Сьюллен — Автор (original) (raw)

Сьюллен

Способ экспрессии dacsdaocs активности в клетках еsснеriснiа coli

Номер патента: 1838413

Опубликовано: 30.08.1993

Метки: dacsdaocs, активности, еsснеriснiа, клетках, экспрессии

...в 2,8 л колбы ГогпЬасЬ и дополнительно инкубировались в течение часа при 30 С в тех же условиях выращивания, Температура воздушного встряхивателя затем повышалась до 42 С, инкубация продолжалась дополнительно в течение 6,5 ч. Чувствительный к температуре репрессор с 1857 лямбда р промотора, установленный таким образом, что обеспечивалась экспрессия ОАСЯ/ОАОСЯ на плазмиде рТ 507, был инактивирован при 42 С и, таким образом, допускал экспрессию ОАСЗ/ОАОСЗ. После инкубации клетки собирались путем центрифугирования и использовались как предпочтительный источник продуцирования активности ОАСЯ/ОАОСЗ.В. Иллюстрация активностей экспандазы и гидроксилазы в клетках Е.со 1 К 12 1 М 109/р 1 Т 507, выращенных при 42 С,Пример 14 г (сырая масса)...

Способ конструирования рекомбинантной плазмидной днк pps 20, кодирующей изопенициллин-n-синтетазу, способ получения штамма сернаlоsроriuм асrемоniuм, обладающего активностью изопенициллин-n-синтетазы

Номер патента: 1780542

Опубликовано: 07.12.1992

Авторы: Поль, Стефен, Сьюллен, Томас

МПК: C12N 15/52, C12N 15/80

Метки: активностью, асrемоniuм, днк, изопенициллин-n-синтетазу, изопенициллин-n-синтетазы, кодирующей, конструирования, обладающего, плазмидной, рекомбинантной, сернаlоsроriuм, штамма

...3,7 ХааРестрикцибуфера и 85 мкл Н 20. Около 5 мкл (50 еди онного фрагмента получают и суспендир ютниц) рестрикционного фермента Н 1 пб - И 1 в 10 мкл Н 20.добавляют к раствору ДНК и полученный В, Окончательное конструированиераствор инкубируют при 37 С в течение 2 ч. плэзмид РРЯ 30 и РРЯ 30,1.Н 1 пб- расщепленную плазмиднуюРРЯ 21 А ДНК помещают на 1 агарозный 40 . Около 1 мкг плэз ДНКг плэзмиднои Д растворягель и проводят электрофорез до тех пор, ют в 2 мкл 10 Х Хмкл аа рестрикционного буфеН 1 пб - И 1пока. 3,45 кв, 3,16 кв, 1,2 кви 69 кв ра и 6 мкл Н О. 0 2и - рестрикционные фрагменты не ста- рестрикционного фермента Хаа 1 добавляновятся четко выделенными на геле. Выде- ют к раствор " ДЙКляют Н 1 пб - И 1ляют и - рестрикционный...

Способ конструирования рекомбинантной плазмидной днк, кодирующей фермент деацетоксицефалоспорин с синтетазудеацетилцефалоспорин с синтетазу

Номер патента: 1739856

Опубликовано: 07.06.1992

Авторы: Поль, Стефен, Сьюллен, Томас

МПК: C12N 15/52

Метки: деацетоксицефалоспорин, днк, кодирующей, конструирования, плазмидной, рекомбинантной, синтетазу, синтетазудеацетилцефалоспорин, фермент

...связуйщей 5 молекулы обрабатывают Т 4 ДНК"кинаэойи затем аннелируют с.образованиемнеповрежденной связуюцей молекулы.1 мкл гидролизованной Ваш Н 1 ДНКплазмиды рМЬС 12 лигируют с 4 мкл 1 О Бсо 1 - Нсо 1 фрагмента плазмидырЬС 1 и 10 мкл аннелированной связующей молекулы.Лигазной смесью трансформируютЕ.со 1 Аликвоты трансформированной 15 клеточной смеси вжевают на чашкахс Ь-агаром, содержащим 25 мкг/млхлорамфеникола, 40 мкг/мл Х-да 1.и40 хмкг/мл 1 РТС. Чашки инкубируютнри 37 С в течение ночи. Колонии,окоторые содержат плазмиду беэ вставки, такие как Е.со 1 К 12 М 109//рМЬС 12, проявляют синий цвет наэтих чашках. Колонии, которые содержат плазмиду с вставкой, такие какЕ.со 11 К 12 1 М 109/рРБ 53, проявляютбелый цвет на этих чашках,...

Способ получения рекомбинантной плазмидной днк pit337, экспрессирующей изопенициллин-n-синтетазу

Номер патента: 1623567

Опубликовано: 23.01.1991

Авторы: Поль, Стефен, Сьюллен, Томас

МПК: C12N 15/52

Метки: pit337, днк, изопенициллин-n-синтетазу, плазмидной, рекомбинантной, экспрессирующей

...с 5 мкл1,5 МЬ Л 3 сог-ВагпН 1 рестрикционного фрагмента ппазмиды р 11335 до получения плазмиды 1. 7337, Реакционный объем составляет О мкл и включает указанные фрагментыДНК, 1,1 мкл ( 100 ед,) Т 4 ДНК лигазы, 3мкл 10-кратного лигирующего буфера (0,5 Мтрис-НС 1, рН 7,8; 100 мМ М 9 С 1 г; 200 мМ дитиотреитола ЭДТТ); 100 мМ АТР; и 1 мг/млВЯА/ и 13,4 мкл НгО. Реакционную смесьинкубируют при 15 С в течение 2 ч, послечего реакция практически завершается. Лигированная ДНК составляет целевую плаэмидную ДНК рТ 337.С, Конструирование Е,со 1 К 12ЯЧ 308/рТ 337.А, Конструирование Е.со К 12ЯЧ 308/ р 1 Т 337,50 мл культуры Е,со 1 К 12 ЯЧ 308 (ИЯЯВ - 15624) в-бульоне выращивают доО.Д 59 о 0,5 единиц поглощения, Культуруохлаждают на льду в...