3-аминопропилгликозиды дисахаридов в качестве лигандов иммуносорбентов для связывания группоспецифических антител анти-а и анти-в — SU 1616924 (original) (raw)
(1) Всесоюзный наский институт биот(53) 547.917 (088.856) Патент США Ф 4кл, 536-18, 1980.Патент США В 4231980.Патент США Р 41319 9. К 48учно-исследовательхнол огнии Н.В.Бовин 95174,473 ь кл. 424-11,6-1 Изобретениесахаридов, обл активностью, п группоспецифичминант групп кр 3-аминопропилг общей формулы госудмствеинцй комитетПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМяфи Гннт сссР(54) 3-АИИНОПРОПИЛГЛИКОЗИДЫ ДИСАХАРИДОВ В КАЧЕСТВЕ ЛИГАНДОВ ИММУНОСОРБЕНТОВ ДЛЯ СВЯЗЫВАНИЯ ГРУППОСПЕЦИФИЧЕСКК АНТИТЕЛ АНТИ-А и АНТИ-В(57) Изобретение касается замещенныхгликозидов дисахаридов, в частности(3-аминопропил)-3-0-(2-ацетамидодезокси-ф;0-галактопиранозил)Ргалактопиранозида или (3-аминопропил) -3-0-(Ы-галактопиранозил) -Гзгалактопиранозида в качестве лигандов иммуносорбентов для связываниягрупп специфических антител анти-А ианти-В, и может быть использовано в относится к химии диадающнх биологической роявляющих свойства еских антигенных детерови А и В, а именно к ликозидам дисахаридов биохимии. Цель изобретения - создание новых, более доступных и удобных для иммобилизации олигосахаридных лигандов. Синтез ведут, например, реакцией 1, 2-ди-О-ацетил,4,6-0-бензил- В-галактопиранозы с 3-трифторацетамидопропанолом в среде СНС 1 в присутствии эфирата ВР при ОоС с последующим выделением промежуточного продукта, его гидргенолизом на 10%-номо Рс/С при 20 С, упариванием отфильтрованного продукта, растворением в ацетонитриле и добавлением диметилацеталя бензальдегида, 4-толуопсульфокислоты и затем пиридина. Выделенный хроматографически продукт растворяют в СН С 1, добавляют молекулярные сита, карбонат серебра и перхлорат серебра и затем 2-азидо,4,6-три-О- ацетил-дезокси0-галактопирано- С зилхлорид в растворе СН С 1 з, Выделенный хроматографически дисахарид раст- Е воряют в уксусной кислоте, выдерживают 2 ч при 70 С, упаривают, добавляют уксусный ангидрид и проводят гидрогенолиз на 5%-ном Рй/С в среде метанола. Выделяют целевой продукт также хроматографически. Сорбция на уровне известной. 1 табл. СН ОБ СН 2 ОН но-о осн 2)янг цОН,(1 Н, 3 = 8 Гц, Н 1), 5,2 д (1 Й,1 4 Гц,Н 1 ).Синтезированные дисахариды 1 а и 16используются для получения иммуносороентов для сорбции соответствующихгруппоспецифических антител анти-А ианти-В из сыворотки крови человека.П р и м е р 3. Получение иммуносорбента.Соединения 1 а или 16 растворяют в2-3 мл ИЫ-диметилформамида прибавляют 1 г макропористого стекла (МПС), активированного поли(п-нитрофенилакрилатом), оставляют на 1 сут, периодически перемешивая суспензию, Полноту привязки контролируют ТСХ по исчезновению нингидрин-положительного пятна лигандов 1 а или 16. Полученный сорбент промывают на Фильтре ИИ-диметилформамидом, эфир ом, сушат.Сорбенты, содержащие ,5 и .15 мкмоль лиганда на 1 г МПС, получают аналогичноИзучение сорбции.50 мг сорбента промывают водой, Фосфатно-солевым буферным раствором, инкубируют при 4 С с 0,5 мп сыворотоки крови доноров исследуемой группыкрови (группы крови А - дл.". сорбента, содержащего лиганд 1 а, В - для сорбента, содержащего лиганд 1 б) в течение 3 ч. Титр антител определяют дои после сорбции методом солевой агглютинации.Результаты приведены в таблице.Таким образом, в качестве лигандов иммуносорбентов для связыванияанти-А и анти-В антител предложеныспейсерированные дисахариды 1 а и 16,сорбционная способность полученныхна их основе сорбентов не уступаеттаковой сорбентов, включающих трисахаридный лиганд .Синтез новых дисахаридных лигандов значительно проще и короче синтеза трисахаридных лигандов.Свободная аминогруппа в спейсерной части предлагаемых лигандов 1 а и 1 б позволяет просто и количественно иммобилизовать их на активированном поли(п-нитрофенилакрилатом) твердомносителе. 16169-В-галактопиранозида (16),5300 мг (0,65 ммоль) соединения (1 Ч)растворяют в 30 мп бензола прибавляют 3 г молекулярных сит 4 А и 1,8 г(7 ммоль) цианида ртути, затем приперемешивании за 20 мин раствор620 мг (1 ммоль) 2,3,4,б-тетрабензил-К-галактопиранозилбромида в5 мп бензола . Через 72 ч разбавляют200 мл хлороформа, фильтруют, промывают, после КХ выделяют 420 мг (60%)дисахарида (71) т.пл. 92-93 ОС (ацетон - эфир - гексан) .ПМР (СПС 1): 1,85 м (2 Н, ССНС)2,00 с (ЗН, Ас), 4,40 д (1 Н, 38 Гц Н 1) 511 д (1 Н Т35 ГцН) 5,28 с (1 Н, РЬ СН); 7,2-7,4 м(25 Н, 5 РЬ),Найдено, 7.: С 65,50, Н 5,90,"М 1,53. 25С 54 НЯМ ОВычислено, 7: С 65,72, Н 5,93ф 1,42.200 мг (0,2 ммоль) дисахарида (71)растворяют в 10 мл метанола и добавляют 0,1 мл 1 М раствора метилатанатрия в метаноле. После снятия ацетильных групп (контроль по ТСХ) нейтрализуют смолой 12-120 (Н+), фильтруют и упаривают, Остаток растворяют в 355 мл 607-ной уксусной кислоты и выдерживают при 70-75 ОС в течение 5 ч,упаривают досуха, выделяют КХ тетра 0-бензильное производное, котороерастворяют в 20 мл метанола и прибавляют 80 мг 107 Рй/С гидрогенолизпроводят 24 ч при 20 С.Катализатор отфильтровывают, раствор упаривают и лиофилизуют из воды,получают 60 мг (607) аморфного дисахарида с защищенной аминопропильнойгруппой (ЧЕ 1),ПМР (00); 1,90 м (2 Н, ССНС),.4,45 д (1 Н,Х 1,2 8 Гц, Н), 5,22 д(1 Н, .т,4 Гц, Н). 50Полученный дисахарид (20 г) растворяют вб мл смеси этанол - вода1:1, прибавляют смолу в ОН-форме иперемешивают в течение 24 ч. Растворфильтруют, упаривают, лиофилизуют изводы, выход свободного дисахарида 1015,4 мг (100%),КГ 0,2 (ТСХ, этанол:трет-бутанод:сн,он н,онБО ооон,)ян,5 1616924 рб Снижение титра, на оро во Группа на крови сы- воротки чес нда МПС о сорбции после. сорбции мол 27,515 пвогЬ В Ф В:64 :64 :64 :64 Ь В 1:64 1:64 1:64 1 64 1:1 1:1 1:8 А А А ь 5 Ж27,515 БупвогЬ 2 ВупяотЬ ААфУф йф 6 8:2 :2 А 3 СпеаЬошей (Канада) водит. Из данных прод ТТб, А - дисахаА и ЯупвютЬо количествеколичество лбент, содерж В - коммерческилиганда на 1 гганда на 1 г, МПщий в качестве бразцы фирмыфирма не пр-6 мкмол/г .аида дисахар ф ЗупаоДанных тотипа В с в оставитель Н.Нарышковаехред М.Моргентал Корректор М.Самборская едактор Н.Кишгулине Заказ 4094ВНИИПИ Государственного113035,Тираж 29 комитета Москва, Ж одпис н изобретениям 5, Раушская н открытиям прн ГКНТ СССР д. 4/5ский комбинат "Патент , г.ужгоро рои ственно-издате агарина,101 СоУ где К ННсаСНЭ, Он,в качестве лигандов иммуносорбентов для связывания группоспецифических антител анти-А и анти-В. 1: 128 1: 128 1:128 1:128 1:64 1:64 1:64 1;64