Feulgen stain (original) (raw)
Der Nachweis nach Feulgen und Rossenbeck, oder kurz die Feulgenreaktion, ist eine von Joachim Wilhelm Robert Feulgen 1924 mitentwickelte histochemische Methode zum Nachweis von Desoxyribonukleinsäure (DNA).Zunächst wird in der zu analysierenden Probe (Gewebeprobe, Probe von Mikroorganismen) die DNA durch Salzsäure hydrolysiert, wobei die Molekülverbindungen von Base und Zucker getrennt werden. Es entstehen freie Aldehydgruppen. Die Aldehyde ergeben mit fuchsinschwefliger Säure (Schiffs Reagenz) eine rotviolette Färbung.Eine Erkennung dieser DNA-Reste ist nun unter dem Mikroskop möglich. Optional kann mit Lichtgrün SF gegengefärbt werden.
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| dbo:abstract | Der Nachweis nach Feulgen und Rossenbeck, oder kurz die Feulgenreaktion, ist eine von Joachim Wilhelm Robert Feulgen 1924 mitentwickelte histochemische Methode zum Nachweis von Desoxyribonukleinsäure (DNA).Zunächst wird in der zu analysierenden Probe (Gewebeprobe, Probe von Mikroorganismen) die DNA durch Salzsäure hydrolysiert, wobei die Molekülverbindungen von Base und Zucker getrennt werden. Es entstehen freie Aldehydgruppen. Die Aldehyde ergeben mit fuchsinschwefliger Säure (Schiffs Reagenz) eine rotviolette Färbung.Eine Erkennung dieser DNA-Reste ist nun unter dem Mikroskop möglich. Optional kann mit Lichtgrün SF gegengefärbt werden. (de) Feulgen stain is a staining technique discovered by Robert Feulgen and used in histology to identify chromosomal material or DNA in cell specimens. It is darkly stained. It depends on acid hydrolysis of DNA, therefore fixating agents using strong acids should be avoided. The specimen is subjected to warm (60 °C) hydrochloric acid, then to Schiff reagent. In the past, a sulfite rinse followed, but this is now considered unnecessary. Optionally, the sample can be counterstained with Light Green SF yellowish. Finally, it is dehydrated with ethanol, cleared with xylene, and mounted in a resinous medium. DNA should be stained red. The background, if counterstained, is green. The Feulgen reaction is a semi-quantitative technique. If the only aldehydes remaining in the cell are those produced from the hydrolysis of DNA, then the technique is quantitative for DNA. It is possible to use an instrument known as a microdensitometer or microspectrophotometer to actually measure the intensity of the pink Feulgen reaction for a given organelle. Using this procedure, it was early determined that interphase cells were composed of two populations, those with diploid DNA and those with tetraploid DNA (two complete genomes). The nuclei looked identical, but one contained twice as much DNA. This gave rise to the division of the interphase period of the cell cycle to G1, S, and G2 phases based on the synthesis of that extra DNA. (en) La tinción de Feulgen es una técnica de tinción descubierta por Robert Feulgen y usada en histología para identificar material cromosómico o ADN en células. Depende de la hidrólisis ácida del ADN. El material es sometido a una hidrólisis con ácido clorhídrico 1N a 60 °C, o 5N a temperatura ambiente, y luego al reactivo de Schiff. La reacción Feulgen es una técnica semicuantitativa. Si el único aldehído que queda en la célula son los producidos de la hidrólisis del ADN, ahí la técnica es cuantitativa para el DNA. Es posible usar un instrumento, conocido como o para medir la intensidad de la reacción Feulgen para un orgánulo. Usando este proceso se determinó que, en interfase, las células estaban compuestas de dos grupos de cromosomas. Uno con un grupo diploide y otro con un grupo tetraploide (dos grupos genómicos completos). El núcleo se observaba idéntico, pero uno de ambos poseía el doble de ADN. Esto dio a la división del periodo que conocemos como interfase en el ciclo celular a G1, S y G2 basados en la síntesis de ADN. (es) La coloration de Feulgen a été mise au point en 1924 par le chimiste allemand Robert Feulgen (1884-1955). Elle permet la mise en évidence des chromosomes et leur observation au microscope photonique. Elle est particulièrement utile lorsque ceux-ci se trouvent sous une forme polyténique. Les bandes colorées rosées qui apparaissent alors correspondent aux gènes, et les bandes claires aux régions intergéniques. Le principe de la méthode est de dissocier les deux brins d'ADN grâce à une hydrolyse ménagée par l'acide chlorhydrique (HCl) et de colorer ensuite ceux-ci au moyen de la fuchsine qui réagit avec les fonctions réductrices de l'ADN. Elle s'appuie sur la formation du groupement réducteurs mis a jour par l'élimination de bases puriques après l'hydrolyse ménagée de l'ADN en présence d'acide chlorhydrique qui sont recolorés par le réactif de Schiff 1) Hydrolyse modérée de l'ADN par HCl à 60° Dans l'ADN le désoxyribose n'est pas réducteur, le carbone étant impliqué dans une liaison N-osidique. l'HCl sépare les deux bases puriques de l'ADN: Adénine, Guanine, libérant les fonctions hémiacétaliques des désoxyriboses. Le squelette de l'ADN n'est pas modifié et reste en place. 2) Une coloration de l'ADN restant par le réactif de schiff Le réactif de Schiff réagit alors avec les fonctions réductrices formant un précipité rouge. Donc l'ADN est coloré en rose rouge. * Portail de la chimie * Portail des couleurs (fr) フォイルゲン染色は細胞内のDNAを検出するために用いられる組織化学の手法である。1924年にが発見した手法で、希塩酸によりDNAのプリン塩基を除去し、現れた遊離アルデヒド基に亜硫酸フクシン（シッフ試薬）を結合させ、赤紫色の化合物を形成させるものである。 DNAの酸加水分解による方法なので、強酸を用いた固定法は使えない。試料はまず60°Cの1N塩酸で処理した後にと反応させる。従来はさらに亜硫酸水ですすいでいたが、不必要だと考えられている。これによりDNAが赤紫色に染まる。で対比染色（緑色）する場合がある。 フォイルゲン反応は半定量的な手法である。仮に細胞中のアルデヒド基が全てDNAの加水分解に由来するのであれば、定量的となる。やを使えばフォイルゲン反応で生じた色素を定量することができる。この方法により、細胞周期のうち間期の細胞には見かけは同じでもDNA含量が倍になっているものがあるということが判明し、これにより間期をG1・S・G2の3つに分割するようになった。 (ja) La reazione di Feulgen è una metodologia di colorazione istochimica per evidenziare il DNA su sezioni di tessuto preparate per la microscopia ottica. La colorazione di Feulgen è stata sviluppata nel 1924 dal chimico e fisiologo tedesco Robert Feulgen. In particolare consente di osservare i cromosomi al microscopio ottico; è particolarmente utile quando questi sono in forma politenica. Le bande di colore rosato che poi compaiono corrispondono ai geni, e le bande chiare alle regioni intergeniche. Si utilizza l'acido cloridrico e il reattivo di Schiff per colorare il DNA in rosso magenta, mentre non colora l'RNA. La metodica è quindi utile per differenziare il DNA dal RNA, che sono entrambi basofili. (it) Metoda Feulgena - wynaleziona przez , pozwala na selektywne barwienie DNA lub materiału chromosomowego. Oparta na kwasowej hydrolizie DNA, które barwi się na czerwono. W określonych warunkach, może być wykorzystywana do kolorymetrycznego zwykle półilościowego (możliwe jest też ilościowe) oznaczania DNA w tkankach. Reakcja przebiega w dwóch etapach. Najpierw badaną próbkę poddaje się działaniu HCl przez 8-10 min. w podwyższonej temperaturze. Następnie natychmiast traktuje się ją odczynnikiem Schiffa w temperaturze pokojowej przez co najmniej 30 min., aż do momentu gdy tkanka nabierze purpurowego zabarwienia. Dalej materiał jest ugniatany w obecności . Barwienie jest trwałe i preparat można przechowywać w obniżonej temperaturze, jakkolwiek zalecane jest wykonywanie analizy zaraz po barwieniu. Kwasowa hydroliza pozwala usunąć zasady purynowe z DNA powodując odsłonięcie grup aldehydowych, które mogą wówczas reagować z odczynnikiem Schiffa, w wyniku czego pojawia się purpurowe zabarwienie. Jeśli aldehydy w próbie pochodzą wyłącznie z DNA, wtedy możliwe jest jego oznaczenie ilościowe. RNA nie ulega hydrolizie dzięki czemu metoda Feulgena jest DNA-selektywna. (pl) |
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