Использующие люциферазу — C12Q 1/66 — МПК (original) (raw)

413191

Номер патента: 413191

Опубликовано: 30.01.1974

МПК: C12Q 1/66

Метки: 413191

...уксуснокислыми бактериями) через определенные промежутки времени, смешивают с люцигеиипом в щелочной среде и определяют интенсивность и продолжительность хемилюминесценции, по которым судят о глубине, окисления сорбита в сорбозу и жизнеспособности бактерий.Контроль ведут при рН, преимущественно равном 8 - 14,К пробам культуральиой жид емым через определенные пром ни, добавляют люцигенин, созд среду и определяют интенсивно яительность хемилюминесценц мость интенсивности хемилюми времени процесса окисления функцией у. а(Х -10 где у - интенсивность У Утах, х - продолж окисления; р - время, нс яения га 1 ах 15 Определение интенсив тельности хемилюминесц осуществлено, например,ков света, чувствительн вым и видимым лучам с 20...

Реагент для определения аденозин-5-трифосфата

Номер патента: 1041568

Опубликовано: 15.09.1983

Авторы: Беляева, Березин, Бровко, Угарова

МПК: C12Q 1/66

Метки: аденозин-5-трифосфата, реагент

...люциферазы в трис-(оксиметил)-аминометан-ацетатном буфере растворов люциферина, сульфата магния,ЭДТА, дитиотреитола в том же буфере.Реагент обладает повышенной стабильностью. Период его полуинактивации .при 4 С 40-50 дней, В лиофили 0зованном состоянии реагент хранится35при 4 вС без значительной потери ферментативной активности в течениегода, Стабильность полученного состава в несколько раз превышает стабиль"40ность индивидуального препарата иммобилизованной люциферазы.Наблюдаемый эффект являетсяследствием совместного присутствияв составе реагента иммобилизованно- .45го фермента, смеси ЭДТА с дитиотреитолом, трис-(оксиметил) -аминометан-ацетатного буфера и сульфата магния,При этом смесь ЭДТА с дитиотреитолоине оказывает...

Способ определения ” пороговой концентрации мембранотоксического действия химических веществ

Номер патента: 1090719

Опубликовано: 07.05.1984

Авторы: Данилин, Климина, Королюк, Шпигель

МПК: C12Q 1/66

Метки: веществ, действия, концентрации, мембранотоксического, пороговой, химических

...опытах 3.п чз 1 го,Целью изобретения является повышение точности и упрощение способа.Поставленная цель достигается 35тем, что согласно способу определения"1 п ч.Сго" пороговой концентрациимембранотоксического действия химических веществ с регистрацией биолюминесценции, эритроциты человека 40Инкубяруют "п ч 1 го" с химическимилвеществами концентрации от 1,0 к 10 Мдо 1,0 М и регистрируют выход АТФиз клеток хемилюминесцентным методом.Способ осуществляют следующим 45образом,В ряд пробирок, содержащих изотонический раствор хлористого натрия,вносят растворы исследуемых химических веществ, приготовленные с учетомих молекулярного веса, плотности икоэффициента. растворимости с концентрациями от 1,0 х 10 М до 1,0 М,В другой ряд пробирок...

Способ определения цитотоксичности пыли

Номер патента: 1263713

Опубликовано: 15.10.1986

Авторы: Косарев, Лотков, Шпигель

МПК: C12Q 1/66, G01N 21/76

Метки: пыли, цитотоксичности

...промышленных пылей,Цель изобретения - упрощение способа и повышение чувствительностивыявления непосредственно мембранного-повреждающего действия пыли наклетки.Укаэанная цель достигается тем,что эритроциты человека параллельно 10инкубируют с образцами различныхпылей одной и той же концентрации,затем центрифугируют и в надосадкеопределяют АТФ, вышедшую из поврежденных эритроцитов, биолюминесцентным 15методом путем введения в реакционнуюсреду высокоочищенного люцеферинлюцеферазного комплекса,П р и м е рПриготавливают взвеси кварцевой и доломитовой пыли в 2 Оследующих концентрациях, мг/мл: 2;0,2; 0,02. Затем в ряд пробирок,содержащих 0,1 мл эритроцитарноймассы и 0,8 мл Физиологического раствора прибавляют 0,1 мл взвеси пылив указанных...

Способ определения концентрации акрилонитрила

Номер патента: 1270658

Опубликовано: 15.11.1986

Авторы: Иванов, Кратасюк, Кручинина, Кузнецов, Фиш

МПК: C12Q 1/66, G01N 21/76

Метки: акрилонитрила, концентрации

...со скоростью 35 мэ/ч, в течение 5, 15,45 мин. ) при добавлении 5 мкл этихрастворов акрилонитрила 66,4; 34,2;24, отн.ед. При сравнении измеренных величин с калибровочной кривой70658 40 45 50 55 10 15 20 25 30 получают соответственно 19;60;78 мг/л, что соответствует 17,6;3,07, 0,74 мг/м акрилонитрила,В табл, 1 приведены примеры реализации способа при разном содержании люцифераэы в реакционной смеси,Иэ табл. 1 видно, что при уменьшении содержания люциЬеразы, увеличивается чувствительность способа,Однако, при уменьшении количества люциАеразы ниже 1,2 мкг, уменьшаетсяточность анализа, поэтому оптимальным для способа является интервал1,2-3,5 мкг люцийеразы (1,554,5 мкг/мл),В таЬл,2 приведены примеры реализации способа при разном...

Способ количественного определения адениновых нуклеотидов

Номер патента: 1317027

Опубликовано: 15.06.1987

Авторы: Березин, Дружинина, Кутузова, Угарова

МПК: C12Q 1/66

Метки: адениновых, количественного, нуклеотидов

...ферментов прямо пропорциональная зависимость наблюдается в диапазоне концентраций АТФ 10 пМ,10 мМ. Концентрацию АТФ в неизвестном образце определяют по полученному калибровочному графику, Предел обнаружения АТФ с помощью этого реагента составляет 10 пИ.1Определение АДФ.К 0,7 мл 0,1 м трис -ацетатного буфера рН 7,8, находящегося в пластиковой кювете для люминометра и содержащего 2 мМ ЭДТА, 10 мМ МяЯО, 20 мМ ацетата калия и 5 мИ фосфоенолпирувата, добавляют 50 мкл раствора АДФ известной, концентрации и 0,1 мл суспенэии соиммобилизованных ферментов (10 мг/мл) в том же буфере. После инкубирования смеси в течение 1 мин при комнатной температуре кювету помещают в люминометр, добавляют 0;3 мл люциферина до получения в кювете...

Способ определения никотинамидадениндинуклеотида окисленного

Номер патента: 1335570

Опубликовано: 07.09.1987

Авторы: Егоров, Ламзин, Лебедева, Угарова, Фрумкина

МПК: C12Q 1/66

Метки: никотинамидадениндинуклеотида, окисленного

...1 еа Ьагчеу 1.в 0,1 М Г 1 а-Ьосфатном буфере, рН 795 фс концентрацией белка 3 мг/мл и активностью 1000 мВ/мг белка, К полученному раствору добавляют 200 мгносителя и формиат натрия до концентрации 0,3 М. Суспензию перемешиваютн качалке 20 ч при 4 С. Полученные5570 У =0,51 х 5,8,55 с, 10 15 20 25 30 35 40 45 50 образцы отмывают попеременно кислыми (100 мл) и щелочными (100 мл) компонентами 0,1 М Г 1 а-фосфатного буферного раствора до исчезновения ферментативной активности в промывных водах, Отмытые образцы суспендируют в5 мл 0,1 М Г 1 а-фосфатного буфера, рН7,0, содержащего 0,1 мМ дитиотреитол,ои хранят при 4 С, Удельная активностьполученных препаратов 200-1000 мВ/мг,П р и м е р 2, Иммобилиэацияпроводится так же, как в примере 1,но...

Способ определения содержания алифатических альдегидов в растворе

Номер патента: 1472509

Опубликовано: 15.04.1989

Авторы: Данилов, Малков, Маргания

МПК: C12Q 1/66

Метки: алифатических, альдегидов, растворе, содержания

...0,05; магний сернокислый 0,01;пелтон 1,0; дрожжевой экстракт 0,2;хлористый натрий 0,3; остальное вода;культивируют при 18 С в течение16 ч; сепарируют клетки; инкубируютсуспензию клеток при перемешиваниипри 23 С в течение 3 ч в водномрастворе, содержащем, мас,Е: хлористьп натрий 0,3; глицерин 0,03; Тритон Х10 ; разводят суспензию клеток в 0,35%-ном водном растворехлористого натрия до оптическойплотности 1,0 при 540 нм; переносят1,0 мл суспензии клеток в кюветулюминометра; добавляют 0,01 мл раствора (Е-гексадеценаля и измеряютуровень биолюминесценции в течение5 с, Получают нижний предел определения гексадеценаля, равный1.10 мас.%,П р и м е р 2, Берут культурулюминесцирующих бактерий Р, Ьагеуь.с содержанием клеток 10 в 1 мл втводном...

Способ определения количества высокомолекулярных спиртов в растворе

Номер патента: 1495382

Опубликовано: 23.07.1989

Авторы: Данилов, Исмаилов, Киселева

МПК: C12Q 1/66

Метки: высокомолекулярных, количества, растворе, спиртов

...5 10 Известный Предлагаспособ гаемыйспособ 40 55Из таблицы видно, что пороговая чувствительность предлагаемого способа в 10 раз вьппе по сравнению с из-.вестным (для деканола). 24П р и м е р 1, Берут слеклянный стаканчик, снабженный мешалкой, и в нем готовят смесь следующего состава в 0,1 М фосфатном буфере, рН 7,9 (конечные концентрации): 10 М алкогольдегидрогеназы (АД) с активностью 25 ед/мг, 510 М никотинамидадениндинуклеотида (НАД), В смесь вносят 0,01 мл раствора додеканола и инкубируют при комнатной температуре и перемешивании 4 мин, Затем в реакционную смесь добавляют 0,005 мг/мп очищенной бактериальной люциферазы В, Ьагчеу с удельной активностью. 75 мВ/мг по дитиониту натрия, 2.10 М флавинмононуклеотида (фМН) и непосредственно...

Способ определения активности гликогенфосфорилазы

Номер патента: 1497218

Опубликовано: 30.07.1989

Авторы: Амелюшкина, Лебедева, Титов, Угарова, Фрумкина, Чернядьева

МПК: C12Q 1/66

Метки: активности, гликогенфосфорилазы

...ферментов готовят в 0,1 М Ба-фосфатном буферном растворе, рН 7,57.Удельная активность получаемых препаратов 30 Е/мл агарозы.П р и м е р 5, Иммобилиэацию проводят так же, как в примере 1 заисключением того, что раствор Ферментов готовят в 0,1 М Иа-фосфатном буферном растворе, рН 7,0. Удельная активность получаемых препаратов 25 Е/мл агарозы.П р и м е р 6, Определение активности глюкогенфосфорилаэы,При определении активности гликогенфосфорилазы в кювету люминометра последовательно вносят: 1 мл0,05 М трис-ацетатного буферногораствора, рН 6,8-7,0, 0,05 мл раствора гликогенфосфорилазы, 0,05 млраствора, содержащего 0,06 М ацетата магния, 30 мг/мп гликогена,0,15 мМ глюкозо,6-дифосфата.Смесьинкубируют в течение 8-12 мин при30 С. Затем в кювету...

Способ определения над-зависимой формиатдегидрогеназы

Номер патента: 1518376

Опубликовано: 30.10.1989

Авторы: Авилова, Егоров, Егорова, Карзанов, Лебедева, Угарова

МПК: C12Q 1/66

Метки: над-зависимой, формиатдегидрогеназы

...реагенты по примеру 1Интенсивность свечения 12 мВ н 1 мин, соответствующая 2,4 10 М формиатдегидрогенаэы.П р и м е р 6, В кювету люминометра помещают 2 мп клеточной суспензии по примеру 1, но в 207"ном растворе глицерина., Лобавляют 100 мкл0,25 нМ раствора ФИН н воде и остальные реагенты по примеру . Интенсинность свечения составляет 22 мВ н 7661 мин, что соответствует 4,4 1 О "1формиатдегидрогеназы,П р и м е р 7, В кювету люминометра помещают 2 мл клеточной суспензиипо примеру 1, но и 257,-ном раствореглицерина. Добавляют 100 мкл 0,25 нМраствора ФМН в воде и остальные реагентыпо примеру 1, Интенсивность свечениясоставляет 21 мВ н 1 мин, что соответствует 4,2 1 О " М формиатдегидрогеназы,П р и м е р 8. В кювету люминометра помещают 2...