Способ получения оптически активных — SU 242777 (original) (raw)

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕНТУ Союз Советских Социалистических Республиквисимый от патентаЗаявлено 13 ЛХ.1966 ( 110138 Приоритет конвенционный по п, 2 14.1 Х.196приоритет по п. 1 13.1 Х.1966Опубликовано 25 Л 7,1969, Бюллетень15 С 07 с Комитет по делам аооретений н открытийпри Совете Министре СССРа опубликования описания 17.1 Х.196 Авторыизсбретени ИностранцыКизлих, Ханс-Йоахим Кох, Хоберхард Шредер и Роземаритивная Республика Германии)Иностранная фирмаШеринг АГивная Республика Германии) моль,Гибиан, Клаусменс Руфер,(Федер аи сси аявител Феде СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОПТИЧЕСКИ АКТИВНЫХ АНТИПОДОВ РЯДА СТЕРОИДОВИзобр оптическ Пред стероидн общей фуглеили ьную анной нный рода, ещен кар- кцио часть также огруп- раще- выдетение относится к области получения активных антиподов ряда стероидов. агаемый способ состоит в том, что е оптическое неактивное соединение рмулы: где С обозначает оптически неактивный родный атом, Я - группу СНеС Нов в СНз в , Х - водород, галоид, карбоксил группу в свободной или этерифициров форме или насыщенный или ненасыще алкильный радикал с 1 - 4 атомами угле который дополнительно может быть зав галоидом или гидроксильной амино- или боксильной группой в свободной или фун нально измененной форме, т в остальн секостероида, включая кольца А и В, а его функциональные производные по кет пам, подвергают ферментативному прев нию, например, с микроорганизмами или ленными из них ферментами. П р и м е р 1. Получение 3-метокси(14)- секо, 3, 5 (10), 9 (11)-экстратетраена-ол-она (13 р-метила-ОН-ЯМ, или 13 а-метил-ОН-ЯМт) ферментацией грибками.а) Восстановление 3-метокси(14)-секо 1, 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраен, 17-диона (ЬМ) посредством Азрегр 11 цз ос 1 тгасецз (СВ 5 - Даме).Ферментация идет с помощью грибковых 10 штаммов в колбах для встряхивания,Колбу Эрленмейера емкостью 2 л, наполненную 500 смз питательного раствора из следующих веществ, %: 3 глюкозы; 1 жидкости для замочки кукурузы; 0,2 1 чаИОз, 0,1 КНзР 04;15 0,05 Мд 504, 0,05 КС 1; 0,002 Ре 504; 0,2КНР 04 стерелизуют нагреванием в течение 30 мин до 120 С и после охлаждения раствор засевают суспензией Азрегр 11 цз ос 1 тгасецз (СВЯ), которая получается промыванием 20 культуры косого агара физиологическим раствором поваренной соли.Взбалтывают предварительно культуру в течение 2 дней при 30 С (число колебаний 145 об/мин), перезасевают затем по 50 смз культу ры в 10 колб для ферментации емкостью по2 л с 450 смз такого же питательного раствора, взбалтывают их в течение 16 час при 30 С, добавляют в каждую колбу в стерильных условиях по 5 смз 2%-ного этанолового раствора 30 ЯМ и проводят ферментацию в течение 24 час, 2427775 10 15 20 25 40 45 50 55 60 65 Ход ферментации контролируют с помощью хроматографиями в тонком слое. Для этого на пластинки из кизельгеля по Шталю наносят метилизобутилкетоновые экстракты проб из бродильного чана; пластины с рабочей поверхностью свыше 15 см проявляют в системе хлороформа - ацетона 9: 1, опрыскивают реактивом из 1 смз концентрированной Н 2804 и 20 смз 95%-ного этанола, сушат в течение 10 мин при 140 С и рассматривают в длинноволновом ультрафиолетовом свете.ЯМ13 р-метила-ОН-ЬМ, и 17 а-ОН-ЯМ 1 13 р-метилр-ОН-ЬМ 1 и 17 р-ОН-ЯМ,К 0,92, окраска: красновато-желтаяКв 0,72, окраска: красновато-желтаяКв 0,63, окраска: темноватожелтаяСоединенные исходные смеси ферментации экстрагируют дважды 2500 смз метилизобутилкетона и экстракт при температуре ванны 45 С сгущают в вакууме приблизительно до 5 смз, Концентрат очищают хроматографией препарата в тонком слое с применением кизельгеля ЙГ 2;4 в качестве абсорбента и бензол-эфира уксусной кислоты 9:1 в качестве рабочей среды.Видимую в коротковолновом ультрафиолетовом свете (основную) зону с величиной К в около 0,4 отделяют, извлекают с помощью 100 смз хлористого метилена при комнатной температуре, элюат сгущают при температуре ванны 25 С и остаток перекристаллизовывают из 10 ч, диизопропилового эфира.Получают 13 р-метила-ОН-БМ 1; т. пл.101/102 - 103,5 С, аро + 47,8 (диоксан, с = 1); 13 р-метила-ОН-ЗМ, может получаться при таких же экспериментальных условиях ферментацией с помощью Азрегр 11 цз п 11 дег (АТСС 9142),б) Восстановление ЯМ посредством КЫкорцз шдпсацз (АТСС 9142),13 р-метила-ОН-ЯМ, можно получить при экспериментальных условиях, описанных в примере 1 (а), ферментацией с помощью КЬ 1 зорцз п 1 дг 1 сацз (АТСС 6227 Ь).в) Восстановление ЯМ посредством Реп 1 с 1111- шп по 1 а 1 цгп (ИКК 1. 2284).При экспериментальных условиях, описанных в примере 1(а) из ЯМ ферментацией посредством Реп 1 с 1111 цгп по 1 а 1 цт (ИКК 1. 1982) можно получить 13-метила-ОН-ЯМ.П р и м е р 2. Получение 13 р-метила-ОНЯМ, ферментацией посредством дрожжей.а) Восстановление ЯМ посредством Яассйагогпусез сегеиз 1 ас (ИКК 1.-У) .Ферментация идет с помощью дрожжей в колбах для встряхивания.Колбу Эрленмейера емкостью 2 л, наполненную 500 смз питательного раствора из 5% глюкозы и 2% жидкости для замочки кукурузы,4стерилизуют и затем засевают суспензией Яа. сйагогп 1 сез сегеиз 1 ас (ИКК 1.-1-2250), которая получается промыванием культуры косого агара физиологическим раствором поваренной соли. Взбалтывают предварительную культуру в течение суток при 30 С (число колебаний 145 обмин), перезасевают по 50 смз культуры в 4 колбы для ферментации емкостью 2 л, наполненные каждая 450 см такого же питательного раствора, взбалтывают их в течение 6 час при 30 С, добавляют в каждую колбу 5 смз 2%-ного этанолового раствора ЯМ и проводят ферментацию в течение 20 час.Суспензии для ферментаьии приготовляют, как описано в примере 1(а).Получают 13 р-метила-ОН-ЯМт. пл.101/102 - 104 С; а,", + 46,2 (диоксан, с = 1) в 264 = 21000.б) Восстановление ЯМ посредством Засс 11 агогпусез сегеч 1 з 1 ас (ИСУС 1021).При описанных в примере 2(а) условиях из 5 М ферментацией посредством 5 асс 11 агогпусез сегеиз 1 ас (ИСУС 1021) получают 13 р-метил 14 а-ОН-ЗМ,.в) Восстановление ЗМ посредством ЗассЬагогпусез саг 1 зЬегдепз 1 з (СВЗ 1505). При описанных в примере 2(а) условиях из ЯМ ферментацией посредством Яасспагогпусез саг 1 зЬегдепз 1 з (СВ 8 1505) получают 13 р-метил 14 а-ОН-ЯМ 1.г) Восстановление 5 М посредством ЗассЬаготусез раз 1 опапцз (Институт ферментной промышленности, Берлин). При условиях, описанных в примере 2(а), но со временем ферментации 40 час, из ЯМ ферментацией посредством Яассйагогпусез раз 1 опапцз может быть получен 13 Д-метилаГ 1 р имер 3. Получение 13 р-метила-ОНЯМ, ферментацией посредством бактерий,а) Восстановление ЗМ посредством Вас 111 цз ез(ег 111 сапз (ВВА - Берлин) .Ферментация идет посредством бактерий в колбах для встряхивания. Колбу Эрленмейера емкостью 2 л с 500 смз питательного раствора из следующих веществ, %: 0,5 глюкозы, 0,2 жидкости для замочки кукурузы; 0,1 экстракта дрожжей; 0,1 пептона (Мерк) стерилизуют и затем засевают суспензией Вас 111 цз ез 1 егйсапз, которую получают промыванием культуры косого агара физиологическим раствором поваренной соли. Взбалтывают предварительную культуру в течение суток при 30 С (число колебаний 145 обмин), переносят по 50 смз культуры в 4 колбы для ферментации емкостью 2 л, каждая из которых наполнена 450 смз такого же питательного раствора, взбалтывают эти колбы 4 час при 30 С, добавляют в каждую колбу 5 смз 2%-ного этанолового раствора ЯМ и проводят ферментацию еще 20 час.Суспензию для ферментации приготовляют, как описано в примере 1(а),50 55 60 65 Получают 13 р-метила-ОН-ЯМ т. пл,101/102 - 104 С.б) Восстановление ЯМ посредством Вас 111 цз1 а 1 егозрогцз (АТСС 4517) .При описанных в примере 3(а) экспериментальных условиях, но со временем ферментации 44 час, из ЯМ ферментацией посредствомВас 111 цз 1 а 1 егозрогцз получают 13 р-метилаОНМ,.в) Восстановление ЯМ посредством Вгеу 1 Ьас 1 епцпч уйагцгпец (АТСС 10234) .При описанных в примере 3(а) условиях ЯМферментацией посредством Вгеу 1 Ьас 1 егшгп у 11 агцгпец восстанавливается в 13 р-метилкОНМ,.г) Восстановление ЯМ посредством Ргор 1 оп 1 Ьас 1 егшт агаЬ 1 позшп (АТСС 4965).Из 8 М при описанных в примере 3(а) условиях ферментацией посредством Ргор 1 оп 1 Ьас 1 егшгп агаЬпозцгп получают 13 р-метила-ОНд) Восстановление ЯМ посредством Рго 1 а 1 п 1 поЬас 1 ег аЬойауиз (АТСС 8458),При указанных в примере 3(б) условиях изЗМ ферментацией посредством Рго 1 агп 1 поЬас 1 егн 1 Ьойауцз получают 13 р-метили-ОН-ЯМ 1.е) Восстановление ЯМ посредством Мезеп 1 епсцз зрес (Институт Роберта Коха, Берлин).Из ЯМ при. указанных в примере 3(а) условиях ферментацией посредством Мезеп 1 епсцззрес. получают 13 р-метила-ОН-ЯМьж) Восстановление ЯМ посредством Мусор 1 апа Й 1 погрЬа (АТСС 4279).При указанных в примере 3(б) условиях изЯМ ферментацией посредством Мусор 1 апа ЙгпогрЬа получают 13 Д-метила-ОН-ЯМ.3) Восстановление ЯМ посредством Вас 111 цзйцг 1 пфепяз (ВВА - Дармштадт) .Ферментация идет посредством бактерий вбродильном чане.Бродильный чан из нержавеющей стали емкостью 50 л наполняют 30 л питательной среды из следующих веществ, ОД: 0,5 глюкозы;0,2 жидкости для замочки кукурузы; 0,5 экстракта дрожжей; 0,1 пептона (Мерк), стерилизуют нагреванием в течение 1,5 час до 120 Си засевают 1 л выдержанной в течение сутоквзболтанной культуры Вас 111 цз Йцппрепяз(ВВА - Дармштадт) .Посевной материал получают при условиях,описаных для выращивания посевов в колбахпо примеру 3(а).После однодневного размножения при температуре 29 С, перемешивании (220 обмин) иаэрации (1,65 м)час) 1,8 л культуры при стерильных условиях переносят в бродильныичан такого же размера с 28 л того же питательного раствора. После выращивания в течение 6 час при перемешивании и аэрации, какуказано выше, добавляют силиконовое маслоЯН + 5,4 олеомаргарина из свиного сала вкачестве предотвращающего вспениваниесредства и раствор 15,0 г ЯМ в 800 смз этанола и проводят ферментацию еще в течение 16час,5 10 15 20 25 30 35 40 45 Затем суспензию бродильного чана экстрагируют дважды 15 л метилизобутилкетона, сгущают экстракт при температуре ванны 45 С в вакууме до сиропа и растворяют последний в 150 смз изопропилового эфира. После выдерживания в течение 20 час при 0 С осажденные кристаллы отсасывают, промывают небольшим количеством холодного изопропилового эфира и высушивают при 60 С в вгкууме.Выход:.13,1 г 13-метила-ОН-ЯМ т. е.874 теоретического количества, т. пл. 98/99 - 100 С.Вещество может быть очищено перекристаллизацией из 4 ч. спирта,и) Восстановление ЯМ посредством Рго 1 агп 1 поЬас 1 ег а 1 Ьойауцз (АТСС 8458).При описанных в примере 3(з) условиях ЯМ может быть в значительной степени восстановлен посредством Рго 1 апп 1 поЬас 1 ег аЪоПауцз только в том случае, если через 20 час после добавки субстрата подача воздуха полностью прекратится, и затем проволится ферментация еще в течение 20 час, Чтобы изолировать полученный 13-метила-ОН-ЯМ, требуется растворить концентрат сырого экстракта в хлористом метилене и отфильтровать через колонну с кизельгелем, дезактивированную 10 О воды, и кристаллизовать элюат, как описано, из диизопропилового простого эфира.П и и м е4. Получение 3-метокси(14) -секо, 3, 5 (10), 9 (11) -эстратетраен-ол- она (13 Д-метил-ОН-ЯМ,) ферментацией посредством дрожжей.а) Восстановление ЯМ посредством Яасспагогпусез е 111 рзоЫез (штамм Токауера, 22, Берлин).При описанных в примере 2(а) условиях ЯМ восстанавливают посредством Яассйагогпусез е 111 рзоЫез (штамм Токауера). Полученный хроматографией препарата в тонком слое сырой продукт перекристаллизовывают дважды из 10 ч. диизопропилового простого эфира,Получают 133-метил-ОН-ЯМ 1; т, пл.110/112 - 114 С; аф - 39.2 Гдиоксан, с = 1); ви = 20,800. б) Восстановление ЯМ посредством ЯассЬагогпусез раз 1 опапцз (Институт ферментативной промышленности, Берлин).При описанных в примере 2(а) условиях из ЯМ ферментацией посредством Яассйагогпусез раз 1 опапцз получают 130-метил-ОН-ЯМ .в) Восстановление ЯМ посредством Яасспагогпусез саг 1 зЬегдепяз (СВЯ 2354).При описанных в примере 2(а) условиях из ЯМ ферментапией посредством Засспагогпусез саг 1 зЬегепяз (СВЯ) получают 13 Р-метил- ОН-БМ,.г) Восстановление ЯМ посредством Яасспаготусез ц 1 агцгп (СВЯ 1508),Ферментация идет посредством дрожжей в бподильном чане. Бродильный чан из нержавеющей стали емкостью 50 л наполняют 30 л питательного раствора из 5 ОД виноградного сахара и 2/, жидкости для замочки кукурузы.стерилизуют нагреванием в течение 30 мин до 120 С и засевают 1 г выдержанной в течение суток взболтанной культурой ЯассЬагогпусез цуагцгп (СВЯ 1508). Посевной материал получают при условиях, описанных для выращива ния посевов в колбах по примеру 2(а).После однодневного размножения при температуре 29 С, перемешивании (220 об/мин) и аэрации (1,65 мз/час) 1,8 л культуры при стерильных условиях переносят в бродильный 10 чан такого же размера с 28 л того же питательного раствора, После выращивания в течение 6 час при перемешивании и аэрации, как описано выше, добавляют силиконовое масло БН + 5, олеомаргарина из свиного сала в ка честве средства, предотвращающего вспенивание, и раствор 45,0 г БМ в 800 смз этанола и проводят ферментацию еще в течение 19 час.Затем экстрагируют суспензию для фермен 20 25 30 тации дважды 15 л метилизобутилкетона, сгущают экстракт при температуре ванны 45 С ввакууме до сиропа, разбавляют последний400 смг диизопропилового эфира и оставляютполученный раствор на 16 час при 0 С.Образовавшиеся кристаллы отсасывают,промывают 25 смз ледяного диизопропиловогоэфира и сушат в вакууме при 60 С.Выход: 31,8 г 1 Зр-осетилр-ОН-БМс, т. е,714 теоретического количества; т. пл,106/108 - 109 С; а Р 34,5 (диоксан, с = 1);вг 64 = 20,100,Соединение может быть очищено перекристаллизацией из 4 ч. этанола. П р и м е р 5. Получение 13 р-метилр-ОН 5 М, восстановлением ЯМ посредством Сцгис 1 агса 1 цпа 1 а (МКК. 2434).Ферментация ичет посредством грибков в бродильном чане. Бродильный чан из нержавеющей стали емкостью 50 л наполняют 30 л питательного раствора из следующих весцеств, Д,: 3 глюкозы; 1 жидкости для замочки кукурузы; 0,2 ХаХО; 0,2 КгНРО,1; 0,1 КНгРО;0,005 МдЯОс; 0,05 КС 1; 0,002 геЯО стерилизуют нагреванием в течение 30 мин до 20 С и засевают 1 л выдержанной в течение 2 дней взболтанной культуры Спгуц 1 аг 1 аппаа (ИКР.2434). Посевной материал получают при условиях, описанных в примере 1(а) для выращивания посевов в колбах.После двухдневного размножения при температуре 29 С, перемешивании (220 об/мин) и аэрации (1,65 лВ/час 1 3 л культуры при стерильных условиях переносят в бродильный чан такого же размера с 27 л того же питательного раствора.После выращивания в течение 16 час при перемешивании и аэрации, как описано выше, добавляют Р 1 цгопсс Т. 81 в качестве средства, предотвращающего вспенигание, и раствор 6,0 г ЯМ в 450 смз этанола и проводят сЪепментацию еще в течение 20 час. Зятем экстрягируют суспензию ферментации дваж.ль 1. 15 л метилизобутилкетоня, сгущают экстоякт ппи температуре ванны 45 С в вакууме до сиропа,35 40 45 50 55 60 65 8отделяют последний хроматографией в колонне на 200 г дезактивированного 10 Я, воды кизельгеля в качестве абсорбента и смесях четыреххлористого углерода - хлористого метилена в качестве растворителя для элюирования. Содержащие 1 ЗД-метилр-ОН-ЯМ, фракции соединяют и после сгущения перекристаллизовывают из изопропилового эфира.П р и м е р 6. Получение 3-метокси(14) -секо, 3, 5 (10), 9 (11) -эстратетраенаа-ол-она (1 ЗД-метила-ОН-ЗМ,) восстановлением ЬМ посредством АгйгоЬас 1 ег з 1 гпр 1 ех (АТСС 6946),При описанных в примере 3(и) условиях ЯМ подвергается ферментации посредством АгйгоЬас 1 ег з 1 спр 1 ех,Получают кристаллизат с т. пл, 91/92 - 95 С. хг - 16 (диоксан, с =1). Последний многократной фракционированной кристаллизацией очищают из диизопропилового эфира и из этанола,Получают 1 Зр-метила-ОН-ЯМ; т. пл.100/101 - 102 С; аго - 44,3 (диоксан, с = 1); вгд -- 20,600.П р и м е р 7, Получение З-метокси, 3, 5 (10) -8, 14-эстрапентаенр-ола СНггОг (282, 37),30,04 г (0,100 моль) 13 р-метилр-ОН-ЯМ, кипятят с флегмой 2,5 час и 42 мл метанола и 83 мл хлористого метилена с 0,81 мл концентрированной соляной кислоты. Затем раствор выливают в 85 мл воды, отделяют органическую фазу и водную фазу дважды экстрагируют хлористым метиленом, Соединенные органические фазы промывают до нейтрального состояния раствором бикарбоната и водой и сушат, После отгонки растворителя в вакууме и перекристаллизации из этанола получают 21,00 г (74,4) З-метокси, 3, 5 (10), 8, 14- эстрапентаен-ола, т. пл. 107 в 1 С;агро - 141 (с = 1, СНС 11.Вещество идентично З-метокси, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаенр-олу, который получают отщеплением рацемата из рацемического материала, по точке плавления, вращению, всем спектрам, а также по газовой хроматографии и хроматографии в тонком слое. П р и м е р 8. Получение З-метокси, 3, 5 (10), 8-эстратетраенр-ола, СсНг 40 г (284, 38),58,00 г (0,205 моль) З-метокси, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаенр-ола гидрируют при помощи 8,2 г предварительно гидрированного 50/-ного палладия/карбонат кальция в 200 мл тетрагидрофурана. Поглощается в течение 50 мин 4820 мл водорода (95" теоретического количества), Раствор отфильтровывают от катализатора,После выпаривания растворителя в вакууме и перекристаллизации из этанола получают 39,80 г (68,2%) З-метокси, 3,5 (10), 8-эстратетраенр-ола; т. пл. 123 - 126 С; аго - 71 (с = 1, СНС 1 з),10 9Пример 9. Получение З-метокси, 3, 5 (10) -эстратриенД-ола (эстрадиолметиловый эфир). СоНгзОг (286, 39).11,35 г (0,040 моль) З-метокси, 3, 5 (10) - 8-эстратетраенр-ола растворяют в 120 мл абсолютного тетрагидрофурана и при - 50 С, добавляют к раствору 100 мг лития в 120 мл жидкого аммиака и 9,9 мл анилина. При такой же температуре порциями добавляют 340 мг лития и перемешивают еще в течение 10 мин.Затем добавляют 0,72 мл воды в 12 мл тетрагидрофурана, причем раствор становится прозрачным.После добавления остальных 0,59 г лития раствор перемешивают еще 20 мин и обесцвечивают хлористым аммонием. После выпаривания аммиака добавляют воду, органические растворителя отгоняют в вакууме и остающуюся смесь экстрагируют хлористым метиленом. Соединенные растворы хлористого метилена освобождают с помощью 1 н. соляной кислоты от анилина и промывают раствором бикарбоната и водой до нейтрального состояния.После сушки раствора, отгонки растворителя в вакууме и перекристаллизации из этанола получают 8,5 г (74,0 о 4) З-метокси, 3, 5 (10) -эстратриенр-ола (эстрадиолметиловый эфир); т. пл. 114 - 116 С; ао + 72. Вещество идентично полученному из натурального материала эстрадиолметиловому эфиру по точке плавления, вращению и всем спектрам, а также по газовой хроматографии и по хроматограмме в тонком слое.П р и м е р 10. Получение З-метокси, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаенр-ола-ацетата СгНг 40 з (324, 40). 5,00 г (0,0167 моль) 13 р-метилр-ОН-БМ обрабатывают в течение 15 час в пиридине при комнатной температуре 30 мл уксусного ангидрида, Затем раствор выливают в соляную кислоту, экстрагируют раствором хлористого метилена, промывают до нейтрального состояния 1 н. соляной кислотой, раствором бикарбоната и водой. Масло, остающееся после сушки и отгонки растворителя в вакууме, поглощается в 800 мл бензола и кипятится в течение 15 мин в водоотделителе с 2,8 г п-толуолсульфокислоты, После охлаждения раствор промывают до нейтрального состояния раствором бикарбоната и водой.Сушка и отгонка растворителя дает 4,89 г (90,5 о 4) З-метокси, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаенр-ол-ацетата; т. пл. 79 - 82 С; агро 180.На газовой хроматограмме вещество 98 о 4-ное и может применяться для гидрирования в 3- метокси, 3, 5 (10), 8-эстратетраенД-ол-ацетат.Для сравнения с ацетатом З-метокси, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаенр-ола из отщепления рацемата в рацемическом материале оно перекристаллизовывается из этанола. Получают 3,60 г (бб,б,4) З-метокси, 3, 5 (10), 8, 145 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 эстрапентаенр-ол-ацетата; т. пл. 86 - 87 С;го 188 срЭтн данные, а также спектры и хроматограммы идентичны данным ацетата, полученного из отщепления рацемата.П р ц и е р 11. Получение З-метокси, 3, 5(326,41).2,40 г (0,0074 моль) З-метокси, 3, 5 (10),8, 14-эстрапентаенД-ол-ацетатата сырогогидрируют с помощью 664 мг предварительногидрированного 5 о 4-ного палладия на карбонате кальция в 8 мл бензола и 8 мл тетрагидрофурана. За 2 час поглощаются 180 мл водорода (9 о 4 теоретического количества).После отфнльтрования катализатора, отгонки растворителя в вакууме и перекристаллизации из этанола получают 1,61 г (66,6 "4) 3-метокси, 3, 5 (10), 8-эстратетраенр-ол-ацетата; т, пл. 110 - 113 С; аго - 49. (с =- 1,СНСз).П р и м е р 12. Получение 3-мет",.ксн, 3,5(10), 8-эстратетраенр-ола СНг 40.(284,38) .2,70 г (0,0083 моль) З-метокси,3,5(10), 8 эстратетраенр-ол-ацетата перемешиваютпри комнатной температуре в течение 3 час в50 мл 1 н. метанолового калийного щелока.Прн этом вещество полностью растворяется.Прн охлаждении раствора осаждается продукт. Осаждение дополняется 100 мл ледянойводы.Получают 2,14 г (95,17 о) З-метокси,3,5(10),8-эстратетраенр-ола, т. пл, 125 в 1 С;аго - 7,9 (с = 1, СНС 1 з)Вещество идентично веществу, полученномугидрированием З-метокси, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаенр-ола,П р и м е р 13. Получение З-метокси, 3, 5(10), 8, 14-эстрапентаенр-ола (282,37),150 мг (0,00046 моль) З-метокси, 3, 5 (10),8, 14-эстр апентаенр-ол-ацетата перемешивают в течение 3 час в потоке азота в 3 мл метанолового 1 н, калийного щелока. При этом вещество растворяется постепенно. При охлаждении льдом оно подкисляется 0,6 мл концентрированной кислоты и осаждается 2,4 мл воды.После перекристаллизапии из этанола/водыполучают 10,5 мг (82,5 о/) З-метокси, 3, 5(равноценно 13 а-метилД-ОН-ЯМ,) обрабатывают в течение 16 час при комнатной температуре 20 мл пиридина с 12 мл уксусного ангидрида, Затем раствор выливают в воду, эк.страгируют хлористым метиленом и соединенные фазы хлористого метилена промывают донейтрального состояния соляной кислотой, бикарбонатом и водой, 242777 12выше 30 С; 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 После сушки и отгонки растворителя в вакууме маслянистый некристаллизующийся остаток поглощается в 50 мл бензола и кипятится в течение 10 мин на водоотделителе с 20 мг а-толуолсульфокислоты, После разбавления простым эфиром раствор промывают до нейтрального состояния водой и бикарбонатом, сушат и растворитель отгоняют в вакууме.Перекристаллизация из этанола дает 1,83 г (84,7 ,) З-метоксисс, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаенД-ол-ацетата; т. пл. 127 в 1 С; зо + 183 (с = 1, СНС 1 з).П р и м е р 15. Получение З-метоксиа, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаенр-ола СгзНззОз (282, 37).800 лгг (0,00246 ллоль) 3-метоксисс; 1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаенД-ол-ацетата перемешивают в течение 3 час в потоке азота с 16 мл 1 н, метанолового калийного щелока. При этом вещество растворяется. При охлаждении льдом с помощью воды проводят осаждение и основательную промывку.Получают 681 мг (97,6,) З-метоксиа, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаенр-ола.Разложение при температуре выше 32 СсР + 199 (с = 1, СНС 1 з).Вещество по всем спектрам и хроматограммам унифицированное, но очень легко разлагается.Пример 16. Получение З-метокси, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаена-ол-ацетата С н 4 оз (324,40) .300 мл (0,001 моль) 13 Д-метила-ОН-ЯМг обрабатывают в течение 16 час при комнатной температуре 3 м,г пиридина и 2 мл уксусного ангидрида, Затем раствор выливают в воду, экстрагируют хлористым метиленом и соединенные растворы хлористого метилена промывают до нейтрального состояния соляной кислотой, бикарбонатом и водой. После сушки и отгонки растворителя остается масло, которое поглощается в 8 мл бензола и кипятится в течение 10 4 гин с 18 яг п-толуолсульфокислоты. После разбавления простым эфиром раствор промывают до нейтрального состояния водой и бикароонатом, сушат и растворитель отгоняют,Перекристаллизация из этанола дает 244 мг (70,54) З-метокси, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаена-ол-ацетата; т. пл. 126 - 121,5 С;а + 197 (с = 2, СНС 1 з)Пример 17. Получение З-метокси, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаенк-ола С,НззОз (282,37) .200 мг (0,000618 моль) З-метокси, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаени-ол-ацетата перемешивают в течение 3 час в потоке азота с 4 мл 1 н. метанолового калийного щелока, При этом вещество полностью растворяется, При охлаждении льдом происходит осаждение водой, осадок отсасывается и основательно промывается.Получают 128 мг (73,5) З-метокси, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаена-ола. Разложение при температуреадо - 197 (с = 1, СНС 1 з) .Вещество должно храниться в холоде, так как оно быстро разлагается,Пример 18. Получение 3-метокси 8 (14)- секо, 14 а-оксидо, 3, 5(10) -эстратриен- она СНз 40 з (300,38).400 мг (0,00133 моль) 13 а-метилр-ОНЯМ, кипятят в течение 30 мин. с флегмой в 20 мл метанола и 40 мл хлористого метилена с 0,4 мл концентрированной соляной кислоты. После добавления воды отделяется органическая фаза и водная фаза экстрагируется хлористым метиленом. Соединенные органические фазы промывают до нейтрального состояния бикарбонатом и водой, и растворитель отгоняют в вакууме.Получают 400 мг (100) З-метокси, 14-се. ко, 14 а-оксидо, 3, 5 (10) -эстратриен- она, который является унифицированным по хроматограмме в тонком слое,Многократная перекристаллизация из этанола дает 45 мг вещества; т. пл. Ф 9 - 90 С; арз 41,7 (с = 1, СНС 1 з).Структура была подтверждена инфракрасной частью спектра, ультрафиолетовой частью спектра, ХМК масс-спектром. П ример 19. Получение 13 р-метила-ОНЯМг ферментанцией посредством ЯассЬаготусез цуагцгп (СВЯ 1508) по методу остаточной клетки.30 л культуры ЯассЬагогпусез цагцпг (СВЯ 1508) из предварительного бродильного чана, полученной, как описано в примере 4(г), подвергают центрифугированию, Промывают полученные дрожжи дистиллированной водой, центрифугируют еще раз и взвешивают в 30 л дистиллированной воды. По 500 смз суспензии наливают в 8 колб Эрленмейера емкостью 2 л, закрывают их ватной пробкой и взбалтывают (число колебаний 145 обмин) при 30 С. Через 4 час добавляют в каждую колбу по 250 мг ЯМ, растворенных в 2,5 смз метилцеллозольва, и проводят ферментацию в течение 20 час. Затем соединяют исходные смеси ферментации, экстрагируют их дважды с помощью 1 л метилизобутилкетона, сгущают экстракт в вакууме при температуре ванны 45 С до сухого состояния и перекристаллизовывают остаток 1 раз из смеси бензола - гексана и 1 раз из этанола.Получают 133-метила-ОН-ЯМ,; т. пл.101/102 - 103 С; азро + 45,4 (с =1, диоксан),П р и м е р 20, Получение 13 р-метила-ОНЯМг ферментацией посредством ЯассЬагогпусез цс агцгп (СВЯ 1508) - сухого порошка.Из 30 л культуры СВЯ 1508 предварительного бродильного чана получают, как описано в примере 19, центрифугированием дрожжи. Последние взвешивают в 3 л ацетона, перемешивают суспензию в течение 15 мин, отсасывают дрожжи, взвешивают снова в 3 г ацетона,перемешивают, отсасывают дрожжи и сушат ц242777 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 гечейие 3 час в вакууме при комнатной температуре.Полученный сухой порошок взвешивают в 30 л дистиллированной воды и применяют эту суспензию для ферментации.Ферментация ЗМ и переработка исходных смесей происходит, как описано в примере 19.Получают 13 ф-метила-ОН-ЯМ,; т. пл, 100/102 - 103 С; а + 43 (с = 1, диоксан).П р и м е р 21, Получение 13 р-метилаОН-БМ, посредством раствора 20 Р-гидроксистероиддегидрогеназы.К смеси 4,4 лл 0,022 М фосфатного буферного раствора (рН 5,5), 0,7 мл 0,4/,-ного РРХ н. раствора и 0,03 мл разбавленной в отношении 1: 5 суспензии 20 р-гидроксистероиддегидрогеназы (фирма Ц, Ф. Берингер унд Зене, Общество с ограниченной ответственностью Мангейм) добавляют 1 мг ЗМ в 0,05 мл этанола и взбалтывают в течение 15 мин при комнатной температуре В результате анализа хроматографией в тонком слое (см. пример 1,а) обнаруживают в качестве единственного продукта превращения 13-метила-ОН-ЯМ,.П р и м е р 22. Получение 13 р-этил-метокси(14)-секо-нор, 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраенР-ол-она (13 р-этилР-ОН-ЯМ,) .При условиях, описанных в примере 4(г), 15,0 г 13 р-этил-метокси(14)-секо-нор, 3, 5 (10), 9 (11) -эстратетраен, 17-диона (13 Р-этил-ЗМ) подвергают ферментации посредством Бассйагогпусез ц агцгп (СВЗ 1508) в течение 20 час. Затем суспензию ферментации экстрагируют дважды 15 л метилизобутилкетона, сгущают экстракт при температуре ванны 45 С до сиропа и перекристаллизовывают полученный продукт из изопропилового эфира.Получают 13 Р-этил-метокси(14) секо- нор, 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраенр-ол- он; т, пл. 85 - 86,5 С; а о + 15,2(с = 1, диоксан).Согласно ХМК-спектру гидроксильная группа Р - постоянная относится к 13 Р-этиловой группе.П р и м е р 23. Получение 3-метокси(14)- секо- Р-гомо, 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраен 17 ар-ол-она (17 ар-ОН) - (Р-гомо-ЯМ) .1,6 г 3-метокси(14) -секо-Р-гомо, 3,5 (10), 9 (11) -эстратетраен, 17 а-диона (Р-гомо-ЯМ) подвергают ферментации, как описано в примере 20, посредством ацетонового сухого порошка Яасс 1 тагогпусез ц агцгп (СВЯ 1508). Полученный сухой продукт очищают, как описано в примере 1,а, хроматографией препарата в тонком слое и перекристаллизовывают из изопропилового эфира.Получают 3-метокси(14) -секо-Р-гомо, 3, 5 (10), 9 (11) -эстратетраенар-ол-он; т. пл.115 - 116,5 С; и + 28,5 (с = 1, диоксан),П р и м е р 24. Получение 2-метил-метокси(14)-секо,3,5 (10), 9 (11) - эстратетраен 14 а-ол-она.По 500 смз суспензииЯассЬагогпусез цчагцгп (СВ 1508) - сухого порошка (пример 20) вво 14дят в 16 колб Эрленмейера емкостью 2 л, за крывают их ватной пробкой и взбалтывают (числом колебаний 145 об/мин) при 30 С. Через 1 час добавляют в каждую колбу по 100 мг 2-метил-метокси(14) -секо, 3, 5 (10), 9 (11) -эстратетраен, 17-диона, взбалтывают еще 48 час.Этот не описанный до сих пор исходный продукт приготовляют известным способом следующим образом: 6-метокси-метил-тетралин окисляют хромовой кислотой в 6-метокси-метилтетралоне(т. пл. 102 - 104 С), из которого после реакции с Гриньяровским соединением, с винилом-бромидом магния и последующей конденсации полученного висколя, посредством 2-метилциклопентандиона, 3 получают 2-метил-метокси(14) -секо, 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраен, 17-дион (т. пл, 101 в 1 С),Затем соединяют исходные смеси ферментации, экстрагируют их дважды 2 л метилизобутилкетона, сгущают экстракт в вакууме при температуре ванны 45 С, очищают остаток хроматографией препарата в тонком слое (пример 1,а) и перекристаллизовывают продукт из изопропилового эфира.Получают 2-метил-метокси(14) -секо, 3, 5 (10), 9 (11) -эстратетраена-ол-он; т. пл. 135 в 1 С; а,о + 47,8 (с = 1, диоксан),Согласно КМК-спектру гидроксильная группа а-постоянная относится к 13 р-метиловой группе. П р и м е р 25. Получение 4-метил-метокси (14) -секо, 3, 5 (10), 9 (11) -эстратетраенР- ол-она,30 л суспензии ЯассЬагогпусез ц агцт (СВ 5 1508) - сухого порошка (пример 20) перемешивают в бродильном чане из нержавеющей стали при 30 С (число колебаний 200 об/мик) и аэрируют 300 л/час воздуха, Добавляют 3,0 г 4-метил-метокси(14) -секо, 3, 5 (10);9 (11) -эстратетраен, 17-диона, растворенного в 800 смз этанола. Этот не описанный до сих пор исходный продукт получают следующим образом: 5-метил-метокситетралонвводят в реакцию с Гриньяровским соединением посредством винила-хлорида магния и полученный при этом соответствующий винол конденсируют посредством 2-метилциклопентадиона в 4-метил-метокси(14)-секо, 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраен, 17-дион (т, пл. 154 в 1 С). Затем перемешивают в течение 48 час с аэрацией и 60 час без аэрации. Экстрагируют, как обычно, метилизобутилкетоном, сгущают экстракт, отделяют остаток хроматографией препарата в тонком слое и перекристаллизовывают полученный сырой продукт из изопропилового эфира,Получают 4-метил-метокси(14) -секо, 3, 5 (10), 9 (11) -эстратетраенр-ол-он; т, пл,242777 16 10 15 Составитель 11. ЙивницкаяТехред Л. Я. Левина Корректоры: М. В. Радзинскаяи В И Жолудева Редактор А. Петрова Заказ 3080/19 Тираж 480 Подписное ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва, Центр, пр. Серова, д. 4Типография, пр, Сапунова, 2 15167 - 168 С; с - 43,6 (с = 1, диоксан). Согласно КМ 1 т,-спектру гндроксильная группа рпостоянная относится к 1313-метиловой группе. Предмет из обретен и я1, Способ получения оптически активных антияодов ряда стероидов, отличающийся тем, что соединение общей формулы где С обозначает оптически неактивный атом углерода, а Я в группу в СН 2 в - или в СН 2 в , Х - водород, галоид, карбоксильную 20 группу в свободной или этерифицированной форме или насыщенный или ненасыщенный алкильный радикал с 1 - 4 атомами углерода, который дополнительно может быть замещен галоидом или гидроксильной группой, амино группой или карбоксильной группой в свободной или функционально измененной форме, У - остаточную часть секостерорда, включая кольца А и В, а также его функциональные производные по кетогруппам, подвергают ферментативному превращению, например, с микроорганизмами или выделенными из них ферментами.2. Способ получения оптических активных антиподов ряда стероидов, отличающийся тем, что соединение общей формулы где С обозначает оптически неактивный атом углерода, Я - группу - СН. - СНв - или - СН в , Х в водор, галоид, карбоксильную группу в свободной или этерифицированной форме или насыщенный или ненасыщенный алкильный остаток с 1 - 4 атомами углерода, который дополнительно может быть замещен галоидом или гидроксильной группой, аминогруппой или карбоксильной группой в свободной или функционально измененной форме, Ъ - остаточную часть секостероида, включая кольца А и В, подвергают ферментативному восстановлению, например, с микроорганизмами, как грибы, дрожжи, бактерии или с выделенными из них ферментами,

Смотреть

Способ получения оптически активных