Development and application of the technique for identification of Borrelia miyamotoi surface antigens (original) (raw)

2021, Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology

Аннотация Введение. Borrelia miyamotoi-возбудитель безэритемной формы иксодового клещевого боррелиоза (ИКБ)-заболевания, широко распространённого в России. В геноме B. miyamotoi присутствуют гены десятков вариабельных основных поверхностных белков (Vmp). Vmp разделяют на два семейства-Vsp и Vlp (с подсемействами δ, γ, α и β). В конкретный момент времени отдельная B. miyamotoi экспрессирует единст венный вариант гена Vmp. Цель работы-создание методики для идентификации гена Vmp, находящегося в сайте экспрессии. Материалы и методы. Методика реализована в формате мультиплексной ПЦР в режиме реального времени. Для её испытания были использованы образцы ДНК B. miyamotoi, выделенные из крови 172 больных ИКБ и 109 клещей. Образцы были собраны в 14 регионах России. Результаты. Разработанная методика позволила идентифицировать экспрессирующийся Vmp в 82% исследованных проб, т.е. показала достаточную эффективность. Отрицательные результаты значимо реже наблюдались среди проб от больных, чем среди проб клещей. При этом доля проб с Vmp только одного типа одинакова среди клинических образцов и клещей, а доля проб, в которых детектируются одновременно два типа Vmp, значимо выше среди образцов от больных, где наиболее часто встречалась комбинация Vlp-δ и Vsp. Обсуждение. Тот факт, что в образцах крови чаще выявляется сочетание двух типов Vmp, может говорить об одновременном присутствии нескольких субпопуляций B. miyamotoi в организме больных ИКБ. После того как к основному поверхностному белку штамма, занесённого клещом, вырабатываются протективные антитела, происходит переключение на синтез нового антигенного варианта Vmp. Такой феномен, называемый «иммунным избеганием», позволяет патогену персистировать в организме хозяина. Заключение. Созданная методика мультиплексной ПЦР в режиме реального времени позволяет проводить одновременную детекцию нескольких антигенных вариантов вариабельных основных поверхностных белков B. miyamotoi. Изучение антигенного спектра штаммов B. miyamotoi в сопоставлении с характеристикой консервативных участков генома методом мультилокусного секвенирования позволит прояснить этапы эволюции и распространения B. miyamotoi sensu lato. Ключевые слова: иксодовый клещевой боррелиоз, Borrelia miyamotoi, ПЦР, поверхностные основные вариабельные белки Vmp, вариабельные большие белки Vlp, вариабельные малые белки Vsp, иммунное избегание Этическое утверждение. Исследование проводилось при информированном согласии пациентов. Протокол исследования одобрен Этическими комитетами ЦНИИ Эпидемиологии (протокол № 83 от 26.06.2018) и Ижевской государственной медицинской академии (протокол № 17 от 24.12.2012). Благодарность. Мы признательны всем исследователям, клиницистам и эпидемиологам, участвовавшим в сборе биологических образцов, использованных в настоящей работе, в первую очередь М.