Способ оценки токсичности стоматологических сплавов — SU 1309962 (original) (raw)
(19) 4 А 61 В 10 ЕНИ Иь: А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ стве, а вают воду для олич жую воду в том жеконце рабочего дняпитья в нерабочееконтрольной группе али емя ватель уток. Впьют обычатравку жиая с 10-х дуНачи ую водопроводную отныне ведут 9 сут суток животных каждои группы декапитируют, выделяют из печени митохондрии. Состав среды выделения, моль:сахароза О, 1, КС 1 0,1 и трис в буф2 10 . Состав среды инкубации, вкоторой исследуют дыхание митохондрий: 0,1 моль сахарозы, 0,1 моль КС 1,2 ммоль трис-буфера, 110моль фосфата, ротенон 0,5 мкг/мг белка, белок митохондрий 6-8 мг/мл среды инкубации, Степень сопряжения дыханияс фосфорилированием АТФ из АДФ иФ(ДК) рассчитывают по отношению скорости окисления янтарной кислоты бАДФ в среде инкубации к скорости деющ гото В еКиев ез кислоты после до окисления янтарнои бавления АДФ. Скор хондрий измеряют и скорости убыли кис графической ячейке 1 мин. Если скорос хондрий и(или) сте хания с фосфорилир группы ниже, а ДК контрольной группы сичным. 3 табл. сть дыхания мито олярографически п орода в поляров МО /мг белка в ь дыхания митоень сопряжения дьванием опьггной отличается от сплав считают тоГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ САНИЕ ИЗ(56) Голубничий А.П,Самотвепластмасса протакрил для прления базисов съемных протеАвтореф. дисс. канд. мед. на 1982, с. 6-9. 54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ТОКСИЧНОСТИ СТОМАТОЛОГИЧЕСКИХ СПЛАВОВ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, предназначено для оценки токсичности новых стоматологических сплавов. Цельизобретения - повышение точностиоценки токсичности стоматологического сплава. Для этого проводят эксперименты. Берут 3 группы подопьггныхживотных (крыс) по 10 особей с массой по 3000 г: 1 контрольную, 2 группу, принимавшую смыв со сплава КХС,3 группу, принимавшую смыв со сплава хромированной КХСВ поилку экспериментальных групп наливают водудля питья и опускают в нее изготовленный образец сплава. По истечении . еленного времени наливают свИзобретение относится к медицине, а именно стоматологии, и может быть использовано при оценке токсичности новых стоматологических сплавов.Цель изобретения - повьшение точности оценки токсичности стоматологического сплава путем моделирования естественных условий введения пробы.Способ осуществляется следующим образом. 10Эксперименты проводились на белых крысах линии Вистар одного возраста, Животных в количестве 30 особей для каждого параметра разбили на 3 группы по десять в каждой: 1) контрольную, 2) группу, принимавшей смыв со сплава КХС, 3) группу, принимавшей смыв со сплава хромированная КХС,Вес всех животных в каждой группе в среднем составлял 3000 г. Выпи изготовлены образцы сплавов (КХС и хромированная КХС) с соответствующей площадью поверхности. В поилку экспериментальных групп наливают определенное количество воды, достаточ 25 ное для питья в течение выбранного интервала времени, и опускают в нее изготовленный образец испытываемого сплава. По истечении этого интервала времени наливают свежую порцию воды в том же количестве. В конце рабочего дня наливают воду, достаточную для питья в нерабочее время суток:. В контрольной группе животные получают в качестве питья обычную водопровод ную воду.Затравку животных проводят в течение 9 сут. Все группы животных находятся на обычном пищевом режиме вивария.40Начиная с 10-х сут, животных каждой группы декапитируют, извлекают печень, вьделяют митохондрии (1). Состав среды вьделения, моль: сахароза О, 1, КС 1 О, 1, трис-буфер 2 10 . Сос тав среды инкубации, в которой исследуются дыхание митохондрий, следующий: О, 1 моль сахарозы, О, 1 моль КС 1, 2 ммоль трис-буфер, 1 10фосфата, ротенон 0,5 мкг/мг белка, бе лок митохондрий 6-8 мг/мл среды инкубации, Исходные растворы ЛДФ (5 к 10 моль), янтарной кислоты (5 10моль) среды выделения и инкубации необходимо довести с помощью трис-буфера до55 значений 7,5. Добавление ЛДФ и янтарной кислоты в инкубационную среду производят в ходе эксперимента до 1309962 2концентрации 0,210 моль АДФ и 510 моль янтарной кислоты.Определение белка проводят по Лоурии (2). Скорость дыхания митохондрийизмеряют полярографическим методоми оценивают по скорости убыли кисло -рода в полярографической ячейке вГ 10,/мг белка мин. Степень сопряжения дыхания с фасфорилированием АТФиз ЛДФ и Ф(ДК) рассчитывают по отношению скорости окисления янтарнойкислоты без ЛДФ в среде инкубации кскорости окисления янтарной кислотыпосле добавления ЛДФ (3),Полученные данные для опытной иконтрольной группы подвергают статистической обработке и оцениваютдостоверность отличий показаний опытной группы от контрольной.Если скорость дыхания митохондрий и (или) степень сопряжения дыхания с фосфорилированием опытнойгруппы достоверно ниже, а также если скорость дыхания ниже, а ДК неотличается от контрольной группы,сплав считают токсичным,Примеры осуществления способа.П р и м е р 1. Площадь поверхности образцов сплавов составляла90 мм (0,03 мм/г веса). Свежуюпорцию воды наливали в поилки черезкаждые 10 мин в количестве 3,3 мл.Как видно из табл. 1, у животныхпринимавших смывы с хромированнойКХС достоверно ниже дыхательныйконтроль по сравнению с животнымиконтрольной группы, что свидетельствует о токсичности хромированнойКХС. Степень сопряжения дыхания сфосфорилированием у животных, принимавших смывы с КХС достоверно выше, чем в контрольной группе, чтосвидетельствует об отсутствии токсичности этого сплава.П р и м е р 2. Площадь поверхности образцов сплавов составляла180 мм (0,06 мм/г веса) .Свежую пор.цию воды наливали в поилки через каждые 60 мин в количестве 20 мл.Как видно из табл. 2, у животных,принимавших смывы с хромированнойКХС, достоверно ниже дыхательныйконтроль по сравнению с контрольнойгруппой, что свидетельствует о токсичности сплава, У животных, принимавших смывы с КХС, достоверно выше по сравнению с контрольной группой как скорость окисления янтарнойСтепеньсопряжения Степеньсопряжения Скорость дыхания, Ю/мин х х 10 мг б,т 4,0+0,2 0,139+0,02Р с 0,02 Р0,6 2,20,2рс 0,02 О, 15210,010 3,1+0,3 О, 201+0,034Р0,2 кислоты, так и степень сопряжения, что свидетельствует о нетоксичности сплава.П р и м е р 3. Площадь поверхности образцов сплавов составляла 270 мм (0,09 мм /г веса) . Свежая порция воды наливалась в поилки через каждые 120 мин в количестве 40 мл. Как видно из табл. 3, у животных, 1 О принимавших смывы с хромированной КХС, достоверно ниже степень сопряжения фосфорилирования с окислением янтарной кислоты по сравнению с контрольной группой, что свидетельствует 15 о токсичности сплава.При .данных параметрах способа, как и при двух предыдущих, у животных, принимавших смывы с КХС, достоверно выше по сравнению с контрольной группой скорость окисления янтарной кислоты и степень сопряжения, что свидетельствует о нетоксичности сплава.Оба эти сплава, как и другие из неблагородных металлов, применяются 25 в стоматологии на протяжении многих лет при протезировании.Существующие методы апробации, которыми они были испытаны на токсичность, прежде чем разрешены для ис пользования в медицинских целях, не показали отрицательных результатов.Однако многие пациенты, протезированные неблагородными металлами, жалуются на неприятные ощущения во рту, в желудочно-кишечном тракте.Известные методы испытания на токсичность стоматологических сплавов не столь чувствительны и информативны по сравнению с предлагаемым, так как предлагаемый способ указал на неблагоприятные воздействия хромированной КХС на процессы метаболизма клетки.Время, необходимое для проведения исследований по предлагаемому способу, составляет 15-20 дней, что в 4-14 .раз меньше по сравнению с существующими. Формула изобретения Способ оценки токсичности стоматологических сплавов путем введения пробы в организм животного и дальнейшей оценки скорости дыхания и степени сопряжения дыхания с фосфорилированием в митохондриях печени животного, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа за счет моделирования естественных условий введения пробы, животным в течение не менее 10 дней перорально вво. дят воду, в которую помещен испытуемый сплав, при этом поверхность сплава составляет 0,03-0,09 ми из расчета на 1 г массы животного, а смену воды осуществляют каждые 10-20 мин. Группа, принимавшая смыв схромиров КХС1309962 Та блица 2 Контрольная группа Группа, принимавшаясмыв с КХС Группа, принимавшая смыв схромиров. КХС Степеньсопряжения Степеньсопряжения Степеньсопряжения О, 171 ф0,012 3,9+О, 2Р с 0,05 2,310 2Р с 0,05 Таблица 3 Контрольная группа Группа, принимавшаясмыв с КХС Группа, принимавшая смыв схромиров. КХС Степеньсопряжения Степеньсопряжения Степеньсопряжения 4,1+0,1Р с 002 О, 167+0013 2,1+01 Р с 001 3,3+0,2 Составитель Л.Артюшина Редактор А,Долинич Техред А.Кравчук Корректор Л;ПилипенкоЗаказ 1816/2 Тираж 596 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий