Введение чужеродного генетического материала с использованием векторов; векторы; использование их хозяев; регулирование экспрессии — C12N 15/63 — МПК (original) (raw)

Способ трансформации возбудителя чумы

Номер патента: 1597393

Опубликовано: 07.10.1990

МПК: C12N 15/63

...и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Иасква, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "11 атент, г.ужгород, ул . Гагарина, 101 П р и м е р. ДНК нативной плазмиды рСай (47 Мй) выделяют из моноплазмидного штамма ультрацептрифугированием в градиенте плотности хлористого цезия. Лвирулецтный бесплазмидный штамм 10 возбудителя чумы, несущий хромосомцые маркеры Ррп и РзТвыращивают на3агаре Хоттингера (рН ,2) в течение 18-24 ч прц 28 С. Клетки дважды отмывают холодной дистиллированной водой и ресуспендируют в 0,1 -ной пептоцной воде. Гзвесь клеток смешивают с препаратом ДНК так что 1 мкг плазмидной ДНК приходится на 110 клеток реципиента, и подвергают процедуре криотрацсформации путем замораживация при -195 С в течение...

Фаговый вектор к9 для конструирования геномных библиотек

Номер патента: 1650698

Опубликовано: 23.05.1991

Авторы: Забаровский, Киселев, Турина

МПК: C12N 15/63

Метки: библиотек, вектор, геномных, конструирования, фаговый

...0,7 о -нойлегкоплавкой агарозе (препарат А), ДН К фага ЛдЕЯ 7 гидролизуют рестриктазой Вав и"плечи" очищают гель-электрофореэом влегкоплавкой агарозе (препарат Б). Препа 35 раты А и Б в эквимолярных соотношенияхсмешивают и лигируют. Лигированную ДН Купаковывают в белки фага А 1 п и 1 тго и полученные фаговые частицы рассевают на газон клеток Е.соП; штаммЕ 392. Из шести40 бляшек наращивают фаг, выделяют ДНК ианализируют с помощью рестриктаз ЕсоВ 1,Вав 1 и Яаб. Один из фагов, названный ЯЯК 9,имеет ожидаемую структуру и используетсядля конструирования репрезентативных ге 45 номных библиотек,Применение МЯК 9. Фаг ЯЯК 9 удобен дляполучения репрезентативных геномныхбиблиотек по "классической" методике.ДНК фага МЯК 9 гидролизуют 10-кратными...

Фаговый вектор замещения к15 для конструирования библиотек структурных генов к днк

Номер патента: 1650699

Опубликовано: 23.05.1991

Авторы: Забаровский, Загорская, Киселев

МПК: C12N 15/63

Метки: библиотек, вектор, генов, днк, замещения, конструирования, структурных, фаговый

...липких концов и конструирование библиотек без применения метилаз, К кДНК 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 пришиваются линкерь; за 1 (или Х 1 а 1) без предварительной обработки метилазай. Г 1 аскольку рестриктаза зз 1 щепит эукариатическую ДНК редко (один участок узнавания на 50 т.п,н.) и преимущественно в регуляторных областях, которые не представлены в кДНК, то последующий гидролиз кДНК рестриктазой за 1 не приведет к существенному изменению размеров кДНК. После инактивации фермента проводят в соответствующей инкубационной среде частичную достройку липких концов ДНК фрагментом Кленова (или ревертазой) в присутствии г СТР и 0 ТТР. ДНК 15 К 15 гидрализуют рестриктазами Есой 1 и Вап 1 1 и затем проводят частичную достройку липких концов...