1 Н 33 48 ОМИТЕТ СССР ЕНИЙ И ОТНРЫТИЙГОСУДАРСТВЕННЫИ ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТ;ее ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ВТОРСНОМУ тарно-гигиитутзжухин,нко Изоб определеЦель изоПо предлривенно(71) Ленинградский санический медицинский инст(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ КУМАРИНА етение отноеится к способа я производных кумарина,етения - упрощение способааемому способу крысам внутодят производные кумарина,Затем берут пробу крови, Получают из нее плазму и добавляют к последней хлороформ. Готовят хроматограмму и помещают ее в систему бензол - ацетон в соотношейий 10:3. Хроматограмму сушат.и рассматривают ее в УФ-свете. Исследуемые соединения проявляются в виде ярко-фиолетовых пятен. Эти пятна вырезают и вещества зкоируют с пластины в колбу трижды через фильтр с помощью хлороформа, Объем доводят до метки хлороформом и перемешивают. Оптические плотности растворов измеряют на спектрофотометре при 335 и 330 нм соответственно. Ко- личественное содержание исследуемых Е соединений определяют по калибровочйым графикам. 2 табл., 1 ил,С:922 тины силуфол (2020 см), После улетучивация растворителя в местах на 5несения проб, хроматограмму помещают в предварительно (10-15 мин)цасьпценную камеру с системой растворителей бензол - ацетон в соотношении 10:3, Нижний край пластины погружают в систему растворителей примерно на 1 см так, чтобы уровеньрастворителя был ниже стартовой линии. Когда Фронт растворителя находится на расстоянии 0,5 см отверхнего края пластины, ее извлекаютиз камеры и отмечают линию фронта.Хроматограмму сушат в вытяжномпгкафу в течение 5-10 мин, затем обнаруживают пятна, рассматривая хроматограмму в УФ-свете, При этом исследуемые соединения проявляются в виде ярко-фиолетовых пятен со значениями Г. : = 0,27, а П=0,55; чтопозволяет идентифицировать их средид многочисленных природных соединений,извлекаемых иэ исследуемых биосред,После этого соответствующие пятнаобводят, вырезают и вепества злюируют с пластины в мерную колбу емкостью 25 мл через ск.;адчатый бумажный фильтр трижды по 5,0 и;. хлороформом, Объем доводят до метки хлороформом, перемешивают и оптическиеплотности растворов измеряют, например ца сцектрофотометре СФв кю 35вете с толщиной 1,0 см ца Фоне чис 1 того хлороформа при соответствующихдлинах волн (1 цля= 335 нм,а для П = 330 нм), Количественноесоцержание. исследуемых соедицений40определяют пс калибровочным графиам,Я .;:л,цредс гаглець результатыопределения концентрации декурсинола н плазме крови и ткаця крыс пос 45ле вцутривеццого иеоральцого введе0 Н О ция,В табл.определенияв плазме крвнутривенно1,0 мг/к ц з обре т е Фо рмул Способ производных кумари объектах путем зкс ким растнорителем,н биологичес ракции оргацичесныпаривания, раст 1 1255Изобретение относится к способу определения физиологически активных веществ кумаринового ряда, а именно декурсинола и обтусифола формулы со- ответственно в плазме крови и различных тканях,Декурсинол-З-окси-З, 4-дигидропирано, 6:6,7-кумарин . СНОт,пл, 180-181,5 С; 22 - 8,89(с 2,56;хлороформ) и обтусифол-иэопропилокси-б-метокси-бензодиоксано, 6:8,7 кумарин (ЕЕ) С Н,ьО, т.пл, 151152 С; 20 + 57,3 (с 6,51 хлороФорм)обладают выраженной противоаритмической активностью (4,5),Целью изобретения является разработка простого способа определенияконцентраций декурсинола и обтусифола в биосредах за счет подбора экстрагента, хроматографирования и спектрофотометрирования,На чертеженый график, п й способ.П р и м е р. Крысам внутривенно вводят декурсинол (1) и обтусифол (ЕЕ) в дозе 10,0 и 10 мг/кг, соответственно, и через 15, ЗО, 60, 120, 240, 360 и 420 миц отбирают пробы крони, почки, печень, легкие, мозг, сердце и н цих определяют содержания исследуемых веществ:1,5,0 мл крови помещают в пробирку и центрифугируют в течение 15- гО мин при ЗООО обмин, К ,О мл плазмы добавляют 6,0 мл хлороформа и встряхивают в течение 1 ч, затем содержимое переносят в делительную норонку емкостью 10,0 мл, После расслоения снимают нижний хлороФормный слой, Фильтруют через складчатый бумажный фильтр в пробирку и растворитель упаривают досуха. Остаток растворяют 1,0 мл хлороформа. 50 мкл полученного раствора с помощью микизображен калибровочоясняющий предлагаемь ропипетки наносят ца стартовую линию (1,5 см от нижнего края) плас 2 приведены результаты концентрации обтусифол ови и тканях крыс после го введения в дозе ичестненцого определени22 12559 4используют хлороформ, хроматографируют в системе растворителей бензол - ацетон в соотношении 10;3 с последующим спектрофотометрированием декурсинола и обтусифола при 335 и 330 нм соответственно.Таблица 1 Показатели за время в мин Пути введения Дозы, мг/кг Биообъекты 30 15 О в/в 0,93+0,04 0)83+0,02 Плазма 1,85+0, 05 1,60+0,05 3)60+0,035 2)80+0,05 в/в 20 Плазма 20 Перорально Плазма 1,51+0,03 0,93+002 в/в 10 Легкие 1,43+0)02 1,21+0,85 в/в 10 МиокардМозг 1,60+0) 04 1)40+0)02 в/в 10 Продолжение табл. 1 360 480 Показатели за время, в мин Виообъекты 120 240 60 0,18+0,01 0,72+0,03 0,53+0,02 0,31+0,009 Плазма 0,81+0)035 1, 01+0, 035 1,36+0,05Плазма 1,50+0,035 1,20+0,035 0,70+0,02 Плазма 0,47+0,035 О, 56+0, 02 0,85+0,02 ЛегкиеМиокардМозг 0,53+0,035 0,80+0,035 1,30+0,02е е.В Каждые представленные данные являются средним из 11 измерений. ворения осадка в органическом растворителе и хроматографирования, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью определения декурсинола, обтусифола и упрощения способа в качестве органического растворителя 0,23+0,03 0,25+0,02 0,45+0,02 О)28+0,02 0,35+0,02 0 10+0 02 0,10+0,02 0,06+0,021255922 Т аб л и ц а 2 ЮПоказатели за время в мин ЗО60 Г 120 ( 2 АО480660 Биообъек ты 0,70+ Плазма 0,03 Оэ 65+ 0)55+ Ов 42+ 0128+ 0,75+ Печень 0)009 Ою 009 Ов 02 0,02 0,02 0,02 0,70+ 0,65+ 058+ 0,40+ О, 16+ 0,30+ Почки 0,009 0,035 0,02 0,03 0,03 0,02 0,10+ 0 85+ Ою 77+. Оэ 70+ 047+ Оф 25+ Легкие 0,02 0,02 0,02 0,02 0,03 0,03+ 0,003 0,45+ 0,90+ 0,85+ 0,75+ 0,65+ Миокард 003 0,03 003 0,03 0,03 0,0 Каждые представленные данные являются средним из 10 измерений. С РЮ Р,Р 16 Д 14 1 б Ю гг/,юСо Те тель Л,ПокрьппкинМ.Ходанич Редактор А.Шандор РРектоР В,Синицка Заказ 4815 Тираж 778И Государственного комитета елям изобретений и открытий осква, Ж, Раушская наб д ПодписиСССР Н по 3035, Производственно-полиграфическое предприятие, г,ужгород, ул.Проектная 4 0,90+0,03 Ов 55+0,03 0,47+ 0,38+0,02 0,01 0,18+ 0,009 0,15+ 0,003 020+ О, 05+ 0,009 О, 05+ 0,005