Способ получения производного пиридо2, 3 пиримидина, или его ss-, rs-изомеров, или смеси диастереомеров, или фармацевтически приемлемых солей с щелочными металлами (original) (raw)
( 5в 5 мл метанолам содержащего 3 мп1 н. водного раствора гидроокиси натрия, перемешивают при комнатной температуре в течение /2 ч. Добавляя 2 ьпуксусной кислоты с последующим центрифугированием, можно получить 0,125 г(86 ) предлагаемого соединения, названного 5,10-дидеаэафолиевой кислотой, в виде микрокристаллическогобесцветного твердого вещества, т.пл.свыше 200 С.ЯМР /ТФА-д 4) О, ррш: 2,3-2 б/,(с., 1 И),П р и м е р 2. М"12-12-амино-окси,6,7,8-тетрагидропиридо 42,3-Й -пиримидин-б-ил)этил)бенэовл)-1.-глутаминовая кислота. 25Пнэтиловмй эбир М-12-(2-ацетамндо-окси,6, /, 8-тетрагидропиридо 2, 3-43 пиримидин-б-ил) этил) бе напил)-Ь-глутаминовой кислоты гидролизуютпо примеру 1. 30Получают предлагаемое соединение,названное 5,10-дидеаза,6,/,8-тетрагидрофолиевой кислотой. Выход 8/Х,т.пл, свыше 250 С,0ЯИР (ТФА) 3, ррп 1: 1,7-3,9 (м.,1 ЗН); 5,0-5,25 (м., 1 Н); /,45 е 7,85(АВ кв., 4 Н, Х = 9 Гц).П р и м е р 3. М-1-12-амино-окси,6,7,8-тетрагндропиридо 12 3-сЛ пиримиднн-ил) проп-ж 1 бенМ и ( 1 40зоил -Ь-глутаминовая кислота.Гомогенному раствору 1/,5 мг диэтилового эбира М-1-б 2-ацетамидо-окси,6,7,8-тетрагидропирцдо 2,3-С 1 пиримидин-б-и 32)проп-ил бензоил -Ь-глутаминовой кислоты в 2 мпметанолового раствора гидроокиси натрия дают отстояться при комнатнойтемпературе /2 ч. Большую часть растворителя затем отгоняют при пониженном давлении. Смесь разбавляют водойи подкисляют уксусной кислотой. Осадок собирают Фильтрацией, промываютводой и сушат при пониженномдавлении-5,6, /, 8-тетрагидропиридо 2, 3-44)пиримидин-б-ил этил 3 бенэоил -Е-глутаМИНОВОй КИСЛОТЫ оСмесь 0,59 г диэтилового эфираМ-(2-пивалоиламино-гндроксипиридо 2, 3-б 1пиримидин-илэтинилбензоил-Ь-глутаминовой кислоты и1,5 г 5 . палладия на угле в 30 млтрифторуксусной кислоты гидрируютпри 3,/ ат и комнатной температурев течение 24 ч. Реакционную смесьразбавляют хлористым метиленом иФильтруют через целит. Растворительудаляют при пониженном давлении.Остаток вновь растворяют в хлористомметилене, экстрагируют насыщеннымраствором бикарбоната натрия и сушатнад безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток хроматографируют насиликагеле использованием в качествеэлюента смеси 4 Х метанола в хлористомметилене.После испарения элюата получают0,6 г (100 ) диэтилового эфираМ-2-бпивалоиламино-гндрокси,6,/,8-тетрагидропир о 2,3"Йпирииидин-ил)этно)бенэоил -Е-глутаминовой кислоты в виде бе ого вещества,т.пл. ,3 250 С.ЯИР (СПС 13, 300 МГц) б, ррш: 1,22цо-гилрок(и/8-тетрагидропирилп Ь 2,)-бпмриплпн-б-пл) этил)бензоил-глутаминовой кислоты и 3 мл1 н. раствора гилроксида натрия в50 мл метанола, перемешивают /О чпри комнатной температуре, Смесь цодкисляют уксусной кислотой, Образовавшийся осадок отфильтровывают и 5,6,7,8-тетрагидропиридо)23-611 пиримидин-ил) -этил бензоил -1,-глутаминовой кислоты с указанными своиствами,П р и м е р 6 Смесь 1 г диэтилоаого эбира М-(4-Ь 2-(2-ацетамидо-гтщро си, 6, /, 8-тетра гидропиридо2,3-8)ппримиднн-б-ил)этил)-бензоил) -(+) - 1 О"камфорсульфоновой кислотыв 50 мл безводного этанола кипятят4 ч Реакционную смесь охлаждают докомнатной температуры и оставляют цаночь, Образовавп)ееся белое веществоотделяют Фильтрованием,Шестикратной дробной кристаллизацией нз этанола получают 3/ мг диастереомера В т (+)-1 О-камфорсульфонатадиэтилового эфира )4)-4-2-(2-ацетамидо-гидрокси,6, /,8-тетрагидропи"ридо 2,3-длиримидиц-ил) -этил )бензоил -1.-глутаминовой кислоты, т.пл.223- 5 Спф)йднм -20,02Из маточного раствора испарениемудаляют растворителье Полученноетвердое вещество дважды перекристаллиэовывают из этанола,Получают диастереомер В й (+)-10 камфорсульфоната диэтилового эфирам-тн-ь 2-(2-ацетамидо-гидрокси,6,/,8-тетрагидропиридо 23-й)пиримидин-ип) этил)бензоил)-Ь-глутаминовой кислоты,Ь 86)нм +29,35П р и м е р /. Диастереомер ВМ-т 4-Ь 2-(2-амина-гидрокси, 6, 7, 8-тетрагидропиридо 2,3-(тпиоимидин-ил)этнл)бензоил 2-Ь-Рлутаминпной кислоты.Раствор диастереомера В д (+)-10 камфорсульфоната диэтилового эфираМ-т 4-Ь .- (2-ацетамидо-гидрокси, 6, /, 8-тетрагидропиридо 2 3-йпиримидин-ил) э тил бе из оил-1 -глутаминовой кислоты в 50 мл метанола содержащего 3 мл 1 н, раствора гидроксида,промывают метанолом, После высушивания при пониженном давлении получают 0,2 г (507)М-(4-Ь 2-(2-анино-гидроксиг .) )О 15 2025 ЗО 35 40 45 50 55 перемешивают /2 ч прц к(тмт(атцой температуре с образованием цатрц 4 т)ойсоли дпастереомера и 6-(4-(2-(2-амцно-гиллок си, 6, /, 8-те тра гилропцридо 2), З-ь (тиримидин-ил) атил бе)(- зоил -1 -глутаминовой кислоты,Добавляя 2 мл уксусной кислоты споследующим центрифугированием, получают свободную кислоту, т, пл.224-22/ С (раэлс).оЖ) у)тщ = -21,0581 (с 0,636,О,1 ц, 1аОН)(дс 2 Н, ,Т = 9 Гц).Оптическая чистота м 9/%,П р и м е р 8, Диастереомер А11-14-2-(2-амицо-гидрокси/,8-тетрагидропиридо)23-дпиримидин-ил) этил) бензоил)-Ь-гпутйминопойкислоты.По методике примера /, но с использованием диастереомера А д (+)-10 камфорсульфоната диэтилового эфира1(1-4- 2-(2-ацетамидо-гидрокси,6, l,8-тетрагидропиридо 2,3-611 пирнмидин-б-ил)этил)бензоил).Ь-глутаминовой кислоты, вместо диастереомераВ получают диастереомер А 14)-4- 2"(2-амино-гидрокси,6,/,8-тетрагидропиридо 2,3-611 пиримидин-б-ил)этил бензоил)-1 -глутамицовой кислоты,т.пл, 253-255 С (раэл.).(рН примерно 5) суспецдируют 10 гХ-2-(2-амино-гидрс)кси,6,7,8-тетрагидропиридо)23-дпиримидин-б-ил)этил)бенэоил,-глутаминовойкислоты (диастереомер И). К полученной суспецзии по каплям прн перемешивании прибавляют 8 мп 5 н. воднораствора гидроксида натрия и затем1 н, раствор гидроксида натрия в воде до момента перехода твердого вещества в раствор (примерно 3,5 мл),рН полученного раствора около 8. Затем добавляют 50 мл метанола. Раствор оставляют на ночь в холодильнике.Образовавшийся осадок отделяют фильтрованием, промывают небольшим количеством холодного металла. После высушивания при комнатной температурев вакууме получают динатриевую сольдиастереомера В И-2-(2-амино-гидрокси,6,/,8-тетрагидоопиридо 2,3-Й 1 пиримидин-б-ил)этилбензоил.-глутаминовой кислоты (8,1 г).ИК (КВг), см : 3440-3120; 1640;1620; 1600; 1548; 1504; 1402; 1368;1310 смЯМР (00, 300 МГц) 8 ррах: 7.76 20(м 1 Н)р 1,68 (мо, ЗН),Вычислено, 7: С 46,58; Н 5,4;Н 12,93.С 1 НИ 0 у 11 а 230Найдено, /: С 45,98; Н 5,2;И 12,4. Проведены биологические испытанияполученных соединений.35Значения ИК О, определенные наполноклеточных линиях клеток лейке"мии человека (ССКГ-СЕМ), для диастереомера Л Б,Б-конфигурации и диастереомера В Й,Б-конфигурации равны 402,6 д 10 фи 3,4 10 мкг/мл соответственно,В подмьппечную область мьппей линииС 5/В 1 /С подкожно имплантируют клеткимелономы В. Для испытания каждой 45дозировки используют по десять мьппей.Ежедневно мышам внутрибрюшинно вводятМ-2-(2-амино-гидрокси,6,7,8-тетрагидропиридо 2, 3-с 1 пиримидин-б-ил)атилбензели-Ь-глутаиинонуи50кислоту, диастереомер А и диастереомер В. Через десять дней определяютмассу опухоли контрольных зверьков,получивших только раэбавителЬ, и дляподсчета процента ингибирования сравнивают ее с массой опухоли зверьков,получивших испытуемое соединение.Полученные результаты приведеныв табл. 1. 10 женских особей мышей линии ГЗН заражают внутрнбрюшинно в подмьппечную область клетками лимфосаркомы 6 СЗНЕЭ. Затем в течение 8 дней им вводят испытуемое соединение в эмульфоре 1 Р (0,5 мл). Контрольные зверьки подвергаются аналогичной обработке, но не получают испытуемого соединения (см. табл. 2).Мьппам линии СЗН имплантируют клетки аденокарциномы СЭН молочной железы, после чего им вводят испытуемое соединение, контрольные зверьки получают только раэбавитель (см. табл. 3)Мьппам линии СЗН имплантируют клетки миэломы Х 5563 клеток плазмы, после чего внутрибрюшинно (0,6 мл/день) в эмульгаторе ежедневно в течение 10 дней им вводят испытуемое соединение, контрольные зверьки получают только раэбавитель (см. табл, 4),В обычных моделях указанные опухолевые клетки имплантируют подкожно в подмьппечную область мышей. После внутрибрюшинного ведения измеряют длину и ширину опухоли у животных, получающих испытуемое соединение, и контрольной опухоли (только физиологический раствор), чтобы вывести процент ингибирования(табл. 5).Проведенные испытания показали, что производные пиридо 2,3-йпирими- дина, полученные по предлагаемому способу, эффективны против различных опухолей и ингибируют в отличие от метотрексата действия трансформилаэы глицинамидного рибонуклеотида (САР- трансформиланд) в ходе де почо биосинтеза пурина. Такими же свойствами обладает Ма-соль этого соединения.Кроме того, производные пиридо- (2,3-Й)пиримидина, полученные соглас" но предлагаемому способу, относятся к категории малотоксичных соединений. Формула изобретенияСпособ получения производного пиридо 2, 3-сГ пиримидина формулыН 2НСОХН СНСН 2 СН 2 СООН е1СООН(2 мл /де нь )течение 5 лнеГ. 5/5 6/6 6/6 О/6 0,62 1,25 2,50 5,00 Т а б л иц а Ингибирование, 7 Вьокнвание,дни Доза, мг/кг 10/107/1010/108/107/9О/10 3,66,2512,52550100 Таблица 5 Доза, мг/кг Дни лечении Опухолевая система 25 50 100 200 100 100 91 100 100 100 99 98 ВЛимфосаркома 6 СЗНГЛ Ингибиро- Выживание,ванне, % дни Непрерывно вливают 1% НаНСО ежедневно в1676449 Продолжение табл.5 Опухолевая система Дни лечення 5 0 200 Аденокарцинома молоч"ной железы СЗН 100 10 86 100 100 Легочная карциномальюиса 100 10 58 10 80 12 10 90 Май 18 оп легкое Плазмацитоклеточнаямиелома Х 5563 100 10 100 100 100 Ф5-дневная задержка.фТоксичная доза. Составитель В.ВолковаТехред М.Дидык Корректор Э.Лончкова Редактор М.Янкович Заказ 3016 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101 Яичниковая карциномаМ г Доза, мг/кг Т