Purification and Characterization ofBacillus acidopullulyticus Pullulanase for Enzymatic Starch Modification (original) (raw)

Starch-starke, 1991

Abstract

The pullulanase (EC 3.2.1.41) of Bacillus acidopullulyticus was purified using anion exchange chromatography and preparative isoelectric focusing. The purified preparation migrated as a single protein band upon SDS gel electrophoresis and its molecular weight was estimated to be 102,000. Two main activity bands having pl-values 5.0 and 5.2 were detected by analytical isoelectric focusing. The enzyme was purified 4-fold with the yield 38% by this two-step purification procedure. The purified pullulanase showed maximal activity at 50°C and pH 5 and was slightly activated by Ca2+. It was stable at 50°C but totally lost its activity at 60oC in one hour. This purified pullulanase efficiently hydrolyzed the α-1,6-glucosidic bonds of pullulan and gelatinized starch. Reinigung und Charakterisierung von Pullulanase aus Bacillus acidopullulyticus fur die enzymatische Starkemodifizierung. Das Enzym Pullulanase aus Bacillus acidopullulyticus wurde durch Anionenaustausch-Chromatographie und praparative isoelektrische Fokussierung gereinigt. Die Praparation des gereinigten Proteins zeigte eine einzige Bande im SDS-Gel; als Molekulargewicht wurde 102000 berechnet. Analytische isoelektrische Fokussierung ergab zwei aktive Hauptbanden mit pl-Werten von 5.0 und 5.2. Das Enzym wurde durch die beschriebene Reinigung in zwei Schritten 4-fach angereichert; die Ausbeute betrug 38%. Die gereinigte Pullulanase zeigte maximale Aktivitat be 50oC und pH 5. Eine leichte Erhohung der Aktivitat durch Ca2Plus; wurde beobachtet. Das Enzym war stabil bei 50oC, verlor jedoch vollig seine Aktivitat nach einstundiger Inkubation bei 60oC. Die gereinigte Pullulanase hydrolysierte sehr effizient α-1,6-glucosidische Bindungen in Pullulan und in verkleisterter Starke.

Tapani Suortti hasn't uploaded this paper.

Let Tapani know you want this paper to be uploaded.

Ask for this paper to be uploaded.