Гены, кодирующие ферменты или проферменты — C12N 15/52 — МПК (original) (raw)
Способ получения рекомбинантной плазмидной днк pit337, экспрессирующей изопенициллин-n-синтетазу
Номер патента: 1623567
Опубликовано: 23.01.1991
Авторы: Поль, Стефен, Сьюллен, Томас
МПК: C12N 15/52
Метки: pit337, днк, изопенициллин-n-синтетазу, плазмидной, рекомбинантной, экспрессирующей
...с 5 мкл1,5 МЬ Л 3 сог-ВагпН 1 рестрикционного фрагмента ппазмиды р 11335 до получения плазмиды 1. 7337, Реакционный объем составляет О мкл и включает указанные фрагментыДНК, 1,1 мкл ( 100 ед,) Т 4 ДНК лигазы, 3мкл 10-кратного лигирующего буфера (0,5 Мтрис-НС 1, рН 7,8; 100 мМ М 9 С 1 г; 200 мМ дитиотреитола ЭДТТ); 100 мМ АТР; и 1 мг/млВЯА/ и 13,4 мкл НгО. Реакционную смесьинкубируют при 15 С в течение 2 ч, послечего реакция практически завершается. Лигированная ДНК составляет целевую плаэмидную ДНК рТ 337.С, Конструирование Е,со 1 К 12ЯЧ 308/рТ 337.А, Конструирование Е.со К 12ЯЧ 308/ р 1 Т 337,50 мл культуры Е,со 1 К 12 ЯЧ 308 (ИЯЯВ - 15624) в-бульоне выращивают доО.Д 59 о 0,5 единиц поглощения, Культуруохлаждают на льду в...
Способ конструирования рекомбинантной плазмидной днк, кодирующей фермент деацетоксицефалоспорин с синтетазудеацетилцефалоспорин с синтетазу
Номер патента: 1739856
Опубликовано: 07.06.1992
Авторы: Поль, Стефен, Сьюллен, Томас
МПК: C12N 15/52
Метки: деацетоксицефалоспорин, днк, кодирующей, конструирования, плазмидной, рекомбинантной, синтетазу, синтетазудеацетилцефалоспорин, фермент
...связуйщей 5 молекулы обрабатывают Т 4 ДНК"кинаэойи затем аннелируют с.образованиемнеповрежденной связуюцей молекулы.1 мкл гидролизованной Ваш Н 1 ДНКплазмиды рМЬС 12 лигируют с 4 мкл 1 О Бсо 1 - Нсо 1 фрагмента плазмидырЬС 1 и 10 мкл аннелированной связующей молекулы.Лигазной смесью трансформируютЕ.со 1 Аликвоты трансформированной 15 клеточной смеси вжевают на чашкахс Ь-агаром, содержащим 25 мкг/млхлорамфеникола, 40 мкг/мл Х-да 1.и40 хмкг/мл 1 РТС. Чашки инкубируютнри 37 С в течение ночи. Колонии,окоторые содержат плазмиду беэ вставки, такие как Е.со 1 К 12 М 109//рМЬС 12, проявляют синий цвет наэтих чашках. Колонии, которые содержат плазмиду с вставкой, такие какЕ.со 11 К 12 1 М 109/рРБ 53, проявляютбелый цвет на этих чашках,...
Способ получения человеческой м о -дисмутазы
Номер патента: 1741610
Опубликовано: 15.06.1992
Авторы: Андреас, Вальтер, Ингрид, Конрад, Кристиан, Мария, Рудольф, Эдельтрауд, Элинборг
МПК: C12N 15/52, C12N 15/81
Метки: дисмутазы, человеческой
...мИ, рН 5,5) .в) Катионообменная хроматография.Содержащий МпО-дисмутазу диали"зат со стадии "б" подают на колонкус СИ"сефарозой; уравновешенную 60 мИтрис-уксусной кислотой, рН 5,5,злюируют линейным градиентом (15объемов колонки) от 60 мИ трис-уксус,.ной кислоты до 0,12 И ацетата натрия,г) Гельпроникающая хроматография,фракции с активностью МпО-дисму 35тазы со.стадии "в" собирают и подаютна колонку, содержащуюсефакрил Б300 НК или суперозу 12, уравновешенную 0,1 И фосфатным буфером, рН=7,8. 10 . 38Элюцию проводят тем же буфером.Получают 20 мг (1,1 мг/г клетки) чИпО-дисмутазы. формула иэобретения Способ получения человеческой МпО"дисмутазы, заключающийся в том, что из плацентарной или печеночной ткани человека выделяют мРНК, получают...
Способ конструирования рекомбинантной плазмидной днк pps 20, кодирующей изопенициллин-n-синтетазу, способ получения штамма сернаlоsроriuм асrемоniuм, обладающего активностью изопенициллин-n-синтетазы
Номер патента: 1780542
Опубликовано: 07.12.1992
Авторы: Поль, Стефен, Сьюллен, Томас
МПК: C12N 15/52, C12N 15/80
Метки: активностью, асrемоniuм, днк, изопенициллин-n-синтетазу, изопенициллин-n-синтетазы, кодирующей, конструирования, обладающего, плазмидной, рекомбинантной, сернаlоsроriuм, штамма
...3,7 ХааРестрикцибуфера и 85 мкл Н 20. Около 5 мкл (50 еди онного фрагмента получают и суспендир ютниц) рестрикционного фермента Н 1 пб - И 1 в 10 мкл Н 20.добавляют к раствору ДНК и полученный В, Окончательное конструированиераствор инкубируют при 37 С в течение 2 ч. плэзмид РРЯ 30 и РРЯ 30,1.Н 1 пб- расщепленную плазмиднуюРРЯ 21 А ДНК помещают на 1 агарозный 40 . Около 1 мкг плэз ДНКг плэзмиднои Д растворягель и проводят электрофорез до тех пор, ют в 2 мкл 10 Х Хмкл аа рестрикционного буфеН 1 пб - И 1пока. 3,45 кв, 3,16 кв, 1,2 кви 69 кв ра и 6 мкл Н О. 0 2и - рестрикционные фрагменты не ста- рестрикционного фермента Хаа 1 добавляновятся четко выделенными на геле. Выде- ют к раствор " ДЙКляют Н 1 пб - И 1ляют и - рестрикционный...
Способ получения рекомбинантного активированного белка с человека
Номер патента: 1830081
Опубликовано: 23.07.1993
Авторы: Брайан, Нилс, Стэнли, Хармут
МПК: C12N 15/52, C12N 15/84
Метки: активированного, белка, рекомбинантного, человека
...10 Х, 1 мкл лигазы Т 4 ДНК ( 500 ед) и 82 мкл Н 2 О при 16"С втечение ночи, Сшитая ДНК представляет собой желаемую плаэмиду рзч 2- Н РС 8.Клетки Е,соИ К 12 ЙР ,Вйе В) превращают в компетентные клетки для трансформации в соответствии с процедурой, описанной для Е.соИ К 12 НВ 101, Сшитую ДНК, полученну;о как описано выше, используют для трансформации данньх клеток, а аликвоты трансформантов высеваот на чашки с 1-агаром, содержащим 100 мкг/мл ампициллина, Затем чашки инкубируют при 37"С, Трансформанты Е,соИ К 12 КВ 1/рзч 2-Н РС 8 исследуют путем анализа их ДНК, Получают ДНК плазмидь рзч 2- НРС 8 из трансформантов,50 мкг плаэмиды рзч 2-НРС 8 растворяют в 10 мкл реакционного буферного раствора 1 ОХ Н 1 пд И 1, 5 мкл (50 ед) фермента Ни( 1 И...
Способ экспрессии dacsdaocs активности в клетках еsснеriснiа coli
Номер патента: 1838413
Опубликовано: 30.08.1993
Авторы: Поль, Стефен, Сьюллен, Томас
МПК: C12N 15/52
Метки: dacsdaocs, активности, еsснеriснiа, клетках, экспрессии
...в 2,8 л колбы ГогпЬасЬ и дополнительно инкубировались в течение часа при 30 С в тех же условиях выращивания, Температура воздушного встряхивателя затем повышалась до 42 С, инкубация продолжалась дополнительно в течение 6,5 ч. Чувствительный к температуре репрессор с 1857 лямбда р промотора, установленный таким образом, что обеспечивалась экспрессия ОАСЯ/ОАОСЯ на плазмиде рТ 507, был инактивирован при 42 С и, таким образом, допускал экспрессию ОАСЗ/ОАОСЗ. После инкубации клетки собирались путем центрифугирования и использовались как предпочтительный источник продуцирования активности ОАСЯ/ОАОСЗ.В. Иллюстрация активностей экспандазы и гидроксилазы в клетках Е.со 1 К 12 1 М 109/р 1 Т 507, выращенных при 42 С,Пример 14 г (сырая масса)...
Рекомбинантная плазмида pcu 201 и штамм escherichia coli к 12 с 600, продуцирующий термостабильную -глюкозидазу
Номер патента: 1547312
Опубликовано: 15.03.1994
Авторы: Великодворская, Метт, Могутов, Пирузян, Царейкина, Юрьев
МПК: C12N 1/21, C12N 15/52
Метки: escherichia, глюкозидазу, плазмида, продуцирующий, рекомбинантная, термостабильную, штамм
1. Рекомбинантная плазмида pCU 201, содержащая ген термостабильной -глюкозидазы, состоящая из плазмиды pBR 322, в Bam HI сайт которой клонирован фрагмент ДНК размером 4,1 тпн, полученный при частичном гидролизе рестриктазой Sau-3А ДНK Clostridium thermocellum и содержащий в своем составе ген термостабильной при 60oС -глюкозидазы.2. Штамм Escherichia coli К 12 С 600, содержащий плазмиду pCU 201, коллекция Центрального музея промышленных микроорганизмов института ВНИИ генетика, продуцирующий термостабильную -глюкозидазу.
Способ получения обратной транскриптазы вируса саркомы рауса
Номер патента: 1490961
Опубликовано: 15.07.1994
Авторы: Мельников, Петер, Фодор, Янош
МПК: C12N 15/52
Метки: вируса, обратной, рауса, саркомы, транскриптазы
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПТАЗЫ ВИРУСА САРКОМЫ РАУСА, заключающийся в том, что в плазмиду pUC9 непосредственно за Iac-промотором с помощью лигазы встраивают Pst - XhoI-фрагменты плазмиды pSRA-2, полученной смесью ДНК трансформируют клетки E.coli, после чего по устойчивости к антибиотику отбирают трансформированные клетки, из которых выделяют ДНК, затем из них по молекулярной массе отбирают ДНК, которая содержит набор последовательностей, обеспечивают репрессию и экспрессию вирусного pol-гена и связывание его мРНК с рибосомой, а также последовательности, инициирующие и терминирующие трансляцию, затем выделенной рекомбинантной ДНК трансформируют клетки E. coli HB 101, после культивирования бактериальные клетки разрушают и выделяют...
Рекомбинантная плазмидная днк pbanp 464, кодирующая металлопротеиназу bacillus amyloliquefaciens a-50 и штамм бактерий bacillus amyloliquefaciens продуцент металлопротеиназы.
Номер патента: 1679800
Опубликовано: 09.01.1995
Авторы: Гервинскас, Дебабов, Изотова, Йомантас, Козлов, Народицкая, Стеркин, Стронгин, Уланова
МПК: C12N 15/52, C12N 15/72
Метки: amyloliquefaciens, bacillus, pbanp, бактерий, днк, кодирующая, металлопротеиназу, металлопротеиназы, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, штамм
РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pBANP 464, КОДИРУЮЩАЯ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗУ BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS A-50 И ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS - ПРОДУЦЕНТ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗЫ .1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pBANP463, кодирующая металлопротеиназу Bacillus amyloliquefaciens A-50 размером 6,3 т.п.н. и содержащая: плазмидную ДНК pBA4 размером 4,4 т.п.н., в которой с помощью фрагмента Кленова ДНК-полимеразы 1 удален в полилинкерной последовательности участок узнавания эндонуклеазы рестрикции EcoRI; B8l 11 - B8l 11 - фрагмент размером 1,9 т.п. н. с геном металлопротеиназы B.amyloliquefaciens А-50, гены: npr-ген, кодирующий синтез металлопротеиназы, emrC-ген, детерминирующий устойчивость клеток к эритромицину,...
Рекомбинантная плазмидная днк pur 290 s e, кодирующая гибридный полипептид -галактозидаза-ns 1-белок вируса клещевого энцефалита, и способ ее конструирования
Номер патента: 1679798
Опубликовано: 27.08.1995
Авторы: Горн, Плетнев, Пугачев, Ямщиков
МПК: C12N 1/21, C12N 15/33, C12N 15/52 ...
Метки: 1-белок, вируса, галактозидаза-ns, гибридный, днк, клещевого, кодирующая, конструирования, плазмидная, полипептид, рекомбинантная, энцефалита
1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pUR 290 S E, кодирующая гибридный полипептид галактозидаза NSI-белок вируса клещевого энцефалита, размером 6447 п.о. и мол.м. 4,25 МД, содержащая: Hin d III Sal I-фрагмент ДНК плазмиды pUR 290 размером 5200 п.о. Hind III-конец которого достроен фрагментом Кленова ДНК-полимеразы 1 E.coli; Alu I Msp I-фрагмент ДНК-плазмиды pTBE 2 размером 109 п.о. Alu I-конец которого заменен на Sal I-конец; Msp I Cfr 10 I-фрагмент ДНК-вируса клещевого энцефалита размером 572 п.о. Cfr 10 I Hind III фрагмент ДНК-плазмиды p621-11 размером 540 п.о. Hind III EcoRI синтетический фрагмент ДНК,...
Рекомбинантная плазмидная днк рuавс, кодирующая активатор плазминогена урокиназного типа, способ ее конструирования и штамм бактерий escherichia coli продуцент активатора плазминогена урокиназного типа
Номер патента: 1692151
Опубликовано: 27.10.1995
Авторы: Белогуров, Бибилашвили, Горюнова, Дельвер, Домкин, Ефимова, Рыбалкин, Савочкина, Сидоров, Скамров, Ченчик, Шевелев, Южаков
МПК: C12N 15/52, C12N 15/81, C12N 9/72 ...
Метки: escherichia, активатор, активатора, бактерий, днк, кодирующая, конструирования, плазмидная, плазминогена, продуцент, рuавс, рекомбинантная, типа, урокиназного, штамм
1. Рекомбинантная плазмидная ДНК рUАВС, кодирующая активатор плазминогена урокиназного типа размером 4,11 тпо, содержащая: Xba I Bgl I фрагмент ДНК вектора рUС19 размером 1,39 тпо; Bgl I Pst I фрагмент ДНК вектора рUС18 размером 1,28 тпо; Pst I Xba I фрагмент кДНК урокиназы человека размером 1,44 тпо; по три сайта рестрикции Асе I, Pst I; по два сайта рестрикции Bgl I, Hind III, EcoR I; по одному сайту рестрикции BamH I, Xba I; участок инициации репликации и промоторно-операторную область lac-оперона; генетические маркеры; Amp ген устойчивости к ампициллину.2. Способ конструирования рекомбинантной плазмидной ДНК рUАВС, заключающийся в том, что ЕсоR I Pst I фрагмент кДНК урокиназы человека размером 0,60 тпо, полученный в результате...
Фрагмент днк amyamyllich i, кодирующий гибридную термостабильную -амилазу, способ его конструирования, рекомбинатная плазмидная днк prtlich, кодирующая гибридную термостабильную -амилазу, способ ее конструирова
Номер патента: 1626682
Опубликовано: 27.05.1999
Авторы: Баев, Миронов, Смирнова, Сорокин
МПК: C12N 15/52
Метки: amyamyllich, prtlich, амилазу, гибридную, днк, кодирующая, кодирующий, конструирова, конструирования, плазмидная, рекомбинатная, термостабильную, фрагмент
1. Фрагмент ДНК amyamyllich I, кодирующий гибридную термостабильную -амилазу, полученный в результате замены нуклеотидных остатков с 562 по 690 на гомологичный фрагмент ДНК, кодирующий часть -амилазы Bacillus licheniformis без регулярной области, со следующей нуклеотидной последовательностью фрагмента amyamyllich I:2. Способ конструирования фрагмента ДНК amyamyllich I, заключающийся в том, что однонитевую ДНК рекомбинантного фага M13mWBamy , содержащего часть фрагмента ДНК,...
Фрагмент днк amyamyllich 6, кодирующий гибридную термостабильную -амилазу, способ его конструирования, рекомбинатная плазмидная днк pptlich 6, кодирующая гибридную термостабильную -амилазу, способ ее конструиро
Номер патента: 1626683
Опубликовано: 27.05.1999
Авторы: Баев, Миронов, Смирнова, Сорокин
МПК: C12N 15/52
Метки: amyamyllich, pptlich, амилазу, гибридную, днк, кодирующая, кодирующий, конструиро, конструирования, плазмидная, рекомбинатная, термостабильную, фрагмент
1. Фрагмент ДНК amyamyllich 6, кодирующий гибридную термостабильную -амилазу, полученный в результате замены нуклеотидных остатков с 562 по 680 на гомологичный фрагмент ДНК, кодирующий часть -амилазы Bacillus licheniformis без регуляторной области, со следующей нуклеотидной последовательностью фрагмента amyamyllich 6:2. Способ конструирования фрагмента ДНК amyamyllich 6, заключающийся в том, что однонитевую ДНК рекомбинантного фага M13mWBamy , содержащего часть фрагмента ДНК,...