Способ определения фосфолипидов в биологическом материале — SU 1320753 (original) (raw)
Текст
ОЮЗ СОВЕТСНИХ ЦИАЛИСТИЧЕСНИХ СПУБЛИН) (1) А 1 ИЗ ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН К инсти уцюк,(яи)фароо, 1980,1 В 1 осЬеш ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ,и Аль Хадур Рамадан Хусей(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОСФОЛИПИДОВ В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ(57) Изобретение относится к медицине. Для повышения чувствительности способа биологическую пробу экстрагируют органическими растворителями, упаривают досуха, добавляютхлороформ, обрабатывают ферротиоцианатом аммония, затем аскорбиновойкислотой. Пробу нейтрализуют, обрабатывают спиртовым раствором батофенантролеина, добавляют ацетон,центрифугируют и фотометрируют.. Техред М. Ходанич Корректор В. Бутяга Редактор Е.Копча Заказ 2655/49 Тираж 776 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж"35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная, 41 1 132Изобретение относится к оиохимии и может быть использовано в лабораторной практике и научных иссле- .дованиях для количественного определения фосфолипидов в биологическомматериале, например в сыворотке,микросомах печени и других биологических объектах;Цель изобретения в повышениечувствительности способа за счет определения с бато-фенантроленном железа в комплексе фосфолипид-ферротио.цианат.Способ осуществляют следующимобразом.Из биологической пробы экстрагируют фосфолипиды органическимирастворителями (например, смесьюхлороформа и метанола 1:1), упаривают досуха, вновь добавляют хлороформ, срабатывают ферротиоцианатомаммония, затем полученный комплексобрабатывают аскорбиновой кислотойдля восстановления железа. Пробынейтрализуют, обрабатывают спиртовымраствором бато-фенантролеина, разбавляют пробу ацетоном, центрифугируют и фотометрируют образовавшийсякомплекс при взаимодействии двухвалентного железа с бато-фенантролеином (интенсивное малиновое окрашивание),П р и м е р 1. К"0,02 мл сыворотки крови прибавляют 0,5 мл смесихлороформ - метанол (1:1) и упаривают досуха при 40-70 С.К сухому остатку прибавляют 1 млхлороформа, нагревают 30-60 с, затемприбавляют 1 мл раствора ферротиоцианата аммония и встряхивают в течение 1 мин или размешивают в миксере, Приготовление ферротиоцианатааммония: 27,03 г гексагидрата хлорного железа и 30,4 г тиоцианата ам 0753 2мония растворяют в 1 л воды. Послерасслоения фаз отбирают 0,5 мл хлороформенного слоя, переносят в новую пробирку и упаривают досуха.5 К пробе добавляют 2 мл 0,5 Х-ногораствора аскорбиновой кислоты на0,05 М растворе НС 1 и инкубируют 1 чпри 37 С для перевода трехвалентногожелеза в двухвалентное. Затем в про бы прибавляют 0,8 мл 0,1 М раствораедкого натрия, 0,5 мл 0,057.-ногоспиртового раствора бато-фенантролеина и 2 мд ацетона, пробы размешивают и после центрифугирования 15 прозрачный раствор фотометрируют вкювете с длиной оптического пути1 см при зеленом светофильтре. Определение ведут по калибровоч ной кривой зависимости оптическойплотности от концентрации фосфолипндов. Для стандартного растворалецитина оптические плотности составляют 0,125; 0,240; 0,550, 0,720 25 и 0,810 при концентрациях лецитина1,2,5, 10 и 20 мкг соответственно. 30 Способ определения фосфолипидовв биологическом материале путем экстракции органическими растворителями, обраббтки пробы ферротиоцианатом аммония, экстракции образующего ся комплекса оРганическим Растворителем и последующего фотометрирования, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, комплекс фосфолипи дов с ферротиоцианатом дополнительно обрабатывают аскорбиновой кислотой, нейтрализуют и добавляют спиртовой раствор бато-фенантролеина и ацетон.
Заявка
3953020, 28.06.1985
ВИННИЦКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ ИМ. Н. И. ПИРОГОВА
ПЕНТЮК АЛЕКСАНДР АЛЕКСЕЕВИЧ, ЛУЦЮК НИКОЛАЙ БОРИСОВИЧ, ГУЦОЛ ВЛАДИМИР ИВАНОВИЧ, ЯКОВЛЕВА ОЛЬГА АЛЕКСАНДРОВНА, АЛЬ ХАДУР РАМАДАН ХУСЕЙН
МПК / Метки
МПК: G01N 33/48
Метки: биологическом, материале, фосфолипидов
Опубликовано: 30.06.1987