Electrophoretic mobility shift assay (original) (raw)
Der Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) oder Band Shift Assay ist eine Affinitätselektrophorese und dient zum Nachweis von DNA- oder RNA-bindenden Proteinen, beispielsweise Transkriptionsfaktoren.
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| dbo:abstract | Der Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) oder Band Shift Assay ist eine Affinitätselektrophorese und dient zum Nachweis von DNA- oder RNA-bindenden Proteinen, beispielsweise Transkriptionsfaktoren. (de) An electrophoretic mobility shift assay (EMSA) or mobility shift electrophoresis, also referred as a gel shift assay, gel mobility shift assay, band shift assay, or gel retardation assay, is a common affinity electrophoresis technique used to study protein–DNA or protein–RNA interactions. This procedure can determine if a protein or mixture of proteins is capable of binding to a given DNA or RNA sequence, and can sometimes indicate if more than one protein molecule is involved in the binding complex. Gel shift assays are often performed in vitro concurrently with DNase footprinting, primer extension, and promoter-probe experiments when studying transcription initiation, DNA gang replication, DNA repair or RNA processing and maturation, as well as pre-mRNA splicing. Although precursors can be found in earlier literature, most current assays are based on methods described by Garner and Revzin and Fried and Crothers. (en) Le retard sur gel (EMSA ou electrophoretic mobility shift assay) est une technique de biologie moléculaire permettant de détecter une interaction entre une protéine et de l'ADN ou de l'ARN (du moins, une sonde oligonucléotidique). (fr) El ensayo de cambio en la corrida electroforética o EMSA por sus iniciales en inglés (electrophoretic mobility shift assay) es una técnica utilizada para investigar interacciones entre proteínas y ADN o ARN. La técnica se basa en una corrida electroforética entre fragmentos de ADN o ARN marcados y la presencia de extractos celulares. El ensayo básico para el ADN consiste en un carril solo con el fragmento de ADN de interés marcado, un segundo carril con el mismo ADN más proteínas que, en las condiciones dadas, no interaccionan con el mismo, y el tercer carril conteniendo el mismo fragmento de ADN más las proteínas con supuesta interacción con esa secuencia. Dependiendo del resultado del tercer carril se puede determinar si existió o no interacción. Un fragmento de ADN interaccionando con proteínas tiende a recorrer menos distancia a través del gel en el mismo tiempo que en los carriles 1 o 2, y por lo tanto se debería ver retrasado.Esta técnica está basada en los trabajos de Garner y Revzin y Fried y Crothers (es) ゲルシフトアッセイとは特定の塩基配列をもつ核酸断片とタンパク質の結合を調べる実験系。転写因子の結合配列の解析に広く用いられる。EMSA (Electrophoresis Mobility Shift Assay) とも呼ばれる。 原理は核酸断片にタンパク質が結合すると核酸断片のみの場合よりも総体として分子量が大きくなるということで、この結果電気泳動で遅く流れること（移動度 mobility の違い）を利用して可視化する。 具体的な例としては、リンの放射性同位体でDNA断片を標識し、タンパク質と混合したのち、ポリアクリルアミドゲルで展開し、オートラジオグラフィーによって分析する。遊離しているDNA断片は早く流れるため下部にくるが、タンパク質が結合した断片はゆっくり流れるために上部にバンドとしてあらわれる。 (ja) EMSA(Electrophoresis Mobility Shift Assay)는 분자생물학 기법 중 하나로, 핵산(DNA, RNA)와 단백질의 상호작용을 확인하는데 사용된다. EMSA를 이용하여 단백질이 핵산의 특정 서열과 결합하는지 알 수 있다. 기법에 따라서 하나 이상의 단백질도 알아낼 수 있으며, 상호작용하는 정도를 알 수 있다. 전기영동을 이용하므로 핵산에는 방사성 동위원소나 형광 단백질을 이용하여 표지를 한다. (ko) 電移位切試驗（英语：Electrophoretic mobility shift assay）是一種分子生物學試驗，用来檢測蛋白質有没有和核酸發生親和作用。試驗將没有放入核酸的蛋白質和放入核酸的蛋白質作比較，經過凝膠電泳，體積比較大的分子會移動得比較近，而體積比較小的分子會移動得比較遠。通過觀察分子在凝膠中移動形成的條紋，可以知道蛋白質有没有和核酸發生親和作用。 (zh) |
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