TG-ROC analysis of immunofluorescence assays in canine visceral leishmaniasis diagnosis (original) (raw)
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Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science
Recentemente, foco de leishmaniose visceral canina (CVL) foi descrito na região noroeste do Estado de São Paulo - Brasil. O Hospital Veterinário - UNESP - Araçatuba, no ano de 2.000, desenvolveu 60 testes citopatológicos de casos suspeitos de leishmaniose usando aspirado por agulha fina (FNA). Os esfregaços de linfonodo foram corados pelo método de Romanowsky (Diff-Quik®) e observados em microscopia de luz. Os casos positivos mostraram formas amastigotas típicas de Leishmania livres ou em vacúolos de macrófagos. Sinais citopatológicos de reatividade do sistema linfo-histiocitário com ausência de parasitos foram também observados. Com o objetivo de implementar o diagnóstico da CVL, detectando parasitos e material antigênico nos esfregaços, aplicou-se a reação de imunofluorescência direta (IFD) usando anticorpo policlonal anti-Leishmania produzido em camundongo. Comparamos o método de IFD com a pesquisa direta do parasito em esfregaços corados pelo método de Romanowsky. Dos 60 cães co...
Revista brasileira de parasitologia veterinaria = Brazilian journal of veterinary parasitology: Orgao Oficial do Colegio Brasileiro de Parasitologia Veterinaria
The purpose of the present study was to evaluate the immunohistochemistry (IMHC) and PCR (Polymerase Chain Reaction) tests for Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) diagnosis and compare the results with serological tests such as the indirect fluorescence antibody test (IFAT), ELISA and a parasitological test (microscopic direct examination of the parasite stained with haematoxylin and eosin--HE). For this study, samples of healthy or lesion skin tissues were obtained from 34 CVL naturally infected dogs classified in three groups: asymptomatic, oligosymptomatic and polisymptomatic. Not only lesion (56.5%) but also healthy skins (31.8%) were positives by IMHC and confirmed by PCR in 97.8% of skin samples. In asymptomatic group, 87.5% dogs were negatives by serological tests, but positives by IMHC in 50% and by PCR in 100%. In oligosymptomatic group, 100%, 85.7% and 28.6% of dogs were positives, respectively by PCR, serological and IMHC tests. In addition, 91.7% of polisymptomatic dogs ...
Serological, histological and immunohistochemical tests for canine visceral leishmaniasis diagnosis
Veterinary Immunology and Immunopathology, 2009
O objetivo deste trabalho foi avaliar as técnicas de imunoistoquímica (IMIQ) e de PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) em tecidos cutâneos para o diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina (LVC) e compará-los com os exames parasitológicos em tecidos corados histoquimicamente (hematoxilina-eosina, HE) e com testes sorológicos, como a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e ensaio imunoenzimático (ELISA). Dos 34 cães naturalmente infectados, classificados em assintomáticos, oligossintomáticos e polissintomáticos, foram coletadas amostras de pele sadia ou com lesão para a realização da IMIQ, HE e PCR. Não somente peles lesionadas (56,5%), mas também sadias (31,8%) encontravam-se positivas pela IMIQ, confirmadas posteriormente pela PCR em 97,8% das amostras. No grupo assintomático, 87,5% estavam negativos pelos testes sorológicos, mas positivos em 50% dos casos pela IMIQ e 100% pela PCR. Entre os oligossintomáticos, 100%, 85,7% e 28,6% encontravam-se positivos, respectivamente, pela PCR, sorologia e IMIQ. Os cães polissintomáticos eram 91,7% soropositivos e tinham parasitas na pele. Em geral, a técnica PCR teve maior positividade (100%). A eficiência dos testes variou de acordo com a evolução da doença, demonstrando a necessidade da associação de técnicas, usando-se IMIQ para confirmação da sorologia e a PCR apenas nos casos suspeitos após a IMIQ. Dessa forma, pode-se aumentar os níveis de positividade e contribuir para o controle desta zoonose.
[Comparative study of diagnostic methods for visceral leishmaniasis in dogs from Ilha Solteira, SP]
Revista brasileira de parasitologia veterinaria = Brazilian journal of veterinary parasitology: Orgao Oficial do Colegio Brasileiro de Parasitologia Veterinaria
The purpose of the present work was a comparative study of diagnostic methods for Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) using serological methods, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect fluorescent antibody test (IFAT), histochemical (HE) and immunohistochemical (IMHC) tests using spleen, lymph node and liver canine tissues. In addition, Polymerase Chain Reaction (PCR) was done in blood and in tissues in order to compare and confirm no conclusive and negative diagnosis by the methods above. For this study, 34 dogs were divided according to clinical signs in asymptomatic, oligosymptomatic and polisymptomatic Leishmania-infected dogs euthanized by Zoonotic Disease Control Center (CCZ) from Ilha Solteira, SP, Brazil. The positivism indexes of ELISA, IMHC, IFAT and HE were 65.0, 62.0, 56.0 and 56.0%, respectively with the highest numbers of positive dogs in polisymptomatic (92.0%) followed by oligosymptomatic (57.0%) and asymptomatic dogs (12.5%). Furthermore, PCR confirme...
Rev Bras Parasitol …, 2007
Rev. Bras. Parasitol. Vet., 16, 1, 5-9 (2007) (Brazil. J. Vet. Parasitol.) RESUMO As formas canina e humana da leishmaniose visceral ocorrem endemicamente em vários Estados do Brasil, havendo associação entre cães infectados e presença do vetor. Com o intuito de utilizar a PCR para o diagnóstico em cães, procedeu-se à amplificação, por PCR, de fragmento de 120pb de kDNA de Leishmania spp. em amostras de sangue periférico de cães. O limiar de detecção da reação em cadeia pela polimerase revelou amplificação de kDNA referente a 0,1 parasita/500μL de sangue periférico. Os resultados de validação da PCR em 166 amostras de cães do município de Poxoréo-MS revelaram sensibilidade de 55% e especificidade 66,3%, considerando-se a reação de imunofluorescência indireta como padrão. PALAVRAS-CHAVE: Leishmaniose visceral canina, Diagnóstico, Ácido desoxirribonucléico (DNA), Reação em cadeia pela polimerase (PCR), cão. INTRODUÇÃO Leishmanioses são doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania, parasita que infecta numerosos mamíferos, incluindo o homem. São transmitidas pela picada de flebotomíneos e dentre as 15 espécies de Leishmania que infectam o homem, 13 tem natureza zoonótica causando a forma visceral, cutânea ou mucocutânea (GRAMICCIA; GRADONI, 2005). No Brasil, as formas canina e humana da leishmaniose visceral (LV) ocorrem endemicamente em vários Estados das regiões Norte, Nordeste, Centro-Oeste e Sudeste e em todos os Estados há associação entre cães infectados e presença do vetor (MILES et al., 1999). O baixo padrão de vida da população, a maior densidade dos flebotomíneos e a presença de cães infectados são fatores predisponentes para implantação desta zoonose (ALENCAR, 1983; BADARÓ et al., 1986; NASCIMENTO, 1996).
Em inquéritos caninos, realizados em municípios paulistas com autoctonia de leishmaniose visceral americana (LVA), o desempenho do teste rápido imunocromatográfico (formato "dipstick") empregando antígeno recombinante K39 (rK39) foi realizado em amostras de sangue total e soro de cães. Este teste foi comparado com a técnica de RIFI e com ELISA as quais foram realizadas em amostras de soro. As amostras foram colhidas de 1.333 cães, sendo 1199 selecionados por sorteio em municípios com transmissão de LVA. O grupo controle foi constituído de amostras de 134 cães portadores de outras patologias ou residentes em áreas indenes para LVA, para avaliar a especificidade do teste rápido anti-rK39. Nos cães selecionados por sorteio, a positividade do teste rápido anti-rK39 foi de 31,3% nas amostras de soro e de 17,4% no sangue total; a RIFI e o ELISA detectaram anticorpos anti-Leishmania em 25,1% e 27,2% das amostras, respectivamente. Todas amostras do grupo controle apresentaram resultados negativos no teste rápido. O teste rápido realizado em amostras de soro apresenta-se como ensaio simples, rápido, de baixo custo e, portanto, adequado para ser empregado como técnica alternativa de triagem diagnóstica em função de sua especificidade para as espécies do complexo Leishmania donovani, responsáveis pela leishmaniose visceral. Palavras-chave. Leishmaniose Visceral, proteínas recombinantes/imunologia, técnicas imunológicas, Leishmania chagasi.
Revista brasileira de parasitologia veterinária = Brazilian journal of veterinary parasitology : Órgão Oficial do Colégio Brasileiro de Parasitologia Veterinária
The purpose of this work was a Canine Visceral Leishmaniasis--CVL study by parasitological direct examination of Leishmania (L.) chagasi (imprinting and histological), immunohistochemical test and histopathological analysis using spleen tissues from 34 dogs euthanized by the Zoonotic Disease Control Centre from Ilha Solteira, SP, Brazil. According to the clinical signs, the dogs were divided in three groups: asymptomatics (8 dogs), oligosymptomatics (17 dogs) and symptomatics (9 dogs). After the accomplishment of all diagnostic tests, 22 dogs were considered positives (64.7%) and 12 (35.3%) were negatives to CVL. From these positive dogs, 1/22 (4.5%) was asymptomatic, 12/22(54.5%) were oligosymptomatics and 8/22 (40.1%) were symptomatics. The histopathological study in spleen tissues from positive, especially symptomatic dogs, showed a diffuse chronic inflammation with thickness of capsular and trabecular regions and there was extensive morphologic alteration of the red and white pu...
Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science, 2002
Recentemente, foco de leishmaniose visceral canina (CVL) foi descrito na região noroeste do Estado de São Paulo -Brasil. O Hospital Veterinário -UNESP -Araçatuba, no ano de 2.000, desenvolveu 60 testes citopatológicos de casos suspeitos de leishmaniose usando aspirado por agulha fina (FNA). Os esfregaços de linfonodo foram corados pelo método de Romanowsky (Diff-Quik®) e observados em microscopia de luz. Os casos positivos mostraram formas amastigotas típicas de Leishmania livres ou em vacúolos de macrófagos. Sinais citopatológicos de reatividade do sistema linfo-histiocitário com ausência de parasitos foram também observados. Com o objetivo de implementar o diagnóstico da CVL, detectando parasitos e material antigênico nos esfregaços, aplicou-se a reação de imunofluorescência direta (IFD) usando anticorpo policlonal anti-Leishmania produzido em camundongo. Comparamos o método de IFD com a pesquisa direta do parasito em esfregaços corados pelo método de Romanowsky. Dos 60 cães com sinais clínicos da doença, o exame direto foi positivo em 50% (n=30), duvidoso em 36,7% (n=22) e negativo com reatividade do linfonodo em 13,3% (n=8). Quando os linfonodos foram submetidos a reação de IFD observamos reação positiva em 93,3% (n=56) e reação negativa em 6,7% (n=4). Nossos resultados mostraram que a reação de IFD apresentou alta sensibilidade quando comparada a pesquisa direta do parasito pela coloração de Romanowsky. A reação de IFD pode ser um método útil para confirmar os casos duvidosos da doença, onde as formas amastigotas não são identificadas com facilidade.